Руї Хуанг, Бо Сю
Застосування науково -дослідного центру
Вступ
Пептид - це сполука, що складається з амінокислот, кожна з яких має унікальні фізичні та хімічні властивості за рахунок різних типів та порядку амінокислотних залишків, що складають його послідовність. З розвитком хімічного синтезу твердотільної фази хімічний синтез різних активних пептидів досяг великого прогресу. Однак через складний склад пептиду, отриманого за допомогою синтезу твердої фази, кінцевий продукт повинен бути очищений надійними методами розділення. Загально використовувані методи очищення пептидів включають іонообмінну хроматографію (IEC) та високопродуктивну рідинну хроматографію реверсованої фази (RP-HPLC), які мають недоліки низької вантажопідйомності, високу вартість розділених носіїв, складних та дорожчих розділених обладнання для швидкого очищення малих молекул PEPTIDES (MW <1 KDA). який був використаний картридж Sepaflash RP C18 для швидкого очищення тимопентину (TP-5), і цільовий продукт, що відповідає вимогам, були отримані.
Малюнок 1. 20 Поширені амінокислоти (відтворені з www.bachem.com).
Існує 20 видів амінокислот, які поширені в складі пептидів. Ці амінокислоти можна розділити на наступні групи відповідно до їх полярності та властивості кислоти: неполярні (гідрофобні), полярні (незаряджені), кислі або основні (як показано на малюнку 1). У пептидній послідовності, якщо амінокислоти, що складаються з послідовності, здебільшого полярні (як позначені рожевим кольором на малюнку 1), такі як цистеїн, глютамін, аспарагін, серин, треонін, тирозин тощо. Під час процедури очищення цих сильних полярних пептидних зразків шляхом хроматографії оберненої фази відбудеться явище, яке називається колапс гідрофобної фази (див. Раніше опубліковану примітку програми Santai Technologies: Обвал гідрофобної фази, AQ, що перевернули фазові стовпці фазової хроматографії та їх застосування). Порівняно з звичайними колонами C18, вдосконалені стовпці C18AQ найбільш підходять для очищення сильних полярних або гідрофільних зразків. У цій публікації сильний полярний пептид був використаний як зразок та очищений стовпцем C18AQ. Як результат, цільовий продукт, що відповідає вимогам, було отримано і може бути використаний у наступних дослідженнях та розробках.
| Інструмент | Сепабан™машина 2 | |||
| Картридж | 12 г флеш-картриджа SEPAFLASH C18 RP (сферичний кремнезем, 20-45 мкм, 100 Å, замовляйте монбер: SW-5222-012-SP) | 12 г флеш-картриджа SEPAFLASH C18AQ RP (сферичний кремнезем, 20-45 мкм, 100 Å, номер замовлення: SW-5222-012 SP (AQ)) | ||
| Довжина хвилі | 254 нм, 220 нм | 214 нм | ||
| Мобільна фаза | Розчинник A: вода Розчинник B: ацетонітрил | |||
| Витрата | 15 мл/хв | 20 мл/хв | ||
| Завантаження зразка | 30 мг | |||
| Градієнт | Час (CV) | Розчинник B (%) | Час (хв) | Розчинник B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1,0 | 0 | 1,0 | 4 | |
| 10,0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15,5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29,0 | 87 | |||
Результати та обговорення
Для порівняння продуктивності очищення для зразка полярного пептиду між звичайною колонкою C18 та стовпчиком C18AQ ми використовували звичайний стовпчик C18 для очищення спалаху зразка в якості запуску. Як показано на малюнку 2, через обвал гідрофобної фази ланцюгів С18, спричиненого високим водним співвідношенням, зразок ледь зберігався на звичайному картриджі С18 і був безпосередньо елюйований мобільною фазою. Як результат, зразок не був ефективно відокремлений та очищений.
Малюнок 2. Спалахна хроматограма зразка на звичайному картриджі C18.
Далі ми використовували стовпець C18AQ для очищення спалаху зразка. Як показано на малюнку 3, пептид ефективно зберігався на стовпці, а потім елюювався. Цільовий продукт відокремлювали від домішок у сирому зразку та зібраним. Після ліофілізації, а потім проаналізовано за допомогою ВЕРХ, очищений продукт має чистоту 98,2% і може бути додатково використаний для досліджень та розробок наступного кроку.
Малюнок 3. Спалахна хроматограма зразка на картриджі C18AQ.
На закінчення, Flash Cartridge Sepaflash C18AQ RP у поєднанні з системою спалаху хроматографії Sepabean™Машина може запропонувати швидке та ефективне рішення для очищення сильних полярних або гідрофільних зразків.
Існує серія флеш -картриджів Sepaflash C18AQ RP з різними специфікаціями від технології Santai (як показано в таблиці 2).
| Номер товару | Розмір стовпчика | Витрата (мл/хв) | Макс. (PSI/бар) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 г. | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 г | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025 SP (AQ) | 33 г. | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 г. | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 г | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 г. | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 г | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 г | 40-80 | 250/17.2 |
Таблиця 2. Flash -картриджі Sepaflash C18AQ RP. Пакувальні матеріали: високоефективність сферичного кремнію C18 (AQ), кремнезему, 20-45 мкм, 100 Å.
Для отримання додаткової інформації про детальні специфікації машини Sepabean ™ або інформацію про замовлення на флеш -картриджі серії Sepaflash відвідайте наш веб -сайт.
Час посади: 12-2018 жовтня