Rui Huang, Bo Xu
Application R&D Center
Panimula
Ang isang peptide ay isang tambalan na binubuo ng mga amino acid, na ang bawat isa ay may natatanging mga katangian ng pisikal at kemikal dahil sa iba't ibang uri at pagkakasunud -sunod ng mga residue ng amino acid na bumubuo ng pagkakasunud -sunod nito. Sa pag -unlad ng solid phase synthesis ng kemikal, ang synthesis ng kemikal ng iba't ibang mga aktibong peptides ay gumawa ng mahusay na pag -unlad. Gayunpaman, dahil sa kumplikadong komposisyon ng peptide na nakuha ng solid phase synthesis, ang pangwakas na produkto ay dapat na linisin ng maaasahang mga pamamaraan ng paghihiwalay. Ang mga karaniwang ginagamit na pamamaraan ng paglilinis para sa mga peptides ay kinabibilangan ng ion exchange chromatography (IEC) at reversed-phase mataas na pagganap ng likido na chromatograph Ang isang kartutso ng Sepaflash RP C18 ay ginamit para sa mabilis na paglilinis ng thymopentin (TP-5) at ang target na pulong ng produkto ay nakuha ang mga kinakailangan.
Larawan 1. 20 Karaniwang amino acid (muling ginawa mula sa www.bachem.com).
Mayroong 20 uri ng mga amino acid na karaniwan sa komposisyon ng mga peptides. Ang mga amino acid na ito ay maaaring nahahati sa mga sumusunod na grupo ayon sa kanilang polarity at acid-base na pag-aari: hindi polar (hydrophobic), polar (uncharge), acidic o basic (tulad ng ipinapakita sa Larawan 1). Sa isang pagkakasunud -sunod ng peptide, kung ang mga amino acid na bumubuo ng pagkakasunud -sunod ay karamihan sa mga polar (tulad ng minarkahan sa kulay rosas na kulay sa Figure 1), tulad ng cysteine, glutamine, asparagine, serine, threonine, tyrosine, atbp kung gayon ang peptide na ito ay maaaring magkaroon ng isang malakas na polaridad at lubos na natutunaw sa tubig. Sa panahon ng pamamaraan ng paglilinis para sa mga malakas na sample ng polar peptide sa pamamagitan ng reversed-phase chromatography, isang kababalaghan na tinatawag na hydrophobic phase pagbagsak ay magaganap (sumangguni sa isang naunang nai-publish na tala ng aplikasyon ng mga teknolohiya ng Santai: Ang pagbagsak ng phase ng Hydrophobic, AQ Reversed Phase Chromatography na mga haligi at kanilang mga aplikasyon). Kung ikukumpara sa mga regular na haligi ng C18, ang pinabuting mga haligi ng C18AQ ay pinaka -angkop para sa paglilinis ng malakas na mga sample ng polar o hydrophilic. Sa post na ito, ang isang malakas na polar peptide ay ginamit bilang sample at nalinis ng isang haligi ng C18AQ. Bilang isang resulta, ang target na produkto ng pulong ng mga kinakailangan ay nakuha at maaaring magamit sa sumusunod na pananaliksik at pag -unlad.
| Instrumento | Sepabean™Makina 2 | |||
| Cartridges | 12 g sepaflash c18 rp flash cartridge (spherical silica, 20-45 μm, 100 Å, order nunber ： sw-5222-012-sp) | 12 g sepaflash c18aq rp flash cartridge (spherical silica, 20-45 μm, 100 Å, numero ng order ： SW-5222-012-sp (aq)) | ||
| Haba ng haba | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobile phase | Solvent A: Tubig Solvent B: Acetonitrile | |||
| Rate ng daloy | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Halimbawang Paglo -load | 30 mg | |||
| Gradient | Oras (CV) | Solvent B (%) | Oras (min) | Solvent B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Mga resulta at talakayan
Upang ihambing ang pagganap ng paglilinis para sa sample ng polar peptide sa pagitan ng regular na haligi ng C18 at haligi ng C18AQ, ginamit namin ang isang regular na haligi ng C18 para sa flash na paglilinis ng sample bilang isang pagsisimula. Tulad ng ipinapakita sa Figure 2, dahil sa pagbagsak ng hydrophobic phase ng C18 chain na sanhi ng mataas na may tubig na ratio, ang sample ay bahagyang napanatili sa regular na C18 kartutso at direktang pinalabas ng mobile phase. Bilang isang resulta, ang sample ay hindi epektibong pinaghiwalay at nalinis.
Larawan 2. Ang flash chromatogram ng sample sa isang regular na kartutso ng C18.
Susunod, ginamit namin ang isang haligi ng C18AQ para sa flash paglilinis ng sample. Tulad ng ipinapakita sa Figure 3, ang peptide ay epektibong napanatili sa haligi at pagkatapos ay pinahiran. Ang target na produkto ay nahiwalay mula sa mga impurities sa hilaw na sample at nakolekta. Matapos ang lyophilization at pagkatapos ay nasuri ng HPLC, ang purified na produkto ay may kadalisayan na 98.2% at maaaring magamit pa para sa susunod na hakbang na pananaliksik at pag -unlad.
Larawan 3. Ang flash chromatogram ng sample sa isang kartutso ng C18AQ.
Sa konklusyon, ang Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridge na sinamahan ng Flash Chromatography System Sepabean™Ang makina ay maaaring mag -alok ng isang mabilis at epektibong solusyon para sa paglilinis ng malakas na mga sample ng polar o hydrophilic.
Mayroong isang serye ng sepaflash C18AQ RP flash cartridges na may iba't ibang mga pagtutukoy mula sa teknolohiya ng Santai (tulad ng ipinapakita sa Talahanayan 2).
| Numero ng item | Laki ng haligi | Rate ng daloy (ml/min) | Max.pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Talahanayan 2. Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridges. Mga materyales sa pag-iimpake: Mataas na kahusayan spherical C18 (aq) -bonded silica, 20-45 μm, 100 Å.
Para sa karagdagang impormasyon tungkol sa detalyadong mga pagtutukoy ng Sepabean ™ machine, o ang pag -order ng impormasyon sa Sepaflash Series Flash Cartridges, mangyaring bisitahin ang aming website.
Oras ng Mag-post: Oktubre-12-2018