
Rui Huang,Bo Xu
申請研發中心
介紹
離子交換色譜法(IEC)是一種色譜法,通常用於分離和純化溶液中離子形式呈現的化合物。根據可交換離子的不同電荷狀態,IEC可以分為兩種類型,即陽離子交換色譜和陰離子交換色譜法。在陽離子交換色譜中,將酸性基團粘合到分離培養基的表面。例如,磺酸(-SO3H)是強陽離子交換(SCX)中的一個常用組,該組分解了H+,而帶負電荷的基團-SO3-因此可以吸收溶液中的其他陽離子。在陰離子交換色譜法中,鹼基團粘合到分離培養基的表面。例如,季胺(-nr3OH,r是碳氫化合物基)通常用於強陰離子交換(SAX),後者分離OH-,而帶電的基團-n+R3可以吸附溶液中的其他陰離子,從而產生陰離子交換效應。
在天然產品中,類黃酮引起了研究人員的注意,因為它們在預防和治療心血管疾病中的作用。由於類黃酮分子由於存在酚類羥基而具有酸性,因此除了常規的正常相或反轉相色譜法以分離和純化這些酸性化合物外,離子交換色譜也是一種替代選擇。在閃光色譜法中,用於離子交換的常用分離介質是矽膠基質,其中離子交換基團粘合到其表面。閃光色譜中最常用的離子交換模式是SCX(通常是磺酸基)和SAX(通常是第四紀胺基)。在先前發表的申請註釋中,標題為“ Santai Technologies在鹼性化合物純化中的隔flash強陽離子交換色譜柱的應用”中,SCX柱用於純化鹼化合物。在這篇文章中,將中性和酸性標準標準的混合物用作探索薩克斯柱在酸性化合物純化中的應用。
實驗部分
圖1。與薩克斯分離介質表面粘結的固定相的示意圖。
在這篇文章中,使用了一個預先包裝的第四紀胺鍵二氧化矽的薩克斯柱(如圖1所示)。將鉻酮和2,4-二羥基苯甲酸的混合物用作要純化的樣品(如圖2所示)。將混合物溶解在甲醇中,並通過噴油器將其加載到閃光燈盒上。表1列出了閃光純化的實驗設置。
圖2。樣品混合物中兩個成分的化學結構。
樂器 | Sepabean™機器t | |||||
墨水匣 | 4 G Sepaflash標準系列閃存彈藥筒(不規則二氧化矽,40-63μm,60Å,訂單編號:S-5101-0004) | 4 G Sepaflash鍵合系列SAX Flash彈藥筒(不規則二氧化矽,40-63μm,60Å,訂單編號:SW-5001-004-IR) | ||||
波長 | 254 nm(檢測),280 nm(監視) | |||||
移動階段 | 溶劑A:n-己烷 | |||||
溶劑B:乙酸乙酯 | ||||||
流速 | 30毫升/分鐘 | 20毫升/分鐘 | ||||
樣品加載 | 20 mg(組件A和組件B的混合物) | |||||
坡度 | 時間(簡歷) | 溶劑B(%) | 時間(簡歷) | 溶劑B(%) | ||
0 | 0 | 0 | 0 | |||
1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
3.7 | 12 | / | / | |||
16 | 100 | / | / | |||
18 | 100 | / | / |
結果與討論
首先,將樣品混合物通過預先包裝的常規閃光彈藥筒分離。如圖3所示,樣品中的兩個組件接一個地從墨盒中洗脫。接下來,使用薩克斯閃存彈藥筒來純化樣品。如圖4所示,酸性成分B完全保留在薩克斯盒上。隨著流動相洗脫,中性成分A逐漸從墨盒中洗脫。
圖3。在常規正常相墨盒上樣品的閃光色譜圖。
圖4。薩克斯盒上樣品的閃光色譜圖。
比較圖3和圖4,組件A在兩個不同的閃光鏡片上具有不一致的峰形狀。為了確認洗脫峰是否與組件相對應,我們可以利用Sepabean™機器控制軟件中內置的完整波長掃描功能。打開兩個分離的實驗數據,在色譜圖中的時軸(CV)上的指示線至最高點,而洗脫峰的最高點和對應於組件A的第二高點,這兩個點的完整波長光譜將自動顯示為色譜圖(如圖5和圖6所示)。比較了這兩個分離的完整波長光譜數據,在兩個實驗中,組件A具有一致的吸收光譜。由於組件A在兩個不同的閃光燈盒上具有不一致的峰形狀,因此據推測,組件A中存在特定的雜質,該雜質在正常相墨盒和薩克斯盒上具有不同的保留率。因此,分量A的洗脫順序是不同的,並且在這兩個閃光子彈上的雜質導致色譜圖上的峰形不一致。
圖5。組件A的完整波長光譜和正常相墨盒隔開的雜質。
圖6。組件A的完整波長光譜和薩克斯彈藥筒隔開的雜質。
如果要收集的目標產物是中性組件A,則可以通過直接使用SAX墨盒在樣品加載後輕鬆完成純化任務。另一方面,如果要收集的目標產物是酸性成分B,則可以在實驗步驟中輕微調整捕獲釋放的方式:當將樣品加載到SAX墨盒上,而中性成分A將中性成分A完全用正常相的有機或含有正常相的有機溶液完全洗脫,請將移動相轉換為含5%乙醇的甲醇溶液。流動階段中的乙酸離子將與組件B競爭,以結合薩克斯彈藥筒的固定相的第四紀胺離子基,從而從墨盒中解脫了組件B以獲得目標產物。在離子交換模式下分離的樣品的色譜圖如圖7所示。
圖7。在薩克斯盒上以離子交換模式洗脫的組件B的閃光色譜圖。
總之,使用不同的純化策略,可以通過薩克斯盒以及正常相墨盒迅速純化酸性或中性樣品。此外,在Sepabean™機器控制軟件中內置的全波長掃描功能的幫助下,可以輕鬆地比較和確認洗脫部分的特徵吸收光譜,從而幫助研究人員迅速確定洗脫部分的組成和純度,從而提高工作效率。
項目編號 | 列大小 | 流速 (ml/min) | 最大壓力 (psi/bar) |
SW-5001-004-IR | 5.9 g | 10-20 | 400/27.5 |
SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27.5 |
SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27.5 |
SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27.5 |
SW-5001-080-IR | 122 g | 30-60 | 350/24.0 |
SW-5001-120-IR | 180克 | 40-80 | 300/20.7 |
SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/20.7 |
SW-5001-330-IR | 475 g | 50-100 | 250/17.2
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表2。Sepaflash鍵合系列SAX閃光燈彈藥筒。填料材料:超純淨的不規則薩克斯鍵二氧化矽,40-63μm,60Å。
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發佈時間:2018年11月9日