روئی ہوانگ، بو سو
درخواست آر اینڈ ڈی سینٹر
تعارف
پیپٹائڈ ایک مرکب ہے جو امینو ایسڈز پر مشتمل ہوتا ہے، جس میں سے ہر ایک اپنی ترتیب پر مشتمل امینو ایسڈ کی باقیات کی مختلف اقسام اور ترتیب کی وجہ سے منفرد جسمانی اور کیمیائی خصوصیات رکھتا ہے۔ٹھوس مرحلے کی کیمیائی ترکیب کی ترقی کے ساتھ، مختلف فعال پیپٹائڈس کی کیمیائی ترکیب نے بہت ترقی کی ہے۔تاہم، ٹھوس مرحلے کی ترکیب کے ذریعے حاصل کردہ پیپٹائڈ کی پیچیدہ ساخت کی وجہ سے، حتمی مصنوع کو قابل اعتماد علیحدگی کے طریقوں سے پاک کیا جانا چاہیے۔پیپٹائڈس کے لیے عام طور پر استعمال ہونے والے طہارت کے طریقوں میں آئن ایکسچینج کرومیٹوگرافی (آئی ای سی) اور ریورسڈ فیز ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (RP-HPLC) شامل ہیں، جن میں نمونے کی لوڈنگ کی کم صلاحیت، علیحدگی میڈیا کی زیادہ قیمت، پیچیدہ اور مہنگے علیحدگی کا سامان، وغیرہ کے نقصانات ہیں۔ چھوٹے مالیکیول پیپٹائڈس (MW <1 kDa) کی تیزی سے تطہیر کے لیے، ایک کامیاب درخواست کیس پہلے سانٹائی ٹیکنالوجیز نے شائع کیا تھا، جس میں ایک SepaFlash RP C18 کارتوس استعمال کیا گیا تھا تاکہ thymopentin (TP-5) کی تیزی سے تطہیر کی جا سکے۔ مطلوبہ مصنوعات کو پورا کرنے کا ہدف حاصل کیا گیا۔
شکل 1. 20 عام امینو ایسڈ (www.bachem.com سے دوبارہ تیار کردہ)۔
20 قسم کے امینو ایسڈ ہیں جو پیپٹائڈس کی ساخت میں عام ہیں۔ان امینو ایسڈز کو ان کی قطبی اور تیزابیت کی خاصیت کے مطابق درج ذیل گروپوں میں تقسیم کیا جا سکتا ہے: غیر قطبی (ہائیڈرو فوبک)، قطبی (غیر چارج شدہ)، تیزابی یا بنیادی (جیسا کہ شکل 1 میں دکھایا گیا ہے)۔پیپٹائڈ کی ترتیب میں، اگر ترتیب پر مشتمل امینو ایسڈ زیادہ تر قطبی ہیں (جیسا کہ شکل 1 میں گلابی رنگ میں نشان زد کیا گیا ہے)، جیسے کہ سسٹین، گلوٹامین، اسپرگین، سیرین، تھرونائن، ٹائروسین، وغیرہ، تو یہ پیپٹائڈ مضبوط ہو سکتا ہے۔ polarity اور پانی میں انتہائی گھلنشیل ہونا۔الٹ فیز کرومیٹوگرافی کے ذریعے ان مضبوط قطبی پیپٹائڈ نمونوں کو صاف کرنے کے طریقہ کار کے دوران، ہائیڈرو فوبک فیز کولپس نامی ایک رجحان واقع ہوگا (سانٹائی ٹیکنالوجیز کی طرف سے پہلے شائع شدہ ایپلیکیشن نوٹ کا حوالہ دیں: ہائیڈروفوبک فیز کولپس، اے کیو ریورسڈ فیز کرومیٹوگرافی کالم اور دی)۔باقاعدہ C18 کالموں کے مقابلے میں، بہتر C18AQ کالم مضبوط قطبی یا ہائیڈرو فیلک نمونوں کو صاف کرنے کے لیے موزوں ترین ہیں۔اس پوسٹ میں، ایک مضبوط قطبی پیپٹائڈ کو نمونے کے طور پر استعمال کیا گیا تھا اور اسے C18AQ کالم کے ذریعے صاف کیا گیا تھا۔نتیجے کے طور پر، ضروریات کو پورا کرنے والا ہدف حاصل کیا گیا اور اسے درج ذیل تحقیق اور ترقی میں استعمال کیا جا سکتا ہے۔
| آلہ | سیپا بین™مشین 2 | |||
| کارتوس | 12 جی SepaFlash C18 RP فلیش کارتوس (کروی سیلیکا، 20 - 45 μm، 100 Å، آرڈر نمبر：SW-5222-012-SP) | 12 جی SepaFlash C18AQ RP فلیش کارتوس (کروی سلکا، 20 - 45 μm، 100 Å، آرڈر نمبر：SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| طول موج | 254 این ایم، 220 این ایم | 214 این ایم | ||
| موبائل مرحلہ | سالوینٹ A: پانی سالوینٹ بی: ایسیٹونیٹرائل | |||
| بہاؤ کی شرح | 15 ملی لیٹر/منٹ | 20 ملی لیٹر/منٹ | ||
| نمونہ لوڈ ہو رہا ہے۔ | 30 ملی گرام | |||
| میلان | وقت (CV) | سالوینٹ B (%) | وقت (منٹ) | سالوینٹ B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
نتائج اور مباحثہ
باقاعدہ C18 کالم اور C18AQ کالم کے درمیان قطبی پیپٹائڈ نمونے کے لیے پیوریفیکیشن کی کارکردگی کا موازنہ کرنے کے لیے، ہم نے نمونے کے فلیش پیوریفیکیشن کے لیے ایک باقاعدہ C18 کالم کو بطور آغاز استعمال کیا۔جیسا کہ شکل 2 میں دکھایا گیا ہے، اعلی آبی تناسب کی وجہ سے C18 زنجیروں کے ہائیڈروفوبک مرحلے کے خاتمے کی وجہ سے، نمونہ بمشکل باقاعدہ C18 کارتوس پر برقرار رکھا گیا تھا اور موبائل مرحلے کے ذریعہ براہ راست خارج کردیا گیا تھا۔نتیجے کے طور پر، نمونہ مؤثر طریقے سے الگ اور صاف نہیں کیا گیا تھا.
شکل 2۔ باقاعدہ C18 کارتوس پر نمونے کا فلیش کرومیٹوگرام۔
اگلا، ہم نے نمونے کی فلیش صاف کرنے کے لیے C18AQ کالم استعمال کیا۔جیسا کہ شکل 3 میں دکھایا گیا ہے، پیپٹائڈ کو مؤثر طریقے سے کالم پر برقرار رکھا گیا تھا اور پھر باہر نکال دیا گیا تھا۔ٹارگٹ پروڈکٹ کو خام نمونے میں موجود نجاستوں سے الگ کرکے جمع کیا گیا تھا۔lyophilization اور پھر HPLC کے ذریعے تجزیہ کرنے کے بعد، پیوریفائیڈ پروڈکٹ کی خالصیت 98.2% ہے اور اسے اگلے مرحلے کی تحقیق اور ترقی کے لیے مزید استعمال کیا جا سکتا ہے۔
شکل 3۔ C18AQ کارتوس پر نمونے کا فلیش کرومیٹوگرام۔
آخر میں، SepaFlash C18AQ RP فلیش کارتوس فلیش کرومیٹوگرافی سسٹم SepaBean کے ساتھ مل کر™مشین مضبوط قطبی یا ہائیڈرو فیلک نمونوں کو صاف کرنے کے لیے تیز رفتار اور موثر حل پیش کر سکتی ہے۔
سانٹائی ٹیکنالوجی کی مختلف خصوصیات کے ساتھ SepaFlash C18AQ RP فلیش کارتوس کی ایک سیریز ہے (جیسا کہ جدول 2 میں دکھایا گیا ہے)۔
| آئٹم نمبر | کالم کا سائز | بہاؤ کی شرح (mL/منٹ) | زیادہ سے زیادہ دباؤ (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 جی | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 گرام | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 گرام | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 گرام | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 گرام | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 گرام | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 گرام | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 گرام | 40-80 | 250/17.2 |
ٹیبل 2. SepaFlash C18AQ RP فلیش کارتوس۔پیکنگ مواد: اعلی کارکردگی کا کروی C18 (AQ) بانڈڈ سلکا، 20 - 45 μm، 100 Å۔
SepaBean™ مشین کی تفصیلی تفصیلات کے بارے میں مزید معلومات کے لیے، یا SepaFlash سیریز کے فلیش کارٹریجز پر آرڈر کرنے کی معلومات کے لیے، براہ کرم ہماری ویب سائٹ ملاحظہ کریں۔
پوسٹ ٹائم: اکتوبر 12-2018