Hongcheng Wang, Bo Xu
Ohun elo R&D Center
Ifaara
Ni ibamu si awọn ojulumo polarities ti adaduro alakoso ati mobile alakoso, omi kiromatogirafi le ti wa ni pin si deede alakoso kiromatogirafi (NPC) ati ifasilẹ awọn chromatography alakoso (RPC).Fun RPC, polarity ti alakoso alagbeka ni okun sii ju ti ipele iduro.RPC ti di ọkan ti a lo pupọ julọ ni awọn ipo iyapa kiromatogiramu omi nitori ṣiṣe giga rẹ, ipinnu to dara ati ẹrọ idaduro mimọ.Nitorina RPC dara fun iyapa ati isọdi ti awọn orisirisi pola tabi awọn agbo ogun ti kii-pola, pẹlu alkaloids, carbohydrates, fatty acids, sitẹriọdu, nucleic acids, amino acids, peptides, proteins, bbl Ni RPC, awọn julọ commonly lo adaduro alakoso ni. matrix gel silica eyiti o ni asopọ pẹlu awọn ẹgbẹ iṣẹ ṣiṣe lọpọlọpọ, pẹlu C18, C8, C4, phenyl, cyano, amino, bbl Lara awọn ẹgbẹ iṣẹ ti o ni asopọ, ọkan ti a lo julọ ni C18.O ti ṣe iṣiro pe diẹ sii ju 80% ti RPC ti nlo ni bayi ni ipele isunmọ C18.Nitorinaa iwe kiromatogiramu C18 ti di iwe-aṣẹ ti gbogbo agbaye gbọdọ ni fun gbogbo yàrá.
Botilẹjẹpe iwe C18 le ṣee lo ni ọpọlọpọ awọn ohun elo pupọ, sibẹsibẹ, fun diẹ ninu awọn apẹẹrẹ ti o jẹ pola pupọ tabi giga hydrophilic, awọn ọwọn C18 deede le ni awọn iṣoro nigba lilo lati sọ iru awọn apẹẹrẹ di mimọ.Ni RPC, awọn epo epo elution ti o wọpọ ni a le paṣẹ ni ibamu si polarity wọn: omi
Ṣe nọmba 1. Aworan apẹrẹ ti awọn ipele ti o ni asopọ lori oju ti gel silica ni deede C18 iwe (osi) ati C18AQ iwe (ọtun).
Lati koju awọn iṣoro ti a darukọ loke, awọn aṣelọpọ awọn ohun elo iṣakojọpọ chromatographic ti ṣe awọn ilọsiwaju imọ-ẹrọ.Ọkan ninu awọn ilọsiwaju wọnyi ni ṣiṣe diẹ ninu awọn iyipada lori dada ti matrix silica, gẹgẹbi iṣafihan awọn ẹgbẹ cyano hydrophilic (gẹgẹbi a ṣe han ni apa ọtun ti Nọmba 1), lati ṣe oju ti gel silica diẹ sii hydrophilic.Nitorinaa awọn ẹwọn C18 lori dada silica le ni ilọsiwaju ni kikun labẹ awọn ipo olomi pupọ ati pe o le yago fun iṣubu ipele hydrophobic.Awọn ọwọn C18 wọnyi ti a ṣe atunṣe ni a pe ni awọn ọwọn C18 olomi, eyun awọn ọwọn C18AQ, eyiti a ṣe apẹrẹ fun awọn ipo elution olomi pupọ ati pe o le fi aaye gba eto 100% olomi.Awọn ọwọn C18AQ ti ni lilo pupọ ni ipinya ati isọdọmọ ti awọn agbo ogun pola ti o lagbara, pẹlu awọn acids Organic, awọn peptides, awọn nucleosides ati awọn vitamin tiotuka omi.
Desalting jẹ ọkan ninu awọn ohun elo aṣoju ti awọn ọwọn C18AQ ni iwẹnumọ filasi fun awọn apẹẹrẹ, eyiti o yọ iyọ tabi awọn ohun elo ifipamọ kuro ninu epo-itumọ lati dẹrọ ohun elo ti apẹẹrẹ ni awọn ikẹkọ atẹle.Ninu ifiweranṣẹ yii, FCF buluu ti o wuyi pẹlu polarity to lagbara ni a lo bi apẹẹrẹ ati mimọ lori iwe C18AQ.Omi epo ti a rọpo ni a rọpo nipasẹ ohun elo Organic lati ojutu ifipamọ, nitorinaa ni irọrun evaporation yiyi bi daradara bi fifipamọ awọn olomi ati akoko iṣẹ.Pẹlupẹlu, mimọ ti ayẹwo naa ni ilọsiwaju nipasẹ yiyọ diẹ ninu awọn aimọ ninu ayẹwo naa.
Abala adanwo
Ṣe nọmba 2. Ilana kemikali ti ayẹwo.
Blue FCF ti o wuyi ni a lo bi apẹẹrẹ ni ifiweranṣẹ yii.Mimo ti awọn aise ayẹwo je 86% ati awọn kemikali be ti awọn ayẹwo ti a han ni Figure 2. Lati ṣeto awọn ayẹwo ojutu, 300 mg powdery robi ri to ti Brilliant Blue FCF ni tituka ni 1 M NaH2PO4 ojutu saarin ati ki o mì daradara lati di a patapata ko o ojutu.Ojutu ayẹwo lẹhinna itasi sinu iwe filasi nipasẹ abẹrẹ kan.Iṣeto idanwo ti iwẹnumọ filasi jẹ atokọ ni Tabili 1.
| Irinse | Ẹrọ SepaBean™2 | |||
| Awọn katiriji | 12 g SepaFlash C18 RP filasi katiriji (silika ti iyipo, 20 - 45 μm, 100 Å, Nọmba aṣẹ: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP filasi katiriji (silika ti iyipo, 20 - 45 μm, 100 Å, Nọmba aṣẹ：SW-5222-012-SP(AQ))) | ||
| Igi gigun | 254nm | |||
| Mobile alakoso | Solusan A: Omi Solusan B: kẹmika | |||
| Oṣuwọn sisan | 30 milimita / min | |||
| Apeere ikojọpọ | 300 miligiramu (FCF buluu ti o ni didan pẹlu mimọ ti 86%) | |||
| Ilọsiwaju | Àkókò (CV) | Solusan B (%) | Àkókò (CV) | Solusan B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Awọn abajade ati ijiroro
A SepaFlash C18AQ RP filaṣi katiriji ti a lo fun ayẹwo desalting ati ìwẹnumọ.A lo iwọn-igbesẹ ninu eyiti o jẹ lilo omi mimọ gẹgẹbi apakan alagbeka ni ibẹrẹ elution ati ṣiṣe fun awọn iwọn iwe 10 (CV).Bi o ṣe han ni Nọmba 3, nigba lilo omi mimọ bi alakoso alagbeka, ayẹwo naa ti wa ni idaduro patapata lori katiriji filasi.Nigbamii ti, kẹmika ti o wa ninu ipele alagbeka ti pọ si taara si 100% ati pe a tọju gradient fun 7.5 CV.Ayẹwo naa ti yọ jade lati 11.5 si 13.5 CV.Ninu awọn ida ti a gba, a rọpo ojutu ayẹwo lati ojutu ifipamọ NaH2PO4 si kẹmika.Ni ifiwera pẹlu ojutu olomi pupọ, methanol rọrun pupọ lati yọkuro nipasẹ evaporation rotari ni igbesẹ ti o tẹle, eyiti o rọrun fun iwadii atẹle.
Ṣe nọmba 3. Kromatogram filasi ti apẹẹrẹ lori katiriji C18AQ.
Lati ṣe afiwe ihuwasi idaduro ti C18AQ katiriji ati katiriji C18 deede fun awọn ayẹwo ti polarity ti o lagbara, idanwo afiwera ti o jọra ni a ṣe.A sepaFlash C18 RP filaṣi katiriji filasi ti a lo ati chromatogram filasi fun apẹẹrẹ ti han ni Nọmba 4. Fun awọn katiriji C18 deede, ipin ipele ipele olomi ti o ga julọ jẹ nipa 90%.Nitorinaa a ṣeto gradient ibẹrẹ si 10% methanol ni 90% omi.Gẹgẹbi o ti han ni Nọmba 4, nitori iṣubu alakoso hydrophobic ti awọn ẹwọn C18 ti o fa nipasẹ ipin olomi giga, a ti fi ayẹwo naa duro ni irọra lori katiriji C18 deede ati pe o ti jade taara nipasẹ apakan alagbeka.Bi abajade, iṣẹ ti desalting ayẹwo tabi iwẹnumọ ko le pari.
Ṣe nọmba 4. Kromatogram filasi ti apẹẹrẹ lori katiriji C18 deede.
Ti a ṣe afiwe pẹlu gradient laini, lilo ipele gradient ni awọn anfani wọnyi:
1. Lilo ojutu ati akoko ṣiṣe fun isọdọtun ayẹwo ti dinku.
2. Ọja ibi-afẹde n yọkuro ni tente didasilẹ, eyiti o dinku iwọn didun ti awọn ida ti a gbajọ ati nitorinaa ṣe irọrun evaporation rotari atẹle bi daradara bi fifipamọ akoko.
3. Ọja ti a gba ni methanol ti o rọrun lati yọ kuro, nitorina akoko gbigbẹ dinku.
Ni ipari, fun isọdiwọn ayẹwo eyiti o jẹ pola ti o lagbara tabi hydrophilic giga, SepaFlash C18AQ RP awọn katiriji filasi apapọ pẹlu eto kiromatogiramu filasi igbaradi ti ẹrọ SepaBean ™ le funni ni iyara ati ojutu to munadoko.
Nipa SepaFlash iwe adehun Series C18 RP filasi katiriji
Awọn jara ti awọn katiriji filasi SepaFlash C18AQ RP pẹlu oriṣiriṣi awọn pato lati Imọ-ẹrọ Santai (bii o han ni Tabili 2).
| Nọmba Nkan | Iwọn Iwọn | Oṣuwọn sisan (milimita/iṣẹju) | O pọju.Titẹ (psi/ọgọ) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Table 2. SepaFlash C18AQ RP filasi katiriji.
Awọn ohun elo iṣakojọpọ: C18 (AQ) ti o ni agbara-giga ti o ni asopọ silica, 20 - 45 μm, 100 Å.
logy (bi o han ni Table 2).
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu Kẹjọ-27-2018