Meiyuan Qian, Yuefeng Tan, Bo Xu
Uygulama Ar -Ge Merkezi
giriiş
Taxus (Taxus chinensis veya Çin porsuk) ülke tarafından korunan vahşi bir bitkidir. Kuaterner buzullar tarafından geride bırakılan nadir ve nesli tükenmekte olan bir bitkidir. Aynı zamanda dünyanın tek doğal tıbbi bitkisidir. Taxus, Kuzey Yarımkürenin ılıman bölgesinde orta subtropikal bölgeye dağıtılır ve dünyada yaklaşık 11 tür vardır. Çin'de 4 tür ve 1 çeşit vardır: Kuzeydoğu Taxus, Yunnan Taxus, Taxus, Tibet Taxus ve Güney Taxus. Bu beş tür Güneybatı Çin, Güney Çin, Orta Çin, Doğu Çin, Kuzeybatı Çin, Kuzeydoğu Çin ve Tayvan'da dağıtılmaktadır. Taksiler tesisleri taksonlar, flavonoidler, lignans, steroidler, fenolik asitler, seskiterpenler ve glikozitler gibi çok çeşitli kimyasal bileşenler içerir. Ünlü anti-tümör ilaç taxol (veya paklitaksel) bir tür taksondur. Taxol benzersiz antikanser mekanizmalarına sahiptir. Taxol, mikrotübülleri onlarla birlikte tarayarak “dondurabilir” ve mikrotübüllerin hücre bölünmesi sırasında kromozomları ayırmasını önleyebilir, böylece bölme hücrelerinin, özellikle hızla çoğalan kanser hücrelerinin ölümüne yol açar [1]. Ayrıca, makrofajları aktive ederek TAXOL, TNF-a (tümör nekroz faktörü) reseptörlerinde bir azalmaya ve TNF-a salınımına neden olur, böylece tümör hücrelerini öldürür veya inhibe eder [2]. Ayrıca, Taxol, FAS/FASL aracılık eden veya sistein proteaz sistemini aktive ederek apoptotik reseptör yoluna etki ederek apoptozu indükleyebilir [3]. Çoklu hedef antikanser etkisi nedeniyle Taxol, yumurtalık kanseri, meme kanseri, küçük hücreli olmayan akciğer kanseri (KHDAK), mide kanseri, özofagus kanseri, mesane kanseri, prostat kanseri, malign melanom, baş ve boyun kanseri tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır [4]. Özellikle ileri meme kanseri ve ileri yumurtalık kanseri için, Taxol olağanüstü bir iyileştirici etkiye sahiptir, bu nedenle “kanser tedavisi için son savunma hattı” olarak bilinir.
Taxol, son yıllarda uluslararası pazardaki en popüler antikanser ilacıdır ve önümüzdeki 20 yıl içinde insanlar için en etkili antikanser ilaçlarından biri olarak kabul edilmektedir. Son yıllarda, nüfus ve kanser insidansının patlayıcı büyümesi ile Taxol talebi de önemli ölçüde artmıştır. Şu anda, klinik veya bilimsel araştırma için gerekli olan Taxol esas olarak doğrudan taksilerden çıkarılmaktadır. Ne yazık ki, Taxol'un bitkilerdeki içeriği oldukça düşüktür. Örneğin, Taxol içeriği, genellikle en yüksek içeriğe sahip olduğu düşünülen Taxus Brevifolia'nın kabuğunda sadece% 0.069'dur. 1 g Taxol ekstraksiyonu için yaklaşık 13.6 kg taksis kabuğu gerektirir. Bu tahmine dayanarak, bir yumurtalık kanseri hastasını tedavi etmek 100 yıldan fazla olan 3-12 taksi ağacı alır. Sonuç olarak, çok sayıda taksi ağacı kesilmiş ve bu değerli türler için yok olmaya neden olmuştur. Buna ek olarak, taksiler kaynaklarda çok zayıftır ve büyümede yavaştır, bu da TAXOL'un daha fazla geliştirilmesi ve kullanımını zorlaştırır.
Şu anda, Taxol'un toplam sentezi başarıyla tamamlanmıştır. Bununla birlikte, sentetik yolu çok karmaşık ve yüksek maliyetlidir, bu da endüstriyel önemi yoktur. Taxolün yarı sentetik yöntemi artık nispeten olgundur ve yapay dikime ek olarak Taxol kaynağını genişletmenin etkili bir yolu olarak kabul edilir. Kısaca, Taxol'in yarı sentezinde, taksiler tesislerinde nispeten bol olan taksol öncüsü bileşiği çıkarılır ve daha sonra kimyasal sentez ile Taxol'e dönüştürülür. Taxus baccata iğnelerinde 10-deasetilbakcatin ⅲ içeriği%0.1'e kadar olabilir. Ve iğnelerin kabuklarla karşılaştırılmasını yenilemesi kolaydır. Bu nedenle, 10-deasetilbaccatin ⅲ temelinde Taxol'in yarı sentezi, araştırmacılardan giderek daha fazla dikkat çekmektedir [5] (Şekil 1'de gösterildiği gibi).
Şekil 1. 10-deasetilbakatin ⅲ temelinde Taxol'in yarı sentetik yolu.
Bu yazıda, taksis tesisi ekstresi, Sepaflash C18 Ters Fazlı (RP) Flash kartuşları ile birlikte bir flaş preparatif sıvı kromatografi sistemi Sepabean ™ makinesi ile saflaştırıldı. Saflık gereksinimlerini karşılayan hedef ürün elde edildi ve sonraki bilimsel araştırmalarda kullanılabilir, bu tür doğal ürünlerin hızlı bir şekilde saflaştırılması için uygun maliyetli bir çözüm sunar.
| Enstrüman | Sepabean ™ makinesi | |
| Kartuş | 12 G Sepaflash C18 RP Flaş Kartuşu (Küresel Silika, 20-45μm, 100 Å, Sipariş Numarası ： SW-5222-012-SP) | |
| Dalga boyu | 254 nm (tespit), 280 nm (izleme) | |
| Mobil aşama | Solvent A: Su | |
| Solvent B: Metanol | ||
| Akış hızı | 15 ml/dakika | |
| Örnek Yükleme | 1 ml DMSO içinde çözülmüş 20 mg ham numune | |
| Eğim | Zaman (Min) | Çözücü B (%) |
| 0 | 10 | |
| 5 | 10 | |
| 7 | 28 | |
| 14 | 28 | |
| 16 | 40 | |
| 20 | 60 | |
| 27 | 60 | |
| 30 | 72 | |
| 40 | 72 | |
| 43 | 100 | |
| 45 | 100 | |
Sonuçlar ve tartışma
Taxus'tan gelen ham ekstrakt için flaş kromatogramı Şekil 2'de gösterilmiştir. Kromatogram, hedef ürün ve taban çizgisi ayırma elde edilen safsızlıklar analiz ederek gösterilmiştir. Ayrıca, çoklu örnek enjeksiyonları ile iyi tekrarlanabilirlik de gerçekleştirilmiştir (veriler gösterilmemiştir). Manuel kromatografi yöntemindeki ayrımın cam sütunlarla tamamlanması yaklaşık 4 saat sürecektir. Geleneksel manuel kromatografi yöntemi ile karşılaştırıldığında, bu yazıdaki otomatik saflaştırma yöntemi, tüm saflaştırma görevini tamamlamak için sadece 44 dakika gerektirir (Şekil 3'te gösterildiği gibi). Zamanın% 80'inden fazlası ve büyük miktarda çözücü, otomatik yöntem alarak kaydedilebilir, bu da maliyeti etkili bir şekilde azaltabilir ve iş verimliliğini büyük ölçüde artırabilir.
Şekil 2. Taxustan ham özün flaş kromatogramı.
Şekil 3. Manuel kromatografi yönteminin otomatik saflaştırma yöntemi ile karşılaştırılması.
Sonuç olarak, sepabean ™ makinesi ile sepaflash C18 RP flaş kartuşlarının taranması, taksiler ekstresi gibi doğal ürünlerin hızlı bir şekilde saflaştırılması için hızlı ve verimli bir çözüm sunabilir.
Referanslar
1. Alushin GM, Lander GC, Kellogg EH, Zhang R, Baker D ve Nogales E. Yüksek çözünürlüklü mikrotübül yapıları, GTP hidrolizi üzerine aβ-tubulin'deki yapısal geçişleri ortaya çıkarır. Cell, 2014, 157 (5), 1117-1129.
2. Burkhart CA, Berman JW, Swindell CS ve Horwitz SB. Taxol yapısı ve diğer taksonlar arasında tümör nekroz faktörü-a gen ekspresyonu ve sitotoksisitenin indüksiyonu ile ilgili ilişki. Kanser Araştırmaları, 1994, 54 (22), 5779-5782.
3. Park SJ, Wu CH, Gordon JD, Zhong X, Emami A ve Safa AR. Taxol, kaspaz-10'a bağlı apoptozu indükler, J. Biol. Chem., 2004, 279, 51057-51067.
4. Paklitaksel. Amerikan Sağlık Sistemi Eczacıları Derneği. [2 Ocak 2015]
5. Bruce Ganem ve Roland R. Franke. Birincil taksonlardan paklitaksel: Organozironyum Kimyasında Yaratıcı Buluş Üzerine Bir Perspektif. J. Org. Chem., 2007, 72 (11), 3981-3987.
Santai teknolojisinden farklı özelliklere sahip bir dizi Sepaflash C18 RP flaş kartuşları vardır (Tablo 2'de gösterildiği gibi).
| Öğe numarası | Sütun boyutu | Akış hızı (ml/dk) | Maks. Baskı (psi/çubuk) |
| SW-5222-004-SP | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tablo 2. Sepaflash C18 RP Flash Kartuşlar.
Paketleme Malzemeleri: Yüksek Verimli Küresel C18-Bağlı Silika, 20-45 μm, 100 Å
Sepabean ™ makinesinin ayrıntılı özellikleri veya Sepaflash serisi flaş kartuşları hakkındaki sipariş bilgileri hakkında daha fazla bilgi için lütfen web sitemizi ziyaret edin
Gönderme Zamanı: Eylül-20-2018