Asidik Bileşiklerin Saflaştırılmasında SepaFlash Güçlü Anyon Değişim Kromatografi Kolonlarının Uygulanması

Sonuçlar ve tartışma

İlk olarak numune karışımı, normal silika ile önceden paketlenmiş normal fazlı bir flaş kartuşu ile ayrıldı.Şekil 3'te gösterildiği gibi, numunedeki iki bileşen kartuştan birbiri ardına elüt edilmiştir.Daha sonra numunenin saflaştırılması için bir SAX flaş kartuşu kullanıldı.Şekil 4'te gösterildiği gibi asidik Bileşen B, SAX kartuşunda tamamen tutuldu.Nötr Bileşen A, mobil fazın elüsyonu ile kademeli olarak kartuştan elüe edildi.

Şekil 3. Normal fazlı bir kartuş üzerindeki numunenin flaş kromatogramı.

Şekil 4. Bir SAX kartuşundaki numunenin flaş kromatogramı.
Şekil 3 ve Şekil 4 karşılaştırıldığında, Bileşen A'nın iki farklı flaş kartuşunda tutarsız tepe şekli vardır.Elüsyon zirvesinin bileşene karşılık gelip gelmediğini doğrulamak için SepaBean™ makinesinin kontrol yazılımında yerleşik olan tam dalga boyu tarama özelliğini kullanabiliriz.İki ayırmanın deneysel verilerini açın, kromatogramdaki zaman ekseni (CV) üzerindeki gösterge çizgisine, Bileşen A'ya karşılık gelen elüsyon zirvesinin en yüksek noktasına ve ikinci en yüksek noktasına ve bu ikisinin tam dalga boyu spektrumuna sürükleyin. noktalar otomatik olarak kromatogramın altında gösterilecektir (Şekil 5 ve Şekil 6'da gösterildiği gibi).Bu iki ayırmanın tam dalga boyu spektrum verileri karşılaştırıldığında, Bileşen A, iki deneyde tutarlı absorpsiyon spektrumuna sahiptir.A Bileşeninin iki farklı flaş kartuşunda tutarsız tepe şekline sahip olması nedeniyle, normal faz kartuşu ve SAX kartuşunda farklı tutuşa sahip olan A Bileşeninde belirli bir yabancı maddenin bulunduğu tahmin edilmektedir.Bu nedenle, Bileşen A ve bu iki flaş kartuşundaki safsızlık için elüsyon sırası farklıdır, bu da kromatogramlarda tutarsız tepe şekline neden olur.

Şekil 5. Bileşen A'nın tam dalga boyu spektrumu ve normal faz kartuşuyla ayrılan safsızlık.

Şekil 6. Bileşen A'nın tam dalga boyu spektrumu ve SAX kartuşu ile ayrılan safsızlık.

Toplanacak hedef ürün nötr Bileşen A ise saflaştırma görevi, örnek yükleme sonrasında elüsyon için doğrudan SAX kartuşu kullanılarak kolayca tamamlanabilir.Öte yandan, toplanacak hedef ürün asidik Bileşen B ise, yakalama-bırakma yöntemi deney adımlarında yalnızca hafif bir ayarlamayla benimsenebilir: numune SAX kartuşuna ve nötr Bileşen A'ya yüklendiğinde. normal fazlı organik çözücülerle tamamen elüt edildi, mobil fazı %5 asetik asit içeren metanol çözeltisine değiştirin.Mobil fazdaki asetat iyonları, SAX kartuşunun sabit fazındaki dördüncül amin iyon gruplarına bağlanmak için Bileşen B ile rekabet edecek ve böylece hedef ürünü elde etmek için Bileşen B'yi kartuştan ayıracaktır.İyon değiştirme modunda ayrılan numunenin kromatogramı Şekil 7'de gösterilmiştir.

Şekil 7. Bir SAX kartuşunda iyon değişim modunda elüe edilen Bileşen B'nin flaş kromatogramı.

Sonuç olarak, asidik veya nötr numune, farklı saflaştırma stratejileri kullanılarak normal fazlı kartuşla birleştirilmiş SAX kartuşu ile hızlı bir şekilde saflaştırılabilir.Ayrıca, SepaBean™ makinesinin kontrol yazılımında yerleşik olarak bulunan tam dalga boyu tarama özelliğinin yardımıyla, elüt edilen fraksiyonların karakteristik absorpsiyon spektrumu kolayca karşılaştırılıp doğrulanabiliyor, bu da araştırmacıların elüt edilen fraksiyonların bileşimini ve saflığını hızlı bir şekilde belirlemesine ve dolayısıyla iyileştirmelere yardımcı oluyor. iş verimliliği.