ہانگچینگ وانگ ، بو سو
درخواست آر اینڈ ڈی سینٹر
تعارف
اسٹیشنری مرحلے اور موبائل مرحلے کی رشتہ دار قطعات کے مطابق ، مائع کرومیٹوگرافی کو نارمل فیز کرومیٹوگرافی (این پی سی) اور الٹ فیز کرومیٹوگرافی (آر پی سی) میں تقسیم کیا جاسکتا ہے۔ آر پی سی کے لئے ، موبائل مرحلے کی قطعیت اسٹیشنری مرحلے سے زیادہ مضبوط ہے۔ اعلی کارکردگی ، اچھی ریزولوشن اور واضح برقراری کے طریقہ کار کی وجہ سے آر پی سی مائع کرومیٹوگرافی علیحدگی کے طریقوں میں سب سے زیادہ استعمال ہونے والا ایک بن گیا ہے۔ لہذا آر پی سی مختلف قطبی یا غیر قطبی مرکبات کی علیحدگی اور تزکیہ کے لئے موزوں ہے ، بشمول الکلائڈز ، کاربوہائیڈریٹ ، فیٹی ایسڈ ، اسٹیرائڈز ، نیوکلیک ایسڈ ، امینو ایسڈ ، پیپٹائڈس ، پروٹین ، سی 1 ، سی 1 میں ، جو عام طور پر استعمال ہونے والا اسٹیشنری مرحلہ ہے وہ سلکا جیل میتر ہے ، جس میں عام طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ سیانو ، امینو ، وغیرہ ان پابند فنکشنل گروپوں میں ، سب سے زیادہ استعمال ہونے والا ایک C18 ہے۔ ایک اندازے کے مطابق 80 فیصد سے زیادہ آر پی سی اب C18 بانڈڈ مرحلے کا استعمال کر رہے ہیں۔ لہذا سی 18 کرومیٹوگرافی کالم ہر لیبارٹری کے لئے لازمی یونیورسل کالم بن گیا ہے۔
اگرچہ سی 18 کالم کو ایپلی کیشنز کی ایک بہت وسیع رینج میں استعمال کیا جاسکتا ہے ، تاہم ، کچھ نمونوں کے لئے جو بہت قطبی یا انتہائی ہائیڈرو فیلک ہیں ، اس طرح کے نمونوں کو پاک کرنے کے لئے استعمال ہونے پر باقاعدگی سے سی 18 کالموں میں پریشانی ہوسکتی ہے۔ آر پی سی میں ، عام طور پر استعمال ہونے والے الیوشن سالوینٹس کو ان کی قطعیت کے مطابق ترتیب دیا جاسکتا ہے: پانی <میتھانول <ایسٹونیٹرائل <ایتھنول <ٹیٹراہائڈروفوران <آئسوپروپنول۔ ان نمونوں (مضبوط قطبی یا انتہائی ہائیڈرو فیلک) کے لئے کالم پر اچھی برقراری کی یقین دہانی کے لئے ، موبائل مرحلے کے طور پر استعمال کرنے کے لئے پانی کے نظام کا اعلی تناسب ضروری ہے۔ تاہم ، جب موبائل مرحلے کے طور پر خالص پانی کے نظام (جس میں خالص پانی یا خالص نمک حل بھی شامل ہے) کا استعمال کرتے ہوئے ، C18 کالم کے اسٹیشنری مرحلے پر لمبی کاربن چین پانی سے بچتا ہے اور ایک دوسرے کے ساتھ مل جاتا ہے ، جس کے نتیجے میں کالم کی برقراری کی صلاحیت میں فوری کمی واقع ہوتی ہے یا اس سے بھی برقرار نہیں رہتا ہے۔ اس رجحان کو "ہائیڈرو فوبک فیز کا خاتمہ" کہا جاتا ہے (جیسا کہ شکل 1 کے بائیں حصے میں دکھایا گیا ہے)۔ اگرچہ یہ صورتحال اس وقت تبدیل ہوتی ہے جب کالم کو نامیاتی سالوینٹس جیسے میتھانول یا ایسٹونیٹریل سے دھویا جاتا ہے ، لیکن پھر بھی یہ کالم کو نقصان پہنچا سکتا ہے۔ لہذا ، اس صورتحال کو ہونے سے روکنا ضروری ہے۔
چترا 1۔ باقاعدگی سے C18 کالم (بائیں) اور C18AQ کالم (دائیں) میں سلکا جیل کی سطح پر پابند مراحل کا اسکیماتی آریھ۔
مذکورہ بالا مسائل کو دور کرنے کے لئے ، کرومیٹوگرافک پیکنگ میٹریل مینوفیکچررز نے تکنیکی بہتری لائی ہے۔ ان میں سے ایک بہتری سلکا میٹرکس کی سطح پر کچھ ترمیم کرنا ہے ، جیسے ہائیڈرو فیلک سائانو گروپوں کا تعارف (جیسا کہ شکل 1 کے دائیں حصے میں دکھایا گیا ہے) ، تاکہ سلکا جیل کی سطح کو زیادہ ہائیڈرو فیلک بنایا جاسکے۔ اس طرح سلکا سطح پر سی 18 چینوں کو انتہائی پانی کے حالات میں مکمل طور پر بڑھایا جاسکتا ہے اور ہائیڈروفوبک مرحلے کے خاتمے سے بچا جاسکتا ہے۔ ان میں ترمیم شدہ C18 کالموں کو آبی سی 18 کالم کہا جاتا ہے ، یعنی C18AQ کالم ، جو انتہائی پانی کی افادیت کے حالات کے لئے ڈیزائن کیے گئے ہیں اور 100 ٪ پانی کے نظام کو برداشت کرسکتے ہیں۔ C18AQ کالموں کو مضبوط قطبی مرکبات کی علیحدگی اور طہارت میں وسیع پیمانے پر لاگو کیا گیا ہے ، جس میں نامیاتی تیزاب ، پیپٹائڈس ، نیوکلیوسائڈز اور پانی میں گھلنشیل وٹامن شامل ہیں۔
نمونوں کے لئے فلیش صاف کرنے میں C18AQ کالموں کی ایک عام ایپلی کیشنز میں سے ایک ہے ، جو نمونے کے سالوینٹ میں نمک یا بفر کے اجزاء کو ہٹاتا ہے تاکہ اس کے بعد کے مطالعے میں نمونے کی اطلاق میں آسانی پیدا ہو۔ اس پوسٹ میں ، مضبوط قطعیت کے ساتھ شاندار بلیو ایف سی ایف کو نمونہ کے طور پر استعمال کیا گیا تھا اور C18AQ کالم پر پاک کیا گیا تھا۔ نمونہ سالوینٹ کی جگہ بفر حل سے نامیاتی سالوینٹس نے لے لی ، اس طرح مندرجہ ذیل روٹری وانپیکرن کے ساتھ ساتھ سالوینٹس اور آپریٹنگ ٹائم کی بچت بھی کی گئی۔ مزید برآں ، نمونے میں کچھ نجاستوں کو دور کرکے نمونے کی پاکیزگی کو بہتر بنایا گیا تھا۔
تجرباتی سیکشن
چترا 2۔ نمونے کی کیمیائی ڈھانچہ۔
اس پوسٹ میں نمونے کے طور پر شاندار بلیو ایف سی ایف کو استعمال کیا گیا تھا۔ خام نمونے کی پاکیزگی 86 ٪ تھی اور نمونے کی کیمیائی ڈھانچے کو شکل 2 میں دکھایا گیا تھا۔ نمونہ حل تیار کرنے کے لئے ، شاندار نیلے رنگ کے ایف سی ایف کے 300 ملی گرام پاؤڈر خام خام ٹھوس کو 1 میٹر NAH2PO4 بفر حل میں تحلیل کردیا گیا تھا اور مکمل طور پر واضح حل بننے کے لئے اچھی طرح سے لرز اٹھا تھا۔ اس کے بعد نمونے کے حل کو انجیکٹر کے ذریعہ فلیش کالم میں انجکشن لگایا گیا تھا۔ فلیش صاف کرنے کا تجرباتی سیٹ اپ ٹیبل 1 میں درج ہے۔
| آلہ | سیپابین ™ مشین2 | |||
| کارتوس | 12 جی سیپفلاش سی 18 آر پی فلیش کارتوس (کروی سلکا ، 20-45 μm ، 100 Å ، آرڈر نمبر: SW-522-012-SP) | 12 جی سیپفلاش سی 18 اے کیو آر پی فلیش کارتوس (کروی سلکا ، 20-45 μm ، 100 Å ، آرڈر نمبر ： SW-522-012-SP (AQ (AQ). | ||
| طول موج | 254 این ایم | |||
| موبائل مرحلہ | سالوینٹ A ： پانی سالوینٹ بی ： میتھانول | |||
| بہاؤ کی شرح | 30 ملی لیٹر/منٹ | |||
| نمونہ لوڈنگ | 300 ملی گرام (86 ٪ کی پاکیزگی کے ساتھ شاندار بلیو ایف سی ایف) | |||
| تدریجی | وقت (سی وی) | سالوینٹ بی (٪) | وقت (سی وی) | سالوینٹ بی (٪) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
نتائج اور بحث
نمونہ صاف کرنے اور طہارت کے لئے ایک سیپفلاش سی 18 اے کیو آر پی فلیش کارتوس استعمال کیا گیا تھا۔ مرحلہ میلان کا استعمال کیا گیا تھا جس میں خالص پانی کو موبائل مرحلے کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا اور الیوشن کے آغاز میں اور 10 کالم جلدوں (سی وی) کے لئے چلائیں۔ جیسا کہ شکل 3 میں دکھایا گیا ہے ، جب موبائل مرحلے کے طور پر خالص پانی کا استعمال کرتے وقت ، نمونے کو فلیش کارتوس پر مکمل طور پر برقرار رکھا گیا تھا۔ اس کے بعد ، موبائل مرحلے میں میتھانول کو براہ راست 100 to تک بڑھا دیا گیا اور 7.5 CV کے لئے تدریجی کو برقرار رکھا گیا۔ نمونہ 11.5 سے 13.5 سی وی تک تیار کیا گیا تھا۔ جمع شدہ حصوں میں ، نمونہ حل NAH2PO4 بفر حل سے میتھانول سے تبدیل کیا گیا تھا۔ انتہائی پانی کے حل کے ساتھ موازنہ کرتے ہوئے ، میتھانول کو اس کے بعد کے مرحلے میں روٹری وانپیکرن کے ذریعہ ختم کرنا بہت آسان تھا ، جو مندرجہ ذیل تحقیق کو سہولت فراہم کرتا ہے۔
چترا 3۔ C18AQ کارتوس پر نمونے کا فلیش کرومیٹوگرام۔
مضبوط قطعیت کے نمونوں کے لئے C18AQ کارتوس اور باقاعدہ C18 کارتوس کے برقرار رکھنے کے رویے کا موازنہ کرنے کے لئے ، متوازی موازنہ ٹیسٹ کیا گیا۔ ایک سیپفلاش سی 18 آر پی فلیش کارتوس استعمال کیا گیا تھا اور نمونے کے لئے فلیش کرومیٹوگرام کو شکل 4 میں دکھایا گیا تھا۔ باقاعدگی سے سی 18 کارتوس کے لئے ، سب سے زیادہ برداشت کرنے والے آبی مرحلے کا تناسب تقریبا 90 90 ٪ ہے۔ لہذا اسٹارٹ میلان 90 ٪ پانی میں 10 ٪ میتھانول مقرر کیا گیا تھا۔ جیسا کہ شکل 4 میں دکھایا گیا ہے ، اعلی پانی کے تناسب کی وجہ سے سی 18 زنجیروں کے ہائیڈروفوبک مرحلے کے خاتمے کی وجہ سے ، نمونہ کو باقاعدگی سے سی 18 کارتوس پر بمشکل برقرار رکھا گیا تھا اور موبائل فیز کے ذریعہ براہ راست اس کی مدد کی گئی تھی۔ اس کے نتیجے میں ، نمونہ صاف کرنے یا طہارت کا عمل مکمل نہیں کیا جاسکتا۔
چترا 4۔ باقاعدہ C18 کارتوس پر نمونے کا فلیش کرومیٹوگرام۔
لکیری میلان کے ساتھ موازنہ کرتے ہوئے ، مرحلہ میلان کے استعمال کے مندرجہ ذیل فوائد ہیں:
1. نمونہ صاف کرنے کے لئے سالوینٹ کا استعمال اور رن ٹائم کم کیا جاتا ہے۔
2. ہدف کی مصنوعات ایک تیز چوٹی میں شامل ہوتی ہے ، جو جمع شدہ حصوں کی مقدار کو کم کرتی ہے اور اس طرح مندرجہ ذیل روٹری بخارات کے ساتھ ساتھ وقت کی بچت میں بھی سہولت فراہم کرتی ہے۔
3. جمع شدہ مصنوعات میتھانول میں ہے جس کو بخارات بنانا آسان ہے ، اس طرح خشک ہونے کا وقت کم ہوجاتا ہے۔
آخر میں ، نمونے کی تزکیہ کے لئے جو مضبوطی سے قطبی یا انتہائی ہائیڈرو فیلک ہے ، سیپفلاش سی 18 اے کیو آر پی فلیش کارٹریجز تیاری فلیش کرومیٹوگرافی سسٹم سیپابین ™ مشین کے ساتھ مل کر ایک تیز اور موثر حل پیش کرسکتی ہیں۔
سیپفلاش بانڈڈ سیریز سی 18 آر پی فلیش کارتوس کے بارے میں
سینٹائی ٹکنالوجی (جیسا کہ ٹیبل 2 میں دکھایا گیا ہے) سے مختلف خصوصیات کے ساتھ سیپفلاش سی 18 اے کیو آر پی فلیش کارتوس کی ایک سیریز ہے۔
| آئٹم نمبر | کالم کا سائز | بہاؤ کی شرح (ایم ایل/منٹ) | زیادہ سے زیادہ دباؤ (PSI/بار) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 جی | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 جی | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 جی | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 جی | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 جی | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 جی | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 جی | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 جی | 40-80 | 250/17.2 |
ٹیبل 2۔ سیپفلاش سی 18 اے کیو آر پی فلیش کارتوس۔
پیکنگ میٹریل: اعلی کارکردگی والے کروی C18 (AQ) -بنڈڈ سلکا ، 20-45 μm ، 100 Å۔
لوگی (جیسا کہ ٹیبل 2 میں دکھایا گیا ہے)۔
پوسٹ ٹائم: اگست 27-2018