Руи Хуанг, Бо Сю
Тапшыру фәнни-тикшеренү үзәге
Кереш сүз
Пептид - аминокислоталардан торган кушылма, аларның һәрберсе үзенчәлекле физик һәм химик үзенчәлекләргә ия, аминокислота калдыкларының төрлелеге һәм тәртибе аркасында.Каты фазалы химик синтез үсеше белән, төрле актив пептидларның химик синтезы зур уңышларга иреште.Ләкин, каты фаз синтезы белән алынган пептидның катлаулы составы аркасында, соңгы продукт ышанычлы аеру ысуллары белән чистартылырга тиеш.Пептидлар өчен еш кулланыла торган чистарту ысулларына ион алмашу хроматографиясе (IEC) һәм кире фазалы югары җитештерүчән сыек хроматография (RP-HPLC) керә, аларда түбән үрнәк йөкләү сыйфаты, аеру медиа бәясе, катлаулы һәм кыйммәт аеру җиһазлары, Кечкенә молекула пептидларын тиз чистарту өчен (MW <1 kDa), уңышлы куллану очраклары Сантаи Технологияләр тарафыннан бастырылган, анда Тимопентинны (TP-5) тиз чистарту өчен SepaFlash RP C18 картридж кулланылган. таләпләргә туры килгән максатлы продукт алынды.
Рәсем 1. 20 киң таралган аминокислоталар (www.bachem.com сайтыннан чыгарылган).
Пептидлар составында киң таралган 20 төр аминокислоталар бар.Бу аминокислоталарны полярлыгы һәм кислота-төп милеге буенча түбәндәге төркемнәргә бүлеп була: поляр булмаган (гидрофобик), поляр (зарядсыз), кислоталы яки төп (1 нче рәсемдә күрсәтелгәнчә).Пептид эзлеклелегендә, эзлеклелекне тәшкил иткән аминокислоталар күбесенчә поляр булганнар (1 нче рәсемдә алсу төс белән билгеләнгән), цистин, Глутамин, Аспарагин, Серин, Треонин, Тирозин һ.б. кебек, бу пептид көчле булырга мөмкин. полярлыгы һәм суда бик эри торган булуы.Кире фазалы хроматография ярдәмендә бу көчле поляр пептид үрнәкләрен чистарту процедурасы вакытында гидрофобик фазаның җимерелүе дип аталган күренеш барлыкка киләчәк (Сантаи Технологияләр тарафыннан алдан бастырылган гаризаны карагыз: Гидрофобик Фаза җимерелүе, AQ Кире Фаза Хроматография Колонналары һәм аларның кушымталары).Гадәттәге C18 баганалары белән чагыштырганда, яхшыртылган C18AQ баганалары көчле поляр яки гидрофилик үрнәкләрне чистарту өчен иң кулай.Бу язмада көчле поляр пептид үрнәк итеп кулланылды һәм C18AQ баганасы белән чистартылды.Нәтиҗәдә, таләпләргә туры килгән максатлы продукт алынды һәм киләсе тикшеренүләрдә һәм эшләнмәләрдә кулланылырга мөмкин.
| Инструмент | SepaBean™машина 2 | |||
| Картридж | 12 г SepaFlash C18 RP флеш картридж (сферик кремний, 20 - 45 μm, 100 Å, нунбер заказы ： SW-5222-012-SP) | 12 г SepaFlash C18AQ RP флеш картридж (сферик кремний, 20 - 45 μm, 100 Å, заказ номеры ： SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Дулкын озынлыгы | 254 нм, 220 нм | 214 нм | ||
| Кәрәзле этап | Эретүче А: Су В эретүче: Ацетонитрил | |||
| Агым тизлеге | 15 мл / мин | 20 мл / мин | ||
| Ampleрнәк йөкләү | 30 мг | |||
| Градиент | Вакыт (РВ) | В эретүче В (%) | Вакыт (мин) | В эретүче В (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Нәтиҗәләр һәм фикерләү
Поляр пептид үрнәге өчен чистарту эшләрен гадәти C18 баганасы һәм C18AQ баганасы арасында чагыштыру өчен, без үрнәкне флеш чистарту өчен гадәти C18 баганасын кулландык.2 нче рәсемдә күрсәтелгәнчә, югары су коэффициенты аркасында килеп чыккан C18 чылбырларының гидрофобик фаза җимерелүе аркасында, үрнәк гадәти C18 картриджында сакланып калган һәм турыдан-туры мобиль фаза белән чыгарылган.Нәтиҗәдә, үрнәк эффектив аерылмады һәм чистартылмады.
Рәсем 2. Гадәттәге C18 картридждагы үрнәкнең флеш хроматограммасы.
Алга таба, без үрнәкне флеш чистарту өчен C18AQ баганасын кулландык.3 нче рәсемдә күрсәтелгәнчә, пептид баганада эффектив сакланган, аннары чыгарылган.Максатлы продукт чималдагы пычраклардан аерылып, җыелган.Лиофилизациядән соң, аннары HPLC тарафыннан анализланганнан соң, чистартылган продуктның чисталыгы 98,2% тәшкил итә һәм алдагы адымнарны тикшерү һәм эшкәртү өчен кулланырга мөмкин.
Рәсем 3. C18AQ картридждагы үрнәкнең флеш хроматограммасы.
Ахырда, SepaFlash C18AQ RP флеш картридж SepaBean флеш хроматография системасы белән кушылды™машина көчле поляр яки гидрофилик үрнәкләрне чистарту өчен тиз һәм эффектив чишелеш тәкъдим итә ала.
Сантай технологиясеннән төрле спецификацияләр булган SepaFlash C18AQ RP флеш патроннары сериясе бар (таблицада күрсәтелгәнчә).
| Предмет саны | Колонның размеры | Агым темплары (мл / мин) | Макс (psi / bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 г. | 5-15 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 г. | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 г. | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 г. | 15-30 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 г. | 25-50 | 350 / 24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 г. | 30-60 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 г. | 40-80 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 г. | 40-80 | 250 / 17.2 |
Таблица 2. SepaFlash C18AQ RP флеш патроннары.Урнаштыру материаллары: efficiencyгары эффективлык сферик C18 (AQ) - кремний, 20 - 45 μm, 100 Å.
SepaBean ™ машинасының җентекле спецификасы, яки SepaFlash серияле флеш патроннарда заказ бирү турында тулырак мәгълүмат өчен безнең сайтка керегез.
Пост вакыты: 12-2018 октябрь