Rui Huang, Bo Xu
Application R&D Center
Panimula
Ang Ion Exchange Chromatography (IEC) ay isang pamamaraan ng chromatographic na karaniwang ginagamit upang paghiwalayin at linisin ang mga compound na ipinakita sa ionic form sa solusyon. Ayon sa iba't ibang mga estado ng singil ng mga nababago na mga ion, ang IEC ay maaaring nahahati sa dalawang uri, cation exchange chromatography at anion exchange chromatography. Sa cation exchange chromatography, ang mga acidic na grupo ay nakagapos sa ibabaw ng paghihiwalay ng media. Halimbawa, ang sulfonic acid (-SO3H) ay isang karaniwang ginagamit na grupo sa malakas na cation exchange (SCX), na naghihiwalay sa H+ at ang negatibong sisingilin na pangkat -SO3- ay maaaring mag-adsorb ng iba pang mga cation sa solusyon. Sa anion exchange chromatography, ang mga pangkat ng alkalina ay nakagapos sa ibabaw ng paghihiwalay ng media. Halimbawa, ang Quaternary amine (-nr3OH, kung saan ang R ay hydrocarbon group) ay karaniwang ginagamit sa malakas na palitan ng anion (SAX), na nag-iisa sa OH- at ang positibong sisingilin na grupo -N+R3 ay maaaring mag-adsorb ng iba pang mga anion sa solusyon, na nagreresulta sa epekto ng palitan ng anion.
Kabilang sa mga likas na produkto, ang mga flavonoid ay nakakaakit ng pansin ng mga mananaliksik dahil sa kanilang papel sa pag -iwas at paggamot ng mga sakit sa cardiovascular. Dahil ang mga molekula ng flavonoid ay acidic dahil sa pagkakaroon ng mga phenolic hydroxyl group, ang ion exchange chromatography ay isang alternatibong pagpipilian bilang karagdagan sa maginoo na normal na phase o baligtad na phase chromatography para sa paghihiwalay at paglilinis ng mga acidic compound na ito. Sa flash chromatography, ang karaniwang ginagamit na paghihiwalay ng media para sa pagpapalitan ng ion ay silica gel matrix kung saan ang mga grupo ng palitan ng ion ay nakagapos sa ibabaw nito. Ang pinaka -karaniwang ginagamit na mga mode ng palitan ng ion sa flash chromatography ay ang SCX (karaniwang sulfonic acid group) at SAX (karaniwang quaternary amine group). Sa naunang nai -publish na tala ng aplikasyon na may pamagat na "Ang Application ng Sepaflash Strong Cation Exchange Chromatography na mga haligi sa paglilinis ng mga alkalina na compound" ng mga teknolohiya ng Santai, ang mga haligi ng SCX ay ginamit para sa paglilinis ng mga alkalina na compound. Sa post na ito, ang isang pinaghalong neutral at acidic na pamantayan ay ginamit bilang sample upang galugarin ang aplikasyon ng mga haligi ng SAX sa paglilinis ng mga acidic compound.
Seksyon ng Eksperimentong
Larawan 1. Ang diagram ng eskematiko ng nakatigil na yugto na nakagapos sa ibabaw ng media ng paghihiwalay ng SAX.
Sa post na ito, ang isang haligi ng SAX na pre-pack na may quaternary amine bonded silica ay ginamit (tulad ng ipinapakita sa Figure 1). Ang isang halo ng chromone at 2,4-dihydroxybenzoic acid ay ginamit bilang sample na linisin (tulad ng ipinapakita sa Larawan 2). Ang pinaghalong ay natunaw sa methanol at na -load sa flash cartridge ng isang injector. Ang pang -eksperimentong pag -setup ng paglilinis ng flash ay nakalista sa Talahanayan 1.
Larawan 2. Ang istraktura ng kemikal ng dalawang sangkap sa halo ng sample.
| Instrumento | Sepabean ™ machine t | |||||
| Cartridges | 4 g Sepaflash Standard Series Flash Cartridge (Irregular Silica, 40-63 μm, 60 Å, Numero ng Order: S-5101-0004) | 4 g sepaflash bonded series sax flash cartridge (hindi regular na silica, 40-63 μm, 60 Å, numero ng order ： SW-5001-004-IR) | ||||
| Haba ng haba | 254 nm (pagtuklas), 280 nm (pagsubaybay) | |||||
| Mobile phase | Solvent A: N-Hexane | |||||
| Solvent B: Ethyl acetate | ||||||
| Rate ng daloy | 30 ml/min | 20 ml/min | ||||
| Halimbawang Paglo -load | 20 mg (isang halo ng sangkap A at sangkap b) | |||||
| Gradient | Oras (CV) | Solvent B (%) | Oras (CV) | Solvent B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Mga resulta at talakayan
Una, ang sample na pinaghalong ay pinaghiwalay ng isang normal na phase flash cartridge na pre-pack na may regular na silica. Tulad ng palabas sa Figure 3, ang dalawang sangkap sa sample ay pinahiran mula sa kartutso nang paisa -isa. Susunod, ang isang kartutso ng Sax Flash ay ginamit para sa paglilinis ng sample. Tulad ng palabas sa Figure 4, ang acidic na sangkap B ay ganap na napanatili sa kartutso ng SAX. Ang neutral na sangkap A ay unti -unting pinalabas mula sa kartutso na may pag -alis ng mobile phase.
Larawan 3. Ang flash chromatogram ng sample sa isang regular na normal na kartutso ng phase.
Larawan 4. Ang flash chromatogram ng sample sa isang kartutso ng sax.
Ang paghahambing ng Figure 3 at Figure 4, ang sangkap A ay may hindi pantay na peak na hugis sa dalawang magkakaibang mga flash cartridges. Upang kumpirmahin kung ang rurok ng elution ay naaayon sa sangkap, maaari naming magamit ang buong tampok na haba ng pag -scan ng haba na itinayo sa control software ng Sepabean ™ machine. Buksan ang pang -eksperimentong data ng dalawang paghihiwalay, i -drag ang linya ng tagapagpahiwatig sa axis ng oras (CV) sa chromatogram hanggang sa pinakamataas na punto at ang pangalawang pinakamataas na punto ng rurok ng elution na naaayon sa sangkap A, at ang buong haba ng haba ng haba ng haba ng dalawang puntos na ito ay awtomatikong ipinapakita sa ibaba ng chromatogram (tulad ng ipinapakita sa Larawan 5 at Larawan 6). Ang paghahambing ng buong data ng haba ng haba ng haba ng haba ng dalawang paghihiwalay na ito, ang sangkap A ay may pare -pareho na pagsipsip ng spectrum sa dalawang mga eksperimento. Para sa kadahilanan ng sangkap A ay may hindi pantay na hugis ng rurok sa dalawang magkakaibang mga flash cartridges, naisip na mayroong tiyak na karumihan sa sangkap na may iba't ibang pagpapanatili sa normal na cartridge ng phase at ang kartutso ng SAX. Samakatuwid, ang pagkakasunud -sunod ng eluting ay naiiba para sa sangkap A at ang karumihan sa dalawang mga flash cartridges na ito, na nagreresulta sa hindi pantay na peak na hugis sa chromatograms.
Larawan 5. Ang buong haba ng haba ng haba ng haba ng bahagi ng A at ang karumihan na pinaghiwalay ng normal na kartutso ng phase.
Larawan 6. Ang buong haba ng haba ng haba ng haba ng sangkap A at ang karumihan na pinaghiwalay ng kartutso ng SAX.
Kung ang target na produkto na makokolekta ay ang neutral na sangkap A, ang gawain ng paglilinis ay madaling makumpleto sa pamamagitan ng direktang paggamit ng kartutso ng SAX para sa elution pagkatapos ng pag -load ng sample. Sa kabilang banda, kung ang target na produkto na makolekta ay ang acidic na sangkap B, ang paraan ng pagkuha-release ay maaaring ma-ampon na may isang bahagyang pagsasaayos lamang sa mga eksperimentong hakbang: kapag ang sample ay na-load sa sax cartridge at ang neutral na sangkap A ay ganap na pinahiran ng normal na phase organikong solvent, lumipat ang mobile phase sa methanol solution na naglalaman ng 5% acetic acid. Ang mga ion ng acetate sa mobile phase ay makikipagkumpitensya sa sangkap B para sa pagbubuklod sa mga pangkat ng quaternary amine ion sa nakatigil na yugto ng kartutso ng SAX, sa gayon ay tinanggal ang sangkap B mula sa kartutso upang makuha ang target na produkto. Ang chromatogram ng sample na pinaghiwalay sa mode ng palitan ng ion ay ipinakita sa Figure 7.
Larawan 7. Ang flash chromatogram ng sangkap B na pinahiran sa mode ng palitan ng ion sa isang kartutso ng SAX.
Sa konklusyon, ang acidic o neutral na sample ay maaaring mabilis na malinis ng sax cartridge na sinamahan ng normal na cartridge ng phase na gumagamit ng iba't ibang mga diskarte sa paglilinis. Bukod dito, sa tulong ng buong tampok na pag -scan ng haba ng haba na binuo sa control software ng Sepabean ™ machine, ang katangian ng pagsipsip ng spectrum ng mga masasamang praksyon ay madaling ihambing at makumpirma, na tinutulungan ang mga mananaliksik na mabilis na matukoy ang komposisyon at kadalisayan ng mga pinahiran na mga praksyon at sa gayon pagpapabuti ng kahusayan sa trabaho.
| Numero ng item | Laki ng haligi | Rate ng daloy (ml/min) | Max.pressure (psi/bar) |
| SW-5001-004-IR | 5.9 g | 10-20 | 400/27.5 |
| SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27.5 |
| SW-5001-080-IR | 122 g | 30-60 | 350/24.0 |
| SW-5001-120-IR | 180 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/20.7 |
| SW-5001-330-IR | 475 g | 50-100 | 250/17.2
|
Talahanayan 2. Sepaflash bonded series sax flash cartridges. Mga materyales sa pag-pack: Ultra-pure irregular sax-bonded silica, 40-63 μm, 60 Å.
Para sa karagdagang impormasyon sa detalyadong mga pagtutukoy ng Sepabean ™Machine, o ang pag -order ng impormasyon sa Sepaflash Series Flash Cartridges, mangyaring bisitahin ang aming website.
Oras ng Mag-post: Nov-09-2018