Застосування сильний аніонний хроматографічний стовпчики Sepaflash у очищенні кислих сполук

Результати та обговорення

По-перше, зразок суміші відокремлювали нормальним фазовим флеш-картриджем, попередньо упакованим регулярним кремнеземом. Як показано на малюнку 3, два компоненти у зразку елюювали з картриджа один за одним. Далі для очищення зразка був використаний сакс -флеш -картридж. Як показано на малюнку 4, кислий компонент В повністю зберігався на картриджі Сакса. Нейтральний компонент А поступово елюювали з картриджа з елююванням мобільної фази.

Малюнок 3. Спалахна хроматограма зразка на звичайній нормальній фазовій картриджі.

Малюнок 4. Спалахна хроматограма зразка на картриджі Sax.
Порівнюючи малюнки 3 та малюнка 4, компонент А має непослідовну форму піку на двох різних флеш -картриджах. Щоб підтвердити, чи відповідає пік елюції компоненту, ми можемо використовувати повну функцію сканування довжини хвилі, яка вбудована в програмне забезпечення управління машиною Sepabean ™. Відкрийте експериментальні дані двох розділів, перетягніть на лінію індикатора на осі часу (CV) у хроматограмі до найвищої точки, а друга найвища точка піку елюції, що відповідає компоненту А, і спектр повної довжини хвилі цих двох точок буде автоматично показаний нижче хроматограми (як показано на рисунку 5 та рисунку 6). Порівнюючи дані спектру повної довжини хвилі цих двох розділів, компонент А має послідовний спектр поглинання у двох експериментах. З причини компонента A має непослідовну піку піку на двох різних флеш -картриджах, припускається, що в компоненті є специфічна домішка А, яка має різне утримання на нормальній фазовій картриджі та картриджі сакса. Тому елююча послідовність відрізняється для компонента А та домішки на цих двох флеш -картриджах, що призводить до непослідовної форми піку на хроматограмах.

Малюнок 5. Спектр повної довжини хвилі компонента A та домішки, розділеної нормальною фазовою картриджою.

Малюнок 6. Спектр повної довжини хвилі компонента A та домішки, розділених саксовим картриджом.

Якщо цільовий продукт, який підлягає зібранню, є нейтральним компонентом А, завдання з очищення може бути легко виконане, використовуючи безпосередньо за допомогою картриджа SAX для елюції після завантаження зразка. З іншого боку, якщо цільовий продукт, який підлягає зібранню, є кислим компонентом B, спосіб вивільнення захоплення може бути прийнятий лише з незначним регулюванням в експериментальних етапах: коли зразок завантажувався на сакс-картридж, а нейтральний компонент А був повністю елюйований нормальною фазовою органічною розчинами, переключення мобільної фази на метанолоний розчин, що містить 5% оцтової кислоти. Іони ацетату в мобільній фазі будуть конкурувати з компонентом B для зв'язування з четвертинними іонними групами аміну на стаціонарній фазі картриджа Sax, тим самим елююючи компонент B з картриджа для отримання цільового продукту. Хроматограма зразка, розділеної в режимі іонообміну, була показана на малюнку 7.

Малюнок 7. Флеш -хроматограма компонента B елюється в режимі іонообміну на картриджі Sax.

На закінчення, кислий або нейтральний зразок може бути швидко очищений за допомогою картриджа SAX у поєднанні з нормальною фазовою картриджою, використовуючи різні стратегії очищення. Крім того, за допомогою функції повного сканування довжини хвилі, вбудованого в контрольне програмне забезпечення машини Sepabean ™, характерний спектр поглинання елюйованих дробів можна легко порівняти та підтвердити, допомагаючи дослідникам швидко визначити композицію та чистоту елюйованих фракцій і, таким чином, підвищити ефективність роботи.