Хонченг Ван, Бо Сю
Тапшыру фәнни-тикшеренү үзәге
Кереш сүз
Стационар фазаның һәм мобиль фазаның чагыштырмача поляритлары буенча сыек хроматографияне гадәти фаза хроматографиясенә (NPC) һәм кире фаза хроматографиясенә (RPC) бүлеп була.РПК өчен күчмә фазаның полярлыгы стационар фазага караганда көчлерәк.RPC югары эффективлыгы, яхшы резолюциясе һәм ачык тоту механизмы аркасында сыек хроматографияне аеру режимында иң киң кулланылганга әйләнде.Шуңа күрә РПК төрле поляр яки поляр булмаган кушылмаларны аеру һәм чистарту өчен яраклы, шул исәптән алкалоидлар, углеводлар, май кислоталары, стероидлар, нуклеин кислоталары, аминокислоталар, пептидлар, протеиннар һ.б. РПКда иң еш кулланыла торган стационар этап. Төрле функциональ төркемнәр белән бәйләнгән кремний гел матрицасы, шул исәптән C18, C8, C4, фенил, циано, амино һ.б. Бу бәйләнгән функциональ төркемнәр арасында иң киң кулланылганы C18.Хәзерге вакытта РПКның 80% тан артыгы C18 бәйләнешле этапны куллана.Шуңа күрә C18 хроматография баганасы һәр лаборатория өчен универсаль баганага әйләнде.
C18 баганасы бик күп кушымталарда кулланылса да, бик поляр яки югары гидрофилик булган кайбер үрнәкләр өчен, C18 баганаларында мондый үрнәкләрне чистарту өчен проблемалар булырга мөмкин.РПКда еш кулланыла торган элитация эреткечләрен полярлыгы буенча заказ бирергә мөмкин: су <метанол <ацетонитрил <этанол <тетрахидрофуран <изопропанол.Бу үрнәкләр өчен баганада яхшы саклану өчен (көчле поляр яки югары гидрофилик) мобиль этап буларак су системасының зур өлеше кулланылырга тиеш.Ләкин, чиста су системасын (чиста су яки саф тоз эремәсен дә кертеп) күчмә фаза итеп кулланганда, C18 баганасының стационар фазасындагы озын углерод чылбыры судан сакланырга һәм бер-берсе белән кушылырга омтыла, нәтиҗәдә тиз арада кими. багананың тоту сыйфаты яки хәтта тоту юк.Бу күренеш "гидрофобик фазаның җимерелүе" дип атала (1 нче рәсемнең сул өлешендә күрсәтелгәнчә).Колонка метанол яки ацетонитрил кебек органик эреткечләр белән юылганда кире кайтса да, ул баганага зыян китерергә мөмкин.Шуңа күрә бу хәл килеп чыкмасын өчен кирәк.
Рәсем 1. Даими C18 баганасында (сулда) һәм C18AQ баганасында (уңда) кремний гел өслегендә бәйләнгән этапларның схематик схемасы.
Aboveгарыда телгә алынган проблемаларны чишү өчен, хроматографик төрү материаллары җитештерүчеләре техник камилләштерделәр.Бу камилләштерүләрнең берсе кремний матрицасы өслегендә кайбер үзгәрешләр кертү, мәсәлән, гидрофилик циано төркемнәрен кертү (1 нче рәсемнең уң өлешендә күрсәтелгәнчә), кремний гел өслеген гидрофилик итү өчен.Шулай итеп, кремний өслегендәге C18 чылбырлары югары су шартларында тулысынча киңәйтелергә һәм гидрофобик фаза җимерелүеннән сакланырга мөмкин.Бу үзгәртелгән C18 баганалары су C18 баганалары дип атала, ягъни C18AQ баганалары, алар югары су элита шартлары өчен эшләнгән һәм 100% су системасына түзә ала.C18AQ баганалары көчле поляр кушылмаларны аеруда һәм чистартуда киң кулланылган, шул исәптән органик кислоталар, пептидлар, нуклеозидлар һәм суда эри торган витаминнар.
Дезализация - үрнәкләр өчен флэш чистартуда C18AQ баганаларының типик кулланылышларының берсе, ул үрнәкне эретүче тоз яки буфер компонентларын алдагы тикшеренүләрдә куллануны җиңеләйтү өчен.Бу язмада көчле поляритлы Brilliant Blue FCF үрнәк буларак кулланылды һәм C18AQ баганасында чистартылды.Solрнәк эретүче буфер эремәсеннән органик эретүче белән алыштырылды, шулай итеп түбәндәге әйләнү парга әйләнде, шулай ук эреткечләр һәм эш вакыты сакланды.Моннан тыш, үрнәкнең чисталыгы үрнәктәге кайбер пычракларны бетереп яхшырды.
Эксперименталь бүлек
Рәсем 2. ampleрнәкнең химик төзелеше.
Бу язмада үрнәк итеп Brilliant Blue FCF кулланылды.Чималның чисталыгы 86% иде, һәм үрнәкнең химик структурасы 2 нче рәсемдә күрсәтелде. Ampleрнәк чишелешен әзерләү өчен, Brilliant Blue FCF 300 мг порошок чималы 1 M NaH2PO4 буфер эремәсендә эретелде һәм яхшы селкенде. бөтенләй ачык чишелеш.Аннары үрнәк чишелеш флеш баганага инжектор тарафыннан кертелде.Флеш чистартуның эксперименталь көйләнеше 1 нче таблицада күрсәтелгән.
| Инструмент | SepaBean ™ машинасы2 | |||
| Картридж | 12 г SepaFlash C18 RP флеш картридж (сферик кремний, 20 - 45 μm, 100 Å, Заказ номеры: SW-5222-012-SP) | 12 г SepaFlash C18AQ RP флеш картридж (сферик кремний, 20 - 45 μm, 100 Å, заказ номеры ： SW-5222-012-SP (AQ))） | ||
| Дулкын озынлыгы | 254 нм | |||
| Кәрәзле этап | А Су В ： Метанол | |||
| Агым тизлеге | 30 мл / мин | |||
| Ampleрнәк йөкләү | 300 мг (чисталыгы 86% булган Бриллиант Зәңгәр FCF) | |||
| Градиент | Вакыт (РВ) | В эретүче В (%) | Вакыт (РВ) | В эретүче В (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Нәтиҗәләр һәм фикерләү
Сепализацияләү һәм чистарту өчен SepaFlash C18AQ RP флеш картридж кулланылды.Адым градиенты кулланылды, анда саф су мобиль фаза буларак элитация башында кулланылды һәм 10 багана күләмендә (CV) эшләде.3 нче рәсемдә күрсәтелгәнчә, чиста су мобиль фаза буларак кулланганда, үрнәк флеш картриджда тулысынча сакланган.Алга таба, күчмә этаптагы метанол турыдан-туры 100% ка күтәрелде һәм градиент 7,5 CV өчен сакланды..5рнәк 11,5 дән 13,5 РВга кадәр чыгарылды.Collectedыелган фракцияләрдә үрнәк эремә NaH2PO4 буфер эремәсеннән метанолга алыштырылды.Highlyгары су эремәсе белән чагыштырганда, метанолны чираттагы адымда әйләнүче парга әйләндерү җиңелрәк булган, бу түбәндәге тикшеренүләрне җиңеләйтә.
Рәсем 3. C18AQ картридждагы үрнәкнең флеш хроматограммасы.
Көчле поляритлык үрнәкләре өчен C18AQ картриджын һәм C18 картриджын тоту тәртибен чагыштыру өчен параллель чагыштыру тесты үткәрелде.SepaFlash C18 RP флеш картридж кулланылды һәм үрнәк өчен флеш хроматограмма 4 нче рәсемдә күрсәтелде. Даими C18 патроннары өчен иң югары чыдамлы су фазасы якынча 90% тәшкил итә.Шуңа күрә старт градиенты 10% метанолда 90% суда куелган.4 нче рәсемдә күрсәтелгәнчә, C18 чылбырларының гидрофобик фазаның җимерелүе аркасында, югары су катнашуы аркасында, үрнәк гадәти C18 картриджында сакланып калган һәм турыдан-туры мобиль фаза белән чыгарылган.Нәтиҗәдә, сусызландыру яки чистарту үрнәге тәмамлана алмый.
Рәсем 4. Гадәттәге C18 картридждагы үрнәкнең флеш хроматограммасы.
Сызыклы градиент белән чагыштырганда, адым градиентын куллану түбәндәге өстенлекләргә ия:
1. Чистарту өчен эретүче куллану һәм эш вакыты кыскартыла.
2. Максатлы продукт кискен биеклектә күтәрелә, ул җыелган фракцияләрнең күләмен киметә һәм шулай итеп түбәндәге әйләнү парга әйләнүне җиңеләйтә, шулай ук вакытны саклый.
3. collectedыелган продукт метанолда, аны парга әйләндерү җиңел, шулай итеп киптерү вакыты кими.
Ахырда, көчле поляр яки югары гидрофилик булган үрнәкне чистарту өчен, SepaFlash C18AQ RP флеш патроннары SepaBean ™ Machine флеш хроматография системасы белән кушылып, тиз һәм эффектив чишелеш тәкъдим итә алалар.
SepaFlash Bonded Series C18 RP флеш патроннары турында
Сантай технологиясеннән төрле спецификацияләр булган SepaFlash C18AQ RP флеш патроннары сериясе бар (таблицада күрсәтелгәнчә).
| Предмет саны | Колонның размеры | Агым темплары (мл / мин) | Макс (psi / bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 г. | 5-15 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 г. | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 г. | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 г. | 15-30 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 г. | 25-50 | 350 / 24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 г. | 30-60 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 г. | 40-80 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 г. | 40-80 | 250 / 17.2 |
Таблица 2. SepaFlash C18AQ RP флеш патроннары.
Урнаштыру материаллары: efficiencyгары эффективлык сферик C18 (AQ) - кремний, 20 - 45 μm, 100 Å.
логи (таблицада күрсәтелгәнчә).
Пост вакыты: 27-2018 август