روئی ہوانگ، بو سو
درخواست آر اینڈ ڈی سینٹر
تعارف
آئن ایکسچینج کرومیٹوگرافی (آئی ای سی) ایک کرومیٹوگرافک طریقہ ہے جو عام طور پر مرکبات کو الگ اور صاف کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے جو حل میں آئنک شکل میں پیش کیے جاتے ہیں۔قابل تبادلہ آئنوں کی مختلف چارج ریاستوں کے مطابق، IEC کو دو اقسام میں تقسیم کیا جا سکتا ہے، کیشن ایکسچینج کرومیٹوگرافی اور ایون ایکسچینج کرومیٹوگرافی۔کیشن ایکسچینج کرومیٹوگرافی میں، تیزابی گروہ علیحدگی میڈیا کی سطح سے جڑے ہوئے ہیں۔مثال کے طور پر، سلفونک ایسڈ (-SO3H) مضبوط کیشن ایکسچینج (SCX) میں عام طور پر استعمال ہونے والا ایک گروپ ہے، جو H+ کو الگ کرتا ہے اور منفی چارج شدہ گروپ -SO3- اس طرح محلول میں دیگر کیشنز کو جذب کر سکتا ہے۔ایون ایکسچینج کرومیٹوگرافی میں، الکلائن گروپس علیحدگی میڈیا کی سطح سے منسلک ہوتے ہیں۔مثال کے طور پر، کواٹرنری امائن (-NR3OH، جہاں R ہائیڈرو کاربن گروپ ہے) عام طور پر مضبوط اینیون ایکسچینج (SAX) میں استعمال ہوتا ہے، جو OH- کو الگ کرتا ہے اور مثبت چارج شدہ گروپ -N+R3 محلول میں دیگر آئنوں کو جذب کر سکتا ہے، جس کے نتیجے میں آئنون پیدا ہوتا ہے۔ تبادلہ اثر.
قدرتی مصنوعات میں، flavonoids نے دل کی بیماریوں کی روک تھام اور علاج میں اپنے کردار کی وجہ سے محققین کی توجہ مبذول کرائی ہے۔چونکہ فلیوونائڈ مالیکیولز فینولک ہائیڈروکسیل گروپس کی موجودگی کی وجہ سے تیزابی ہوتے ہیں، اس لیے ان تیزابی مرکبات کو الگ کرنے اور صاف کرنے کے لیے روایتی نارمل فیز یا ریورسڈ فیز کرومیٹوگرافی کے علاوہ آئن ایکسچینج کرومیٹوگرافی ایک متبادل آپشن ہے۔فلیش کرومیٹوگرافی میں، آئن ایکسچینج کے لیے عام طور پر استعمال ہونے والا علیحدگی کا میڈیا سلکا جیل میٹرکس ہے جہاں آئن ایکسچینج گروپس اس کی سطح سے جڑے ہوئے ہیں۔فلیش کرومیٹوگرافی میں سب سے زیادہ استعمال ہونے والے آئن ایکسچینج موڈز SCX (عام طور پر سلفونک ایسڈ گروپ) اور SAX (عام طور پر کواٹرنری امائن گروپ) ہیں۔سانٹائی ٹیکنالوجیز کی طرف سے "The Application of SepaFlash Strong Cation Exchange Chromatography Colums in the Purification of Alkaline Compounds" عنوان کے ساتھ پہلے شائع شدہ ایپلیکیشن نوٹ میں، SCX کالم الکلائن مرکبات کو صاف کرنے کے لیے استعمال کیے گئے تھے۔اس پوسٹ میں، غیر جانبدار اور تیزابی معیارات کے مرکب کو نمونے کے طور پر استعمال کیا گیا تاکہ تیزابی مرکبات کی تطہیر میں SAX کالموں کے استعمال کو دریافت کیا جا سکے۔
تجرباتی جگہ
شکل 1۔ سٹیشنری فیز کا اسکیمیٹک ڈایاگرام SAX علیحدگی میڈیا کی سطح سے منسلک ہے۔
اس پوسٹ میں، کواٹرنری امائن بانڈڈ سلیکا کے ساتھ پہلے سے پیک ایک SAX کالم استعمال کیا گیا تھا (جیسا کہ شکل 1 میں دکھایا گیا ہے)۔Chromone اور 2,4-dihydroxybenzoic ایسڈ کا مرکب نمونے کے طور پر استعمال کیا گیا تھا جس کو صاف کیا گیا تھا (جیسا کہ شکل 2 میں دکھایا گیا ہے)۔مرکب کو میتھانول میں تحلیل کیا گیا تھا اور ایک انجیکٹر کے ذریعہ فلیش کارتوس پر لوڈ کیا گیا تھا۔فلیش پیوریفیکیشن کا تجرباتی سیٹ اپ ٹیبل 1 میں درج ہے۔
شکل 2. نمونے کے مرکب میں دو اجزاء کی کیمیائی ساخت۔
| آلہ | SepaBean™ مشین T | |||||
| کارتوس | 4 جی SepaFlash سٹینڈرڈ سیریز فلیش کارتوس (بے ترتیب سلیکا، 40 - 63 μm، 60 Å، آرڈر نمبر: S-5101-0004) | 4 جی سیپا فلاش بانڈڈ سیریز SAX فلیش کارتوس (بے ترتیب سلیکا، 40 - 63 μm، 60 Å، آرڈر نمبر：SW-5001-004-IR) | ||||
| طول موج | 254 nm (پتہ لگانے)، 280 nm (مانیٹرنگ) | |||||
| موبائل مرحلہ | سالوینٹ A: N-hexane | |||||
| سالوینٹ بی: ایتھائل ایسیٹیٹ | ||||||
| بہاؤ کی شرح | 30 ملی لیٹر/منٹ | 20 ملی لیٹر/منٹ | ||||
| نمونہ لوڈ ہو رہا ہے۔ | 20 ملی گرام (جز A اور جزو B کا مرکب) | |||||
| میلان | وقت (CV) | سالوینٹ B (%) | وقت (CV) | سالوینٹ B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
نتائج اور مباحثہ
سب سے پہلے، نمونے کے مرکب کو ایک عام فیز فلیش کارتوس سے الگ کیا گیا تھا جو باقاعدہ سلکا سے پہلے سے پیک کیا گیا تھا۔جیسا کہ شکل 3 میں دکھایا گیا ہے، نمونے میں موجود دو اجزاء کو ایک کے بعد ایک کارتوس سے نکالا گیا۔اگلا، نمونے کو صاف کرنے کے لیے ایک SAX فلیش کارتوس استعمال کیا گیا۔جیسا کہ شکل 4 میں دکھایا گیا ہے، تیزابی جزو B کو SAX کارتوس پر مکمل طور پر برقرار رکھا گیا تھا۔غیر جانبدار اجزاء A کو آہستہ آہستہ موبائل مرحلے کے خاتمے کے ساتھ کارتوس سے خارج کردیا گیا تھا۔
شکل 3۔ ایک عام عام فیز کارتوس پر نمونے کا فلیش کرومیٹوگرام۔
شکل 4. SAX کارتوس پر نمونے کا فلیش کرومیٹوگرام۔
شکل 3 اور شکل 4 کا موازنہ کرتے ہوئے، اجزاء A میں دو مختلف فلیش کارتوسوں پر متضاد چوٹی کی شکل ہے۔اس بات کی تصدیق کرنے کے لیے کہ آیا ایلیوشن چوٹی جزو کے مطابق ہے، ہم مکمل طول موج کی اسکیننگ خصوصیت کا استعمال کر سکتے ہیں جو SepaBean™ مشین کے کنٹرول سافٹ ویئر میں بنایا گیا ہے۔دو علیحدگیوں کے تجرباتی اعداد و شمار کو کھولیں، کرومیٹوگرام میں ٹائم ایکسس (CV) پر اشارے کی لکیر کو سب سے اونچے مقام تک اور اجزاء A سے مطابقت رکھنے والے ایلیوشن چوٹی کے دوسرے سب سے اونچے مقام پر گھسیٹیں، اور ان دونوں کا مکمل طول موج کا سپیکٹرم۔ پوائنٹس خود بخود کرومیٹوگرام کے نیچے دکھائے جائیں گے (جیسا کہ شکل 5 اور شکل 6 میں دکھایا گیا ہے)۔ان دو علیحدگیوں کے مکمل طول موج کے سپیکٹرم ڈیٹا کا موازنہ کرتے ہوئے، اجزاء A میں دو تجربات میں مسلسل جذب سپیکٹرم ہے۔دو مختلف فلیش کارتوسوں پر اجزاء A کی چوٹی کی شکل متضاد ہونے کی وجہ سے، یہ قیاس کیا جاتا ہے کہ اجزاء A میں مخصوص نجاست ہے جس کی برقراری عام فیز کارتوس اور SAX کارتوس پر مختلف ہے۔لہذا، ایلوٹنگ ترتیب اجزاء A کے لیے مختلف ہے اور ان دو فلیش کارتوسوں پر موجود نجاست، جس کے نتیجے میں کرومیٹوگرامس پر چوٹی کی شکل متضاد ہے۔
شکل 5۔ جزو A کا مکمل طول موج کا سپیکٹرم اور نارمل فیز کارتوس سے الگ ہونے والی ناپاکی۔
شکل 6۔ جزو A کا مکمل طول موج کا سپیکٹرم اور SAX کارتوس سے الگ ہونے والی ناپاکی۔
اگر ٹارگٹ پروڈکٹ کو اکٹھا کیا جانا ہے وہ غیر جانبدار جزو A ہے، نمونہ لوڈ کرنے کے بعد SAX کارتوس کا براہ راست استعمال کرکے صاف کرنے کا کام آسانی سے مکمل کیا جاسکتا ہے۔دوسری طرف، اگر ٹارگٹ پروڈکٹ کو اکٹھا کیا جانا ہے وہ تیزابی جزو B ہے، تجرباتی مراحل میں صرف معمولی ایڈجسٹمنٹ کے ساتھ کیپچر جاری کرنے کا طریقہ اختیار کیا جا سکتا ہے: جب نمونہ SAX کارتوس اور غیر جانبدار جزو A پر لوڈ کیا گیا تھا۔ عام مرحلے کے نامیاتی سالوینٹس کے ساتھ مکمل طور پر ختم کیا گیا تھا، موبائل فیز کو میتھانول محلول میں تبدیل کریں جس میں 5% acetic ایسڈ ہو۔موبائل فیز میں ایسیٹیٹ آئنز SAX کارتوس کے سٹیشنری فیز پر کواٹرنری امائن آئن گروپس کے پابند ہونے کے لیے کمپوننٹ B کے ساتھ مقابلہ کریں گے، اس طرح ٹارگٹ پروڈکٹ حاصل کرنے کے لیے کارٹریج سے اجزاء B کو خارج کر دیا جائے گا۔آئن ایکسچینج موڈ میں الگ کیے گئے نمونے کا کرومیٹوگرام شکل 7 میں دکھایا گیا تھا۔
شکل 7۔ اجزاء B کا فلیش کرومیٹوگرام SAX کارتوس پر آئن ایکسچینج موڈ میں ختم ہوتا ہے۔
آخر میں، تیزابی یا غیر جانبدار نمونے کو SAX کارٹریج کے ذریعے عام فیز کارٹریج کے ساتھ مل کر مختلف طہارت کی حکمت عملیوں کو استعمال کرتے ہوئے تیزی سے صاف کیا جا سکتا ہے۔مزید برآں، SepaBean™ مشین کے کنٹرول سافٹ ویئر میں بنائے گئے مکمل طول موج کی سکیننگ کی خصوصیت کی مدد سے، ایلیوٹڈ فریکشنز کی خصوصیت جذب کرنے والے اسپیکٹرم کا آسانی سے موازنہ اور تصدیق کی جا سکتی ہے، جس سے محققین کو تیزی سے ایلیوٹڈ فریکشنز کی ساخت اور پاکیزگی کا تعین کرنے میں مدد ملتی ہے اور اس طرح بہتری آتی ہے۔ کام کی کارکردگی.
| آئٹم نمبر | کالم کا سائز | بہاؤ کی شرح (mL/منٹ) | زیادہ سے زیادہ دباؤ (psi/bar) |
| SW-5001-004-IR | 5.9 جی | 10-20 | 400/27.5 |
| SW-5001-012-IR | 23 جی | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-025-IR | 38 گرام | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-040-IR | 55 گرام | 20-40 | 400/27.5 |
| SW-5001-080-IR | 122 گرام | 30-60 | 350/24.0 |
| SW-5001-120-IR | 180 گرام | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5001-220-IR | 340 گرام | 50-100 | 300/20.7 |
| SW-5001-330-IR | 475 گرام | 50-100 | 250/17.2
|
ٹیبل 2. SepaFlash بانڈڈ سیریز SAX فلیش کارتوس۔پیکنگ مواد: الٹرا خالص فاسد SAX بانڈڈ سلکا، 40 - 63 μm، 60 Å۔
SepaBean™ کی تفصیلی وضاحتوں کے بارے میں مزید معلومات کے لیےمشین، یا SepaFlash سیریز کے فلیش کارتوس کے بارے میں معلومات، براہ کرم ہماری ویب سائٹ ملاحظہ کریں۔
پوسٹ ٹائم: نومبر-09-2018