Rui Huang, Bo Xu
Ilova ilmiy-tadqiqot markazi
Kirish
Ion almashinuvi xromatografiyasi (IEC) odatda eritmada ion shaklida taqdim etilgan birikmalarni ajratish va tozalash uchun ishlatiladigan xromatografik usuldir.Almashtiriladigan ionlarning turli zaryad holatlariga ko'ra, IEC ikki turga bo'linishi mumkin, kation almashinuvi xromatografiyasi va anion almashinuvi xromatografiyasi.Kation almashinadigan xromatografiyada kislotali guruhlar ajratish muhiti yuzasiga bog'lanadi.Masalan, sulfonik kislota (-SO3H) kuchli kation almashinuvida (SCX) keng qoʻllaniladigan guruh boʻlib, u H+ ni dissotsilaydi va manfiy zaryadlangan guruh -SO3- shu tariqa eritmadagi boshqa kationlarni adsorbsiyalashi mumkin.Anion almashinadigan xromatografiyada ishqoriy guruhlar ajratish muhiti yuzasiga bog'lanadi.Masalan, to'rtlamchi amin (-NR3OH, bu erda R uglevodorod guruhi) odatda kuchli anion almashinuvida (SAX) ishlatiladi, bu OH-ni dissotsilaydi va musbat zaryadlangan guruh -N+R3 eritmadagi boshqa anionlarni adsorbsiyalashi mumkin, natijada anion hosil bo'ladi. almashinuv effekti.
Tabiiy mahsulotlar orasida flavonoidlar yurak-qon tomir kasalliklarining oldini olish va davolashdagi roli bilan tadqiqotchilarning e'tiborini tortdi.Flavonoid molekulalari fenolik gidroksil guruhlari mavjudligi sababli kislotali bo'lganligi sababli, bu kislotali birikmalarni ajratish va tozalash uchun an'anaviy normal faza yoki teskari fazali xromatografiyaga qo'shimcha ravishda ion almashinuvi xromatografiyasi muqobil variant hisoblanadi.Fleshli xromatografiyada ion almashinuvi uchun keng tarqalgan bo'lib foydalaniladigan ajratish muhiti silika gel matritsasi bo'lib, unda ion almashinuv guruhlari uning yuzasiga bog'langan.Fleshli xromatografiyada eng ko'p qo'llaniladigan ion almashinuv usullari SCX (odatda sulfon kislotasi guruhi) va SAX (odatda to'rtlamchi amin guruhi).Santai Technologies tomonidan "Ishqoriy birikmalarni tozalashda SepaFlash kuchli kation almashinadigan xromatografiya ustunlarini qo'llash" sarlavhasi bilan ilgari e'lon qilingan ariza eslatmasida ishqoriy birikmalarni tozalash uchun SCX ustunlari ishlatilgan.Ushbu postda kislotali birikmalarni tozalashda SAX ustunlarini qo'llashni o'rganish uchun namuna sifatida neytral va kislotali standartlar aralashmasi ishlatilgan.
Eksperimental bo'lim
Shakl 1. SAX ajratish muhiti yuzasiga bog'langan statsionar fazaning sxematik diagrammasi.
Ushbu postda to'rtlamchi amin bilan bog'langan silika bilan oldindan o'ralgan SAX ustuni ishlatilgan (1-rasmda ko'rsatilganidek).Tozalash uchun namuna sifatida xromon va 2,4-dihidroksibenzoy kislota aralashmasi ishlatilgan (2-rasmda ko'rsatilganidek).Aralash metanolda eritildi va injektor orqali flesh kartrijga yuklandi.Fleshli tozalashning eksperimental o'rnatilishi 1-jadvalda keltirilgan.
Shakl 2. Namuna aralashmasidagi ikkita komponentning kimyoviy tuzilishi.
| Asbob | SepaBean™ mashinasi T | |||||
| Patronlar | 4 g SepaFlash standart seriyali flesh-kartrij (tartibsiz silika, 40 - 63 mkm, 60 Å, Buyurtma raqami: S-5101-0004) | 4 g SepaFlash Bonded Series SAX flesh-kartriji (tartibsiz silika, 40 - 63 mkm, 60 Å, Buyurtma raqami: SW-5001-004-IR) | ||||
| To'lqin uzunligi | 254 nm (aniqlash), 280 nm (monitoring) | |||||
| Mobil bosqich | Erituvchi A: N-geksan | |||||
| B erituvchisi: etil asetat | ||||||
| Oqim darajasi | 30 ml/min | 20 ml/min | ||||
| Namuna yuklash | 20 mg (komponent A va B komponentining aralashmasi) | |||||
| Gradient | Vaqt (CV) | Solvent B (%) | Vaqt (CV) | Solvent B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Natijalar va muhokama
Birinchidan, namuna aralashmasi odatdagi silika bilan oldindan o'ralgan oddiy fazali flesh kartrij bilan ajratilgan.3-rasmda ko'rsatilganidek, namunadagi ikkita komponent birin-ketin kartrijdan elutsiya qilingan.Keyinchalik, namunani tozalash uchun SAX flesh kartrijidan foydalanildi.4-rasmda ko'rsatilganidek, kislotali B komponenti SAX kartridjida to'liq saqlanib qolgan.Neytral komponent A asta-sekin kartrijdan mobil fazaning elyusiyasi bilan elutsiya qilindi.
Shakl 3. Oddiy normal fazali kartridjdagi namunaning flesh-xromatogrammasi.
4-rasm. SAX patronidagi namunaning flesh-xromatogrammasi.
3-rasm va 4-rasmni solishtiradigan bo'lsak, A komponenti ikki xil flesh-kartrijlarda mos kelmaydigan tepalik shakliga ega.Elutsiya cho'qqisi komponentga mos keladimi yoki yo'qligini tasdiqlash uchun biz SepaBean™ mashinasining boshqaruv dasturiga o'rnatilgan to'liq to'lqin uzunligini skanerlash xususiyatidan foydalanishimiz mumkin.Ikki ajralishning eksperimental ma'lumotlarini oching, xromatogrammadagi vaqt o'qi (CV) bo'yicha ko'rsatkich chizig'iga A komponentiga mos keladigan elutsiya cho'qqisining eng yuqori nuqtasiga va ikkinchi eng yuqori nuqtasiga va bu ikkalasining to'liq to'lqin uzunligi spektriga torting. nuqtalar avtomatik ravishda xromatogramma ostida ko'rsatiladi (5-rasm va 6-rasmda ko'rsatilganidek).Ushbu ikkita ajralishning to'liq to'lqin uzunligi spektri ma'lumotlarini solishtirganda, A komponenti ikkita tajribada izchil yutilish spektriga ega.Komponent A ikki xil flesh-kartrijlarda mos kelmaydigan cho'qqi shakliga ega bo'lganligi sababli, A komponentida o'ziga xos nopoklik borligi taxmin qilinmoqda, bu oddiy fazali kartridjda va SAX kartridjida har xil tutilishga ega.Shu sababli, A komponenti va bu ikkita flesh-kartrijdagi nopoklik uchun elutsiya ketma-ketligi boshqacha bo'lib, xromatogrammalarda mos kelmaydigan tepalik shakliga olib keladi.
Shakl 5. A komponentining to'liq to'lqin uzunligi spektri va oddiy fazali kartrij bilan ajratilgan nopoklik.
Shakl 6. A komponentining to'liq to'lqin uzunligi spektri va SAX kartrij bilan ajratilgan nopoklik.
To'planishi kerak bo'lgan maqsadli mahsulot neytral komponent A bo'lsa, tozalash vazifasi namunani yuklagandan so'ng to'g'ridan-to'g'ri SAX kartridjidan foydalanib, oson bajarilishi mumkin.Boshqa tomondan, agar to'planishi kerak bo'lgan mahsulot kislotali B komponenti bo'lsa, tortib olish-bo'shatish usulini tajriba bosqichlarida ozgina sozlash bilan qabul qilish mumkin: namuna SAX kartrijiga va neytral A komponentiga yuklanganda. normal fazali organik erituvchilar bilan to'liq elutsiya qilindi, mobil fazani 5% sirka kislotasi bo'lgan metanol eritmasiga o'tkazing.Mobil fazadagi asetat ionlari SAX kartrijning statsionar fazasidagi to'rtlamchi amin ionlari guruhlari bilan bog'lanish uchun B komponenti bilan raqobatlashadi va shu tariqa maqsadli mahsulotni olish uchun B komponentini kartrijdan ajratib oladi.Ion almashinuvi rejimida ajratilgan namunaning xromatogrammasi 7-rasmda ko'rsatilgan.
Shakl 7. SAX kartridjida ion almashish rejimida elutsiya qilingan B komponentining flesh-xromatogrammasi.
Xulosa qilib aytadigan bo'lsak, kislotali yoki neytral namunani turli xil tozalash strategiyalaridan foydalangan holda oddiy fazali kartrij bilan birlashtirilgan SAX kartrij yordamida tezda tozalash mumkin.Bundan tashqari, SepaBean™ mashinasining boshqaruv dasturiga o‘rnatilgan to‘liq to‘lqin uzunligi bo‘yicha skanerlash funksiyasi yordamida elutsiya qilingan fraksiyalarning xarakterli yutilish spektrini osongina solishtirish va tasdiqlash mumkin, bu esa tadqiqotchilarga elutsiya qilingan fraksiyalarning tarkibi va tozaligini tezda aniqlashga yordam beradi va shu tariqa ish samaradorligi.
| Element raqami | Ustun o'lchami | Oqim darajasi (ml/min) | Maksimal bosim (psi/bar) |
| SW-5001-004-IR | 5,9 g | 10-20 | 400/27,5 |
| SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27,5 |
| SW-5001-080-IR | 122 gr | 30-60 | 350/24.0 |
| SW-5001-120-IR | 180 gr | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5001-220-IR | 340 gr | 50-100 | 300/20,7 |
| SW-5001-330-IR | 475 gr | 50-100 | 250/17.2
|
2-jadval. SepaFlash Bonded Series SAX flesh-kartrijlari.Qadoqlash materiallari: Ultra toza tartibsiz SAX bilan bog'langan kremniy oksidi, 40 - 63 mkm, 60 Å.
SepaBean™ ning batafsil texnik xususiyatlari haqida qo'shimcha ma'lumot olish uchunmashinasi yoki SepaFlash seriyali flesh-kartrijlarga buyurtma berish haqida ma’lumot olish uchun veb-saytimizga tashrif buyuring.
Yuborilgan vaqt: 2018 yil 09-noyabr