SepaFlash強陰離子交換層析管在酸性化合物純化的應用

結果與討論

首先，透過預裝普通二氧化矽的正相快速管柱分離樣品混合物。如圖3所示，樣品中的兩種成分相繼從管柱中洗脫出來。接下來，使用 SAX 快速柱純化樣品。如圖 4 所示，酸性組分 B 完全保留在 SAX 柱上。中性組分A隨著流動相的洗脫逐漸從柱中洗脫出來。

圖 3. 常規正相小柱上樣品的快速層析圖。

圖 4. SAX 小柱上樣品的快速層析圖。
比較圖 3 和圖 4，組成 A 在兩個不同的快閃記憶體盒上具有不一致的峰形。為了確認洗脫峰是否與組件相對應，我們可以利用SepaBean™機器控制軟體內建的全波長掃描功能。開啟兩次分離的實驗數據，將色譜圖中時間軸（CV）上的指示線拖至A組分對應的洗脫峰的最高點和第二高點，即為這兩個組分的全波長譜點將自動顯示在色譜圖下方（如圖 5 和圖 6 所示）。比較兩次分離的全波長光譜數據，兩次實驗中組分A的吸收光譜一致。由於A組分在兩種不同的閃蒸柱上峰形不一致，推測A組分中存在特定雜質，在正相柱和SAX柱上的保留不同。因此，這兩個閃蒸柱上組分 A 和雜質的洗脫順序不同，導致色譜圖上的峰形不一致。

圖 5. 正相柱分離組分 A 和雜質的全波長譜。

圖 6. SAX 管柱分離的組分 A 和雜質的全波長光譜。

如果要收集的目標產物是中性組分A，則上樣後直接使用SAX小柱進行洗脫即可輕鬆完成純化任務。另一方面，如果要收集的目標產物是酸性組分B，只需在實驗步驟上稍加調整即可採用捕獲-釋放方式：當樣品裝載在SAX小柱上時，中性組分A用正相有機溶劑完全洗脫後，將流動相改為含5%乙酸的甲醇溶液。流動相中的乙酸根離子將與組分B競爭與SAX小柱固定相上的季胺離子基團結合，從而將組分B從小柱上洗脫下來，得到目標產物。離子交換模式分離樣品的層析圖如圖7所示。

圖 7. 在 SAX 管柱上以離子交換模式洗脫的組分 B 的快速層析圖。

總之，SAX 柱與正相柱結合使用不同的純化策略可以快速純化酸性或中性樣品。此外，借助SepaBean™機器控制軟體內建的全波長掃描功能，可以輕鬆比較和確認洗脫組分的特徵吸收光譜，幫助研究人員快速確定洗脫組分的組成和純度，從而提高洗脫組分的純度。工作效率。