Rui Huang, Bo Xu
Trung tâm R & D ứng dụng
Giới thiệu
Một peptide là một hợp chất bao gồm các axit amin, mỗi loại có tính chất vật lý và hóa học độc đáo do các loại và thứ tự của dư lượng axit amin tạo thành trình tự của nó. Với sự phát triển của tổng hợp hóa học pha rắn, sự tổng hợp hóa học của các peptide hoạt động khác nhau đã đạt được tiến bộ lớn. Tuy nhiên, do thành phần phức tạp của peptide thu được bằng cách tổng hợp pha rắn, sản phẩm cuối cùng nên được tinh chế bằng các phương pháp tách đáng tin cậy. Các phương pháp tinh chế thường được sử dụng cho các peptide bao gồm sắc ký trao đổi ion (IEC) và sắc ký lỏng hiệu suất cao pha (RP-HPLC), có nhược điểm của khả năng tải mẫu thấp, chi phí cao của phương tiện phân tách, vv. trong đó hộp mực SEPAFFLASH RP C18 được sử dụng để tinh chế nhanh chóng thymopentin (TP-5) và sản phẩm mục tiêu đáp ứng các yêu cầu đã thu được.
Hình 1. 20 Axit amin phổ biến (được sao chép từ www.bachem.com).
Có 20 loại axit amin phổ biến trong thành phần của peptide. Các axit amin này có thể được chia thành các nhóm sau theo tính phân cực và tính chất axit-bazơ của chúng: không phân cực (kỵ nước), cực (không tích điện), axit hoặc cơ bản (như trong Hình 1). Theo trình tự peptide, nếu các axit amin tạo thành trình tự chủ yếu là các loại cực (như được đánh dấu bằng màu hồng trong Hình 1), chẳng hạn như cysteine, glutamine, asparagine, serine, threonine, tyrosine, v.v. Trong quá trình tinh chế cho các mẫu peptide cực mạnh này bằng phương pháp sắc ký pha đảo ngược, một hiện tượng gọi là sự sụp đổ pha kỵ nước sẽ xảy ra (tham khảo một ứng dụng được công bố trước đó bởi Santai Technologies: Ứng dụng pha kỵ nước, các cột sắc ký pha của AQ. So với các cột C18 thông thường, các cột C18AQ được cải thiện phù hợp nhất để tinh chế các mẫu cực hoặc ưa nước mạnh. Trong bài đăng này, một peptide cực mạnh đã được sử dụng làm mẫu và được tinh chế bởi cột C18AQ. Do đó, sản phẩm mục tiêu đáp ứng các yêu cầu đã thu được và có thể được sử dụng trong nghiên cứu và phát triển sau đây.
| Dụng cụ | Sepabean™Máy 2 | |||
| Hộp mực | 12 g hộp flash sepaflash c18 RP (silica hình cầu, 20-45 m, 100, đặt hàng Nunber, SW-5222-012-SP) | 12 G SEPAFLASH C18AQ RP FLASH Hộp mực (silica hình cầu, 20-45 μm, 100, số thứ tự SW-5222-012-SP (aq)) | ||
| Bước sóng | 254nm, 220nm | 214nm | ||
| Giai đoạn di động | Dung môi A: Nước Dung môi B: Acetonitril | |||
| Tốc độ dòng chảy | 15 ml/phút | 20 ml/phút | ||
| Tải mẫu | 30 mg | |||
| Độ dốc | Thời gian (CV) | Dung môi B (%) | Thời gian (tối thiểu) | Dung môi B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12,5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16,5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15,5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Kết quả và thảo luận
Để so sánh hiệu suất tinh chế cho mẫu peptide cực giữa cột C18 thông thường và cột C18AQ, chúng tôi đã sử dụng cột C18 thông thường để tinh chế flash của mẫu khi bắt đầu. Như được hiển thị trong Hình 2, do sự sụp đổ pha kỵ nước của các chuỗi C18 gây ra bởi tỷ lệ nước cao, mẫu hầu như không được giữ lại trên hộp mực C18 thông thường và được rửa giải trực tiếp bởi pha di động. Kết quả là, mẫu không được phân tách và tinh chế một cách hiệu quả.
Hình 2. Sắc ký đồ flash của mẫu trên hộp mực C18 thông thường.
Tiếp theo, chúng tôi đã sử dụng cột C18AQ để tinh chế flash của mẫu. Như được hiển thị trong Hình 3, peptide được giữ lại một cách hiệu quả trên cột và sau đó rửa giải. Sản phẩm mục tiêu được tách ra khỏi các tạp chất trong mẫu thô và được thu thập. Sau khi đông khô và sau đó được phân tích bởi HPLC, sản phẩm tinh khiết có độ tinh khiết 98,2% và có thể được sử dụng thêm cho nghiên cứu và phát triển bước tiếp theo.
Hình 3. Sắc ký đồ flash của mẫu trên hộp mực C18AQ.
Tóm lại, hộp mực flash sepaflash c18aq rp kết hợp với hệ thống sắc ký flash™Máy có thể cung cấp một giải pháp nhanh chóng và hiệu quả để tinh chế các mẫu cực hoặc ưa nước mạnh.
Có một loạt các hộp mực flash RP Sepaflash C18AQ với các thông số kỹ thuật khác nhau từ công nghệ Santai (như trong Bảng 2).
| Số mục | Kích thước cột | Tốc độ dòng chảy (ml/phút) | Max.Pressure (PSI/BAR) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (aq) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Bảng 2. Hộp flash RP SEPAFLASH C18AQ. Vật liệu đóng gói: Silica có hiệu quả cao C18 (aq), 20-45 μm, 100.
Để biết thêm thông tin về các thông số kỹ thuật chi tiết của máy Sepabean ™ hoặc thông tin đặt hàng trên các hộp flash sê -ri Sepaflash, vui lòng truy cập trang web của chúng tôi.
Thời gian đăng: Tháng 10-12-2018