רוי הואַנג, באָ זו
אַפּפּליקאַטיאָן ר & די צענטער
הקדמה
א פּעפּטייד איז אַ קאַמפּאַונד וואָס איז קאַמפּאָוזד פון אַמינאָ אַסאַדז, יעדער פון וואָס האט יינציק גשמיות און כעמיש פּראָפּערטיעס רעכט צו דער פאַרשידענע טייפּס און סדר פון אַמינאָ זויער רעזאַדוז וואָס קאַנסטאַטוץ זייַן סיקוואַנס.מיט דער אַנטוויקלונג פון האַרט פאַסע כעמישער סינטעז, די כעמישער סינטעז פון פאַרשידן אַקטיוו פּעפּטיידז האט געמאכט גרויס פּראָגרעס.אָבער, רעכט צו דער קאָמפּליצירט זאַץ פון די פּעפּטייד באקומען דורך האַרט פאַסע סינטעז, די לעצט פּראָדוקט זאָל זיין פּיוראַפייד דורך פאַרלאָזלעך צעשיידונג מעטהאָדס.די קאַמאַנלי געוויינט רייניקונג מעטהאָדס פֿאַר פּעפּטיידז אַרייַננעמען יאָן וועקסל קראָומאַטאַגראַפי (IEC) און ריווערסט-פאַסע הויך פאָרשטעלונג פליסיק קראָומאַטאַגראַפי (RP-HPLC), וואָס האָבן די דיסאַדוואַנטידזשיז פון נידעריק מוסטער לאָודינג קאַפּאַציטעט, הויך פּרייַז פון צעשיידונג מעדיע, קאָמפּליצירט און טייַער צעשיידונג ויסריכט, אאז"ו ו פֿאַר די גיך רייניקונג פון קליין מאַלאַקיול פּעפּטיידז (מוו <1 kDa), אַ געראָטן אַפּלאַקיישאַן פאַל איז געווען פריער ארויס דורך Santai Technologies, אין וואָס אַ SepaFlash RP C18 פּאַטראָן איז יוטאַלייזד פֿאַר די גיך רייניקונג פון טהימאָפּענטין (TP-5) און די ציל פּראָדוקט וואָס טרעפן די רעקווירעמענץ איז באקומען.
פיגורע 1. 20 פּראָסט אַמינאָ אַסאַדז (ריפּראַדוסט פֿון www.bachem.com).
עס זענען 20 מינים פון אַמינאָ אַסאַדז וואָס זענען פּראָסט אין דער זאַץ פון פּעפּטיידז.די אַמינאָ אַסאַדז קענען זיין צעטיילט אין די פאלגענדע גרופּעס לויט זייער פּאָולעראַטי און זויער-באַזע פאַרמאָג: ניט-פּאָלאַר (הידראָפאָביק), פּאָליאַר (אַנטשאַרדזשד), אַסידיק אָדער יקערדיק (ווי געוויזן אין פיגורע 1).אין אַ פּעפּטייד סיקוואַנס, אויב די אַמינאָ אַסאַדז קאַנסטאַטוטינג די סיקוואַנס זענען מערסטנס פּאָליאַר אָנעס (ווי אנגעצייכנט אין ראָזעווע קאָליר אין פיגורע 1), אַזאַ ווי סיסטינע, גלוטאַמינע, אַספּאַראַגינע, סערינע, טהרעאָנינע, טיראָסינע, אאז"ו ו, דעם פּעפּטייד קען האָבן אַ שטאַרק פּאָולעראַטי און זיין העכסט סאַליאַבאַל אין וואַסער.בעשאַס די רייניקונג פּראָצעדור פֿאַר די שטאַרק פּאָליאַר פּעפּטייד סאַמפּאַלז דורך ריווערסט-פאַסע קראָומאַטאַגראַפי, אַ דערשיינונג גערופֿן הידראָפאָביק פאַסע ייַנבראָך וועט פּאַסירן (אָפּשיקן צו אַ פריער ארויס אַפּלאַקיישאַן באַמערקונג דורך Santai Technologies: הידראָפאָביק פאַסע קאַלאַפּס, AQ ריווערסט פאַסע קראָומאַטאַגראַפי קאָלומנס און זייער אַפּלאַקיישאַנז).קאַמפּערד מיט די רעגולער C18 שפאלטן, די ימפּרוווד C18AQ שפאלטן זענען מערסט פּאַסיק פֿאַר רייניקונג פון שטאַרק פּאָליאַר אָדער כיידראָופיליק סאַמפּאַלז.אין דעם פּאָסטן, אַ שטאַרק פּאָליאַר פּעפּטייד איז געניצט ווי דער מוסטער און פּיוראַפייד דורך אַ C18AQ זייַל.ווי אַ רעזולטאַט, דער ציל פּראָדוקט וואָס טרעפן די רעקווירעמענץ איז באקומען און קען זיין געוויינט אין די פאלגענדע פאָרשונג און אַנטוויקלונג.
| ינסטרומענט | SepaBean™מאַשין 2 | |||
| קאַרטראַדזשאַז | 12 ג SepaFlash C18 RP בליץ פּאַטראָן (ספעריש סילאַקאַ, 20-45 μm, 100 Å, סדר נומער: SW-5222-012-SP) | 12 ג SepaFlash C18AQ RP בליץ פּאַטראָן (ספעריש סיליקאַ, 20 - 45 μם, 100 Å, סדר נומער: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| ווייוולענגט | 254 נם, 220 נם | 214 נם | ||
| מאָביל פאַסע | סאַלוואַנט א: וואַסער סאַלוואַנט ב: אַסעטאָניטרילע | |||
| לויפן קורס | 15 מל / מין | 20 מל / מין | ||
| מוסטער לאָודינג | 30 מג | |||
| גראַדיענט | צייט (CV) | סאַלוואַנט ב (%) | צייט (מין) | סאַלוואַנט ב (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
רעזולטאטן און דיסקוסיע
צו פאַרגלייַכן די רייניקונג פאָרשטעלונג פֿאַר די פּאָליאַר פּעפּטייד מוסטער צווישן רעגולער C18 זייַל און C18AQ זייַל, מיר יוטאַלייזד אַ רעגולער C18 זייַל פֿאַר די בליץ רייניקונג פון די מוסטער ווי אַ אָנהייב.ווי געוויזן אין פיגורע 2, רעכט צו דער כיידראָופאָביק פאַסע ייַנבראָך פון די C18 קייטן געפֿירט דורך אַ הויך ייקוויאַס פאַרהעלטעניש, די מוסטער איז קוים ריטיינד אויף די רעגולער C18 פּאַטראָן און איז גלייך ילוייטיד דורך די רירעוודיק פאַסע.ווי אַ רעזולטאַט, די מוסטער איז נישט יפעקטיוולי אפגעשיידט און פּיוראַפייד.
פיגורע 2. די בליץ קראָומאַטאַגראַם פון די מוסטער אויף אַ רעגולער ק18 פּאַטראָן.
דערנאָך, מיר געוויינט אַ C18AQ זייַל פֿאַר די בליץ רייניקונג פון די מוסטער.ווי געוויזן אין פיגורע 3, די פּעפּטייד איז יפעקטיוולי ריטיינד אויף די זייַל און דעמאָלט ילוטאַד אויס.דער ציל פּראָדוקט איז אפגעשיידט פון די ימפּיוראַטיז אין די רוי מוסטער און געזאמלט.נאָך ליאָפיליזאַטיאָן און דערנאָך אַנאַלייזד דורך HPLC, די פּיוראַפייד פּראָדוקט האט אַ ריינקייַט פון 98.2% און קען זיין ווייַטער יוטאַלייזד פֿאַר ווייַטער שריט פאָרשונג און אַנטוויקלונג.
פיגורע 3. די בליץ קראָומאַטאַגראַם פון די מוסטער אויף אַ C18AQ פּאַטראָן.
אין מסקנא, SepaFlash C18AQ RP בליץ פּאַטראָן קאַמביינד מיט די בליץ קראָומאַטאַגראַפי סיסטעם SepaBean™מאַשין קען פאָרשלאָגן אַ שנעל און עפעקטיוו לייזונג פֿאַר רייניקונג פון שטאַרק פּאָליאַר אָדער כיידראָופיליק סאַמפּאַלז.
עס זענען אַ סעריע פון די SepaFlash C18AQ RP בליץ קאַרטראַדזשאַז מיט פאַרשידענע ספּעסאַפאַקיישאַנז פון Santai טעכנאָלאָגיע (ווי געוויזן אין טאַבלע 2).
| נומער נומער | זייַל גרייס | לויפן קורס (מל / מין) | מאַקס.דרוק (פּסי / באַר) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ג | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 ג | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 ג | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 ג | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 ג | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 ג | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 ג | 40-80 | 250/17.2 |
טיש 2. SepaFlash C18AQ RP בליץ קאַרטראַדזשאַז.פּאַקינג מאַטעריאַלס: הויך-עפעקטיווקייַט ספעריש C18(AQ)-באַנדיד סיליקאַ, 20 - 45 μם, 100 אַ.
פֿאַר מער אינפֿאָרמאַציע וועגן דיטיילד ספּעסאַפאַקיישאַנז פון SepaBean ™ מאַשין, אָדער די אָרדערינג אינפֿאָרמאַציע אויף SepaFlash סעריע בליץ קאַרטראַדזשאַז, ביטע באַזוכן אונדזער וועבזייטל.
פּאָסטן צייט: 12 אקטאבער 2018