王王，博Xu
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介紹
根據固定相和流動相的相對極性，液相色譜可以分為正常相色譜法（NPC）和相反的相色譜法（RPC）。對於RPC，流動相的極性比固定相的極性強。由於其高效率，良好的分辨率和清晰的保留機制，RPC已成為液相色譜分離模式中最廣泛使用的。 Therefore RPC is suitable for the separation and purification of various polar or non-polar compounds, including alkaloids, carbohydrates, fatty acids, steroids, nucleic acids, amino acids, peptides, proteins, etc. In RPC, the most commonly used stationary phase is the silica gel matrix which is bonded with various functional groups, including C18, C8, C4, phenyl, cyano,在這些粘合官能團中，使用最廣泛的官能團是C18。據估計，現在有80％以上的RPC使用C18鍵相。因此，C18色譜柱已成為每個實驗室的必備通用柱。
儘管C18色譜柱可以在非常廣泛的應用中使用，但是對於某些非常極性或高度親水性的樣品，常規C18色譜柱在用於淨化此類樣品時可能會出現問題。在RPC中，可以根據其極性來訂購常用的洗脫溶劑：水<甲醇<乙腈<乙醇<乙醇<tetrahydrofuran <異丙醇。為了確保這些樣品（強極或高度親水性）對色譜柱的良好保留，必須將高比例的水系統用作流動相。但是，當使用純淨水系統（包括純水或純鹽溶液）作為流動相時，C18柱固定相位的長碳鏈傾向於避免水並相互混合，從而瞬間降低了柱的保留能力，甚至沒有保留。該現象稱為“疏水相塌陷”（如圖1的左側所示）。儘管當色譜柱用甲醇或乙腈等有機溶劑洗滌時，這種情況是可逆的，但仍可能對色譜柱造成損害。因此，有必要防止這種情況發生。
圖1。常規C18柱（左）和C18AQ列（右）中矽膠表面上的鍵相圖表。
為了解決上述問題，色譜包裝材料製造商已經進行了技術改進。這些改進之一是對二氧化矽基質的表面進行一些修改，例如引入親水性氰基基團（如圖1的右側所示），以使矽膠的表面更加親水。因此，在高度水性條件下可以完全延伸二氧化矽表面的C18鏈，並且可以避免疏水相塌陷。這些修飾的C18列稱為水C18柱，即C18AQ柱，該列是為高度水性洗脫條件而設計的，並且可以耐受100％的水性系統。 C18AQ柱已被廣泛應用於強極性化合物的分離和純化，包括有機酸，肽，核苷和水溶性維生素。
脫鹽是C18AQ色譜柱在樣品的閃光純化中的典型應用之一，它去除樣品溶劑中的鹽或緩衝液成分，以促進樣品在隨後的研究中的應用。在這篇文章中，將具有強極性的輝煌藍色FCF用作樣品，並在C18AQ柱上純化。樣品溶劑被緩衝溶液中的有機溶劑代替，從而促進了以下旋轉蒸發以及節省溶劑和工作時間。此外，通過去除樣品中的一些雜質來提高樣品的純度。
實驗部分
圖2。樣品的化學結構。
在這篇文章中，鮮豔的藍色FCF用作樣本。原始樣品的純度為86％，樣品的化學結構如圖2所示。為了製備樣品溶液，將300 mg粉狀的粉狀固體固體溶解在1 M NAH2PO4緩衝液中，並搖晃得很好，以成為完全清晰的溶液。然後將樣品解決方案通過噴油器注入閃光列。表1列出了閃光純化的實驗設置。
| 樂器 | Sepabean™機器2 | |||
| 墨水匣 | 12 g Sepaflash C18 RP閃光盒（球形二氧化矽，20-45μm，100Å，訂單號：SW-5222-012-SP） | 12 g Sepaflash C18AQ RP閃光盒（球形二氧化矽，20-45μm，100Å，訂單編號：SW-5222-012-SP（AQ）)（） | ||
| 波長 | 254 nm | |||
| 移動階段 | 溶劑A：水 溶劑B：甲醇 | |||
| 流速 | 30毫升/分鐘 | |||
| 樣品加載 | 300毫克（純淨的藍色FCF，純度為86％） | |||
| 坡度 | 時間（簡歷） | 溶劑B（％） | 時間（簡歷） | 溶劑B（％） |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
結果與討論
Sepaflash C18AQ RP閃存彈藥盒用於樣品脫鹽和純化。使用了階梯梯度，其中使用純水在洗脫時用作流動相，並以10列體積（CV）運行。如圖3所示，當使用純水作為流動相時，樣品被完全保留在閃光燈盒上。接下來，流動階段的甲醇直接增加到100％，並維持7.5 CV的梯度。將樣品從11.5 cv洗脫。在收集的餾分中，將樣品溶液從NAH2PO4緩衝溶液替換為甲醇。與高度水溶液相比，在隨後的步驟中旋轉蒸發可以更容易去除甲醇，從而促進了以下研究。
圖3。在C18AQ墨盒上樣品的閃光色譜圖。
為了比較C18AQ彈藥筒和常規C18墨盒的保留行為，以進行強度強的樣品，進行了平行比較測試。使用了Sepaflash C18 RP閃光盒，樣品的閃光色譜圖如圖4所示。對於常規C18墨盒，最高耐受的水相比為90％。因此，在90％水中，開始梯度為10％甲醇。如圖4所示，由於高水比引起的C18鏈的疏水相塌陷，該樣品幾乎沒有保留在常規C18彈藥筒上，並直接通過流動相洗脫。結果，無法完成樣品脫鹽或純化的操作。
圖4。常規C18墨盒上樣品的閃光色譜圖。
與線性梯度相比，使用步驟梯度具有以下優點：
1。溶劑使用和样品純化的運行時間。
2。目標產物在尖銳的峰值上洗脫，從而減少了收集的分數的體積，從而促進了以下旋轉蒸發並節省了時間。
3。收集的產物是甲醇，易於蒸發，因此減少了乾燥時間。
總之，對於極性或高度親水性的樣品的純化，Sepaflash C18AQ RP閃光鏡片與製備閃光色譜系統Sepabean™機器結合使用，可以提供快速有效的解決方案。
關於Sepaflash綁定係列C18 RP Flash墨盒
有一系列的Sepaflash C18AQ RP Flash彈藥筒，具有Santai技術的不同規格（如表2所示）。
| 項目編號 | 列大小 | 流速 （ml/min） | 最大壓力 （psi/bar） |
| SW-5222-004-SP（aq） | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP（aq） | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP（aq） | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP（aq） | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP（aq） | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP（AQ） | 155克 | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP（aq） | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP（aq） | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
表2。SepaflashC18AQ RP Flash彈藥筒。
填料材料：高效球形C18（aq）含有二氧化矽，20-45μm，100Å。
logy（如表2所示）。
發佈時間：2018年8月27日