Rui Huang, Bo Xu
Uygulama Ar -Ge Merkezi
giriiş
Bir peptit, her biri sekansını oluşturan farklı tipler ve amino asit kalıntılarının sırası nedeniyle benzersiz fiziksel ve kimyasal özelliklere sahip amino asitlerden oluşan bir bileşiktir. Katı faz kimyasal sentezinin geliştirilmesiyle, çeşitli aktif peptitlerin kimyasal sentezi büyük ilerleme kaydetmiştir. Bununla birlikte, katı faz sentezi ile elde edilen peptidin karmaşık bileşimi nedeniyle, nihai ürün güvenilir ayırma yöntemleri ile saflaştırılmalıdır. Peptitler için yaygın olarak kullanılan saflaştırma yöntemleri, düşük numune yükleme kapasitesi, yüksek maliyet maliyeti, karmaşık ve maliyetli ayırma ekipmanı, vb. timopentinin (TP-5) hızlı bir şekilde saflaştırılması için bir sepaflash RP C18 kartuşu kullanıldı ve gereksinimleri karşılayan hedef ürün elde edildi.
Şekil 1. 20 Yaygın amino asitler (www.bachem.com'dan çoğaltılmıştır).
Peptitlerin bileşiminde yaygın olan 20 çeşit amino asit vardır. Bu amino asitler, polarite ve asit-baz özelliklerine göre aşağıdaki gruplara ayrılabilir: polar olmayan (hidrofobik), polar (yüksüz), asidik veya bazik (Şekil 1'de gösterildiği gibi). Bir peptit sekansında, sekansı oluşturan amino asitler çoğunlukla polar (Şekil 1'de pembe renkte işaretlendiği gibi), sistein, glutamin, asparagin, serin, treonin, tirozin, vb. Bu güçlü polar peptit numuneleri için saflaştırılmış faz kromatografisi ile saflaştırma prosedürü sırasında, hidrofobik faz çökmesi olarak adlandırılan bir fenomen oluşacaktır (Santai Technologies tarafından daha önce yayınlanmış bir uygulama notuna bakınız: hidrofobik faz çökmesi, AQ tersine çevrilmiş faz kromatografisi kolonları ve uygulamaları). Normal C18 sütunları ile karşılaştırıldığında, geliştirilmiş C18AQ sütunları, güçlü kutup veya hidrofilik numunelerin saflaştırılması için en uygun olanıdır. Bu yazıda, numune olarak güçlü bir polar peptit kullanıldı ve bir C18AQ sütunu ile saflaştırıldı. Sonuç olarak, gereksinimleri karşılayan hedef ürün elde edildi ve aşağıdaki araştırma ve geliştirmede kullanılabilir.
| Enstrüman | Sepabean™Makine 2 | |||
| Kartuşlar | 12 G Sepaflash C18 RP Flaş Kartuşu (Küresel Silika, 20-45 μm, 100 Å, Sipariş Nunber ： SW-522-012-SP) | 12 G Sepaflash C18AQ RP Flaş Kartuşu (Küresel Silika, 20-45 μm, 100 Å, Sipariş Numarası ： SW-522-012-SP (AQ)) | ||
| Dalga boyu | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobil aşama | Solvent A: Su Solvent B: Asetonitril | |||
| Akış hızı | 15 ml/dakika | 20 ml/dakika | ||
| Örnek Yükleme | 30 mg | |||
| Eğim | Zaman (CV) | Çözücü B (%) | Zaman (Min) | Çözücü B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Sonuçlar ve tartışma
Polar peptit örneği için saflaştırma performansını normal C18 kolonu ve C18AQ sütunu arasındaki karşılaştırmak için, bir başlangıç olarak numunenin flaş saflaştırılması için normal bir C18 kolonu kullandık. Şekil 2'de gösterildiği gibi, yüksek sulu oranın neden olduğu C18 zincirlerinin hidrofobik faz çökmesi nedeniyle, numune normal C18 kartuşunda zar zor tutuldu ve doğrudan mobil faz tarafından elüde edildi. Sonuç olarak, numune etkili bir şekilde ayrılmadı ve saflaştırılmadı.
Şekil 2. Numunenin normal bir C18 kartuşu üzerinde flaş kromatogramı.
Daha sonra, numunenin flaş saflaştırması için bir C18AQ sütunu kullandık. Şekil 3'te gösterildiği gibi, peptit kolonda etkili bir şekilde tutuldu ve daha sonra elühtildi. Hedef ürün, ham numunedeki safsızlıklardan ayrıldı ve toplandı. Liyofilizasyondan sonra ve daha sonra HPLC ile analiz edildikten sonra, saflaştırılmış ürün% 98.2'lik bir saflığa sahiptir ve bir sonraki adım araştırma ve geliştirme için daha fazla kullanılabilir.
Şekil 3. Bir C18AQ kartuşu üzerindeki numunenin flaş kromatogramı.
Sonuç olarak, Flaş Kromatografi Sistemi Sepabean ile birleştirilen Sepaflash C18AQ RP Flash kartuşu™Makine, güçlü polar veya hidrofilik numunelerin saflaştırılması için hızlı ve etkili bir çözüm sunabilir.
Santai teknolojisinden farklı özelliklere sahip bir dizi Sepaflash C18AQ RP flaş kartuşları vardır (Tablo 2'de gösterildiği gibi).
| Öğe numarası | Sütun boyutu | Akış hızı (ml/dk) | Maks. Baskı (psi/çubuk) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tablo 2. Sepaflash C18AQ RP Flash Kartuşlar. Paketleme Malzemeleri: Yüksek Verimli Küresel C18 (AQ)-Bidalı Silika, 20-45 μm, 100 Å.
Sepabean ™ makinesinin ayrıntılı özellikleri veya Sepaflash serisi flaş kartuşları hakkındaki sipariş bilgileri hakkında daha fazla bilgi için lütfen web sitemizi ziyaret edin.
Gönderme Zamanı: Ekim-12-2018