
Rui Huang,Bo Xu
申請研發中心
介紹
肽是由氨基酸組成的化合物,由於氨基酸的不同類型和順序構成其序列,它們的氨基酸具有獨特的物理和化學性質。隨著固相化學合成的發展,各種活性肽的化學合成取得了長足的進步。但是,由於通過固相合成獲得的肽的複雜組成,應通過可靠的分離方法純化最終產物。肽的常用純化方法包括離子交換色譜(IEC)和相位高性能液態色譜(RP-HPLC),這些液體色譜(RP-HPLC)具有低樣品負載能力的缺點,分離介質的高成本,複雜且昂貴的分離設備等。 Sepaflash RP C18彈藥筒用於胸腺激素的快速純化(TP-5),並獲得了滿足要求的目標產品。
圖1。20個常見氨基酸(從www.bachem.com複製)。
肽組成中有20種常見的氨基酸。這些氨基酸可以根據其極性和酸鹼特性將以下組分為以下組:非極性(疏水),極性(未充電),酸性或鹼性(如圖1所示)。在肽序列中,如果構成序列的氨基酸主要是極性的(如圖1中標記為粉紅色),例如半胱氨酸,谷氨酰胺,天冬胺,絲氨酸,絲氨酸,酪氨酸,酪氨酸等。在通過反相色譜法的這些強極肽樣品的純化過程中,將發生一種稱為疏水相塌陷的現象(請參閱Santai Technologies先前發表的申請註釋:疏水相崩潰,AQ反向相反向相相色譜柱及其應用)。與常規的C18柱相比,改進的C18AQ柱最適合純化強極或親水樣品。在這篇文章中,將強極極性肽用作樣品,並通過C18AQ色譜柱純化。結果,符合要求的目標產品已獲得,可以在以下研究和開發中使用。
樂器 | Sepabean™機器2 | |||
墨水匣 | 12 g Sepaflash C18 RP閃光盒(球形二氧化矽,20-45μm,100Å,訂購Nunber:SW-5222-012-SP) | 12 g Sepaflash C18AQ RP閃光盒(球形二氧化矽,20-45μm,100Å,訂單編號:SW-5222-012-SP(aq)) | ||
波長 | 254 nm,220 nm | 214 nm | ||
移動階段 | 溶劑A:水 溶劑B:乙腈 | |||
流速 | 15毫升/分鐘 | 20毫升/分鐘 | ||
樣品加載 | 30 mg | |||
坡度 | 時間(簡歷) | 溶劑B(%) | 時間(最小) | 溶劑B(%) |
0 | 0 | 0 | 4 | |
1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
/ | / | 20.0 | 38 | |
22.0 | 87 | |||
29.0 | 87 |
結果與討論
為了比較普通C18列和C18AQ列之間極性肽樣品的純化性能,我們利用常規的C18列來開始樣品的閃光淨化。如圖2所示,由於高水比引起的C18鏈的疏水相塌陷,該樣品幾乎沒有保留在常規C18彈藥筒上,並直接被流動相洗脫。結果,樣品沒有有效分離和純化。
圖2。常規C18墨盒上樣品的閃光色譜圖。
接下來,我們使用C18AQ列進行樣品的閃光純化。如圖3所示,肽有效地保留在色譜柱上,然後洗脫。將目標產物與原始樣品中的雜質分開並收集。凍乾後,然後通過HPLC分析,純化的產品的純度為98.2%,可以進一步用於下一步的研發。
圖3。在C18AQ墨盒上樣品的閃光色譜圖。
總之,Sepaflash C18AQ RP Flash墨盒與閃光色譜系統Sepabean結合™機器可以為純化強極或親水樣品提供快速有效的解決方案。
有一系列的Sepaflash C18AQ RP Flash彈藥筒,具有Santai技術的不同規格(如表2所示)。
項目編號 | 列大小 | 流速 (ml/min) | 最大壓力 (psi/bar) |
SW-5222-004-SP(aq) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
SW-5222-012-SP(aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
SW-5222-025-SP(aq) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
SW-5222-040-SP(aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
SW-5222-080-SP(aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
SW-5222-120-SP(AQ) | 155克 | 30-60 | 300/20.7 |
SW-5222-220-SP(aq) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
SW-5222-330-SP(aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
表2。SepaflashC18AQ RP Flash彈藥筒。填料材料:高效球形C18(aq)含有二氧化矽,20-45μm,100Å。
有關Sepabean™機器詳細規格的更多信息,或有關Sepaflash系列Flash Cartridges的訂購信息,請訪問我們的網站。
發佈時間:2018年10月12日