Rui Huang, Bo Xu
Ilova ilmiy-tadqiqot markazi
Kirish
Peptid aminokislotalardan tashkil topgan birikma bo'lib, ularning ketma-ketligini tashkil etuvchi aminokislotalar qoldiqlarining har xil turlari va tartibi tufayli har biri o'ziga xos fizik va kimyoviy xususiyatlarga ega.Qattiq fazali kimyoviy sintezning rivojlanishi bilan turli xil faol peptidlarning kimyoviy sintezi katta muvaffaqiyatlarga erishdi.Biroq, qattiq faza sintezi natijasida olingan peptidning murakkab tarkibi tufayli yakuniy mahsulotni ishonchli ajratish usullari bilan tozalash kerak.Peptidlarni tozalashning keng tarqalgan usullari orasida ion almashinadigan xromatografiya (IEC) va teskari fazali yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (RP-HPLC) mavjud bo'lib, ular past namunani yuklash qobiliyati, ajratish vositalarining yuqori narxi, murakkab va qimmat ajratish uskunalari kabi kamchiliklarga ega. Kichik molekulali peptidlarni (MW < 1 kDa) tez tozalash uchun Santai Technologies tomonidan muvaffaqiyatli qo'llash misoli ilgari nashr etilgan edi, unda SepaFlash RP C18 patroni timopentinni (TP-5) tez tozalash uchun ishlatilgan. talablarga javob beradigan maqsadli mahsulot olindi.
1-rasm. 20 ta umumiy aminokislotalar (www.bachem.com saytidan olingan).
Peptidlar tarkibida keng tarqalgan 20 turdagi aminokislotalar mavjud.Bu aminokislotalarni qutbliligi va kislota-ishqor xossalariga ko‘ra quyidagi guruhlarga bo‘lish mumkin: qutbsiz (gidrofobik), qutbsiz (zaryadsiz), kislotali yoki asosli (1-rasmda ko‘rsatilganidek).Peptidlar ketma-ketligida, agar ketma-ketlikni tashkil etuvchi aminokislotalar asosan qutbli bo'lsa (1-rasmda pushti rang bilan belgilangan), masalan, sistein, glutamin, asparagin, serin, treonin, tirozin va boshqalar, bu peptid kuchli bo'lishi mumkin. qutbli va suvda yaxshi eriydi.Ushbu kuchli qutbli peptid namunalarini teskari fazali xromatografiya orqali tozalash jarayonida hidrofobik faza qulashi deb ataladigan hodisa ro'y beradi (Santai Technologies tomonidan ilgari e'lon qilingan dastur eslatmasiga qarang: Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Ustunlari va ularning ilovalari).Oddiy C18 ustunlari bilan taqqoslaganda, yaxshilangan C18AQ ustunlari kuchli qutbli yoki hidrofilik namunalarni tozalash uchun eng mos keladi.Ushbu postda kuchli qutbli peptid namuna sifatida ishlatilgan va C18AQ ustuni bilan tozalangan.Natijada, talablarga javob beradigan maqsadli mahsulot olindi va undan keyingi tadqiqot va ishlanmalarda foydalanish mumkin edi.
| Asbob | SepaBean™mashina 2 | |||
| Patronlar | 12 g SepaFlash C18 RP flesh-kartriji (sferik kremniy oksidi, 20 - 45 mkm, 100 A, Buyurtma raqami: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP flesh-kartriji (sferik silika, 20 - 45 mkm, 100 A, Buyurtma raqami: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| To'lqin uzunligi | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobil bosqich | A hal qiluvchi: suv B erituvchisi: asetonitril | |||
| Oqim darajasi | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Namuna yuklash | 30 mg | |||
| Gradient | Vaqt (CV) | Solvent B (%) | Vaqt (daq) | Solvent B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Natijalar va muhokama
Oddiy C18 ustuni va C18AQ ustuni o'rtasida qutbli peptid namunasi uchun tozalash samaradorligini solishtirish uchun biz namunani chaqqon tozalash uchun boshlang'ich sifatida oddiy C18 ustunidan foydalandik.2-rasmda ko'rsatilganidek, yuqori suvli nisbatdan kelib chiqqan C18 zanjirlarining hidrofobik fazasining qulashi tufayli namuna oddiy C18 kartridjida zo'rg'a saqlanib qoldi va to'g'ridan-to'g'ri ko'chma faza bilan chiqariladi.Natijada, namuna samarali ravishda ajratilmadi va tozalanmadi.
Shakl 2. Oddiy C18 kartrijdagi namunaning flesh-xromatogrammasi.
Keyinchalik, biz namunani chaqqon tozalash uchun C18AQ ustunidan foydalandik.3-rasmda ko'rsatilganidek, peptid ustunda samarali ushlab turilgan va keyin elutsiya qilingan.Maqsadli mahsulot xom namunadagi aralashmalardan ajratilgan va yig'ilgan.Liyofilizatsiyadan so'ng va HPLC tomonidan tahlil qilingandan so'ng, tozalangan mahsulot 98,2% tozalikka ega va keyingi bosqichda tadqiqot va ishlab chiqish uchun ishlatilishi mumkin.
Shakl 3. C18AQ kartrijidagi namunaning flesh-xromatogrammasi.
Xulosa qilib aytganda, SepaFlash C18AQ RP flesh-kartriji SepaBean flesh-xromatografiya tizimi bilan birlashtirilgan.™mashina kuchli qutbli yoki hidrofilik namunalarni tozalash uchun tez va samarali yechim taklif qilishi mumkin.
SepaFlash C18AQ RP flesh-kartrijlari qatori Santai Technology-dan farqli xususiyatlarga ega (2-jadvalda ko'rsatilganidek).
| Element raqami | Ustun o'lchami | Oqim darajasi (ml/min) | Maksimal bosim (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 gr | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 gr | 40-80 | 250/17.2 |
Jadval 2. SepaFlash C18AQ RP flesh-kartrijlari.Qadoqlash materiallari: Yuqori samarali sferik C18(AQ) bilan bog'langan kremniy oksidi, 20 - 45 mkm, 100 Å.
SepaBean™ mashinasining batafsil texnik xususiyatlari yoki SepaFlash seriyali flesh-kartrijlarga buyurtma berish haqida qo'shimcha ma'lumot olish uchun bizning veb-saytimizga tashrif buyuring.
Yuborilgan vaqt: 2018 yil 12 oktyabr