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C18AQ色譜柱在純淨的極性肽純化中的應用

C18AQ色譜柱在純淨的極性肽純化中的應用

Rui Huang,Bo Xu
申請研發中心

介紹
肽是由氨基酸組成的化合物,由於氨基酸的不同類型和順序構成其序列,它們的氨基酸具有獨特的物理和化學性質。隨著固相化學合成的發展,各種活性肽的化學合成取得了長足的進步。但是,由於通過固相合成獲得的肽的複雜組成,應通過可靠的分離方法純化最終產物。肽的常用純化方法包括離子交換色譜(IEC)和相位高性能液態色譜(RP-HPLC),這些液體色譜(RP-HPLC)具有低樣品負載能力的缺點,分離介質的高成本,複雜且昂貴的分離設備等。 Sepaflash RP C18彈藥筒用於胸腺激素的快速純化(TP-5),並獲得了滿足要求的目標產品。

圖1。20個常見氨基酸(從www.bachem.com複製)。

肽組成中有20種常見的氨基酸。這些氨基酸可以根據其極性和酸鹼特性將以下組分為以下組:非極性(疏水),極性(未充電),酸性或鹼性(如圖1所示)。在肽序列中,如果構成序列的氨基酸主要是極性的(如圖1中標記為粉紅色),例如半胱氨酸,谷氨酰胺,天冬胺,絲氨酸,絲氨酸,酪氨酸,酪氨酸等。在通過反相色譜法的這些強極肽樣品的純化過程中,將發生一種稱為疏水相塌陷的現象(請參閱Santai Technologies先前發表的申請註釋:疏水相崩潰,AQ反向相反向相相色譜柱及其應用)。與常規的C18柱相比,改進的C18AQ柱最適合純化強極或親水樣品。在這篇文章中,將強極極性肽用作樣品,並通過C18AQ色譜柱純化。結果,符合要求的目標產品已獲得,可以在以下研究和開發中使用。

實驗部分
實驗中使用的樣本是合成肽,該肽由客戶實驗室提供。肽在MW中約為1 kDa,由於其序列中多個極性氨基酸殘基,其極性具有很強的極性。原始樣本的純度約為80%。為了製備樣品溶液,將60 mg白色粉狀粗樣品溶解在5 ml純水中,然後進行超聲封裝,以使其成為完全清晰的溶液。然後將樣品解決方案通過噴油器注入閃光列。表1列出了閃光純化的實驗設置。

樂器

Sepabean機器2

墨水匣

12 g Sepaflash C18 RP閃光盒(球形二氧化矽,20-45μm,100Å,訂購Nunber:SW-5222-012-SP)

12 g Sepaflash C18AQ RP閃光盒(球形二氧化矽,20-45μm,100Å,訂單編號:SW-5222-012-SP(aq))

波長

254 nm,220 nm

214 nm

移動階段

溶劑A:水

溶劑B:乙腈

流速

15毫升/分鐘

20毫升/分鐘

樣品加載

30 mg

坡度

時間(簡歷)

溶劑B(%)

時間(最小)

溶劑B(%)

0

0

0

4

1.0

0

1.0

4

10.0

6

7.5

18

12.5

6

13.0

18

16.5

10

14.0

22

19.0

41

15.5

22

21.0

41

18.0

38

/

/

20.0

38

22.0

87

29.0

87

表1。閃光淨化的實驗設置。

結果與討論
為了比較普通C18列和C18AQ列之間極性肽樣品的純化性能,我們利用常規的C18列來開始樣品的閃光淨化。如圖2所示,由於高水比引起的C18鏈的疏水相塌陷,該樣品幾乎沒有保留在常規C18彈藥筒上,並直接被流動相洗脫。結果,樣品沒有有效分離和純化。

圖2。常規C18墨盒上樣品的閃光色譜圖。

接下來,我們使用C18AQ列進行樣品的閃光純化。如圖3所示,肽有效地保留在色譜柱上,然後洗脫。將目標產物與原始樣品中的雜質分開並收集。凍乾後,然後通過HPLC分析,純化的產品的純度為98.2%,可以進一步用於下一步的研發。

圖3。在C18AQ墨盒上樣品的閃光色譜圖。

總之,Sepaflash C18AQ RP Flash墨盒與閃光色譜系統Sepabean結合機器可以為純化強極或親水樣品提供快速有效的解決方案。

關於Sepaflash C18AQ RP Flash墨盒

有一系列的Sepaflash C18AQ RP Flash彈藥筒,具有Santai技術的不同規格(如表2所示)。

項目編號

列大小

流速

(ml/min)

最大壓力

(psi/bar)

SW-5222-004-SP(aq)

5.4 g

5-15

400/27.5

SW-5222-012-SP(aq)

20 g

10-25

400/27.5

SW-5222-025-SP(aq)

33 g

10-25

400/27.5

SW-5222-040-SP(aq)

48 g

15-30

400/27.5

SW-5222-080-SP(aq)

105 g

25-50

350/24.0

SW-5222-120-SP(AQ)

155克

30-60

300/20.7

SW-5222-220-SP(aq)

300 g

40-80

300/20.7

SW-5222-330-SP(aq)

420 g

40-80

250/17.2

表2。SepaflashC18AQ RP Flash彈藥筒。填料材料:高效球形C18(aq)含有二氧化矽,20-45μm,100Å。

有關Sepabean™機器詳細規格的更多信息,或有關Sepaflash系列Flash Cartridges的訂購信息,請訪問我們的網站。


發佈時間:2018年10月12日