Rui Huang, Bo Xu
Application R&D Center
Panimula
Ang peptide ay isang tambalang binubuo ng mga amino acid, na ang bawat isa ay may natatanging katangiang pisikal at kemikal dahil sa iba't ibang uri at pagkakasunud-sunod ng mga residue ng amino acid na bumubuo sa pagkakasunud-sunod nito.Sa pagbuo ng solid phase chemical synthesis, ang chemical synthesis ng iba't ibang aktibong peptides ay gumawa ng malaking pag-unlad.Gayunpaman, dahil sa kumplikadong komposisyon ng peptide na nakuha ng solid phase synthesis, ang pangwakas na produkto ay dapat na dalisayin ng maaasahang mga paraan ng paghihiwalay.Ang karaniwang ginagamit na mga paraan ng paglilinis para sa mga peptide ay kinabibilangan ng ion exchange chromatography (IEC) at reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC), na may mga disadvantages ng mababang sample loading capacity, mataas na halaga ng separation media, kumplikado at magastos na separation equipment, atbp. Para sa mabilis na pagdalisay ng maliliit na molekula na peptides (MW <1 kDa), isang matagumpay na kaso ng aplikasyon ang naunang inilathala ng Santai Technologies, kung saan ginamit ang isang SepaFlash RP C18 cartridge para sa mabilis na paglilinis ng thymopentin (TP-5) at ang target na produkto na nakakatugon sa mga kinakailangan ay nakuha.
Figure 1. 20 karaniwang amino acids (ginawa mula sa www.bachem.com).
Mayroong 20 uri ng mga amino acid na karaniwan sa komposisyon ng mga peptide.Ang mga amino acid na ito ay maaaring hatiin sa mga sumusunod na grupo ayon sa kanilang polarity at acid-base property: non-polar (hydrophobic), polar (uncharged), acidic o basic (tulad ng ipinapakita sa Figure 1).Sa isang peptide sequence, kung ang mga amino acid na bumubuo sa sequence ay halos mga polar (tulad ng minarkahan ng pink na kulay sa Figure 1), tulad ng Cysteine, Glutamine, Asparagine, Serine, Threonine, Tyrosine, atbp. kung gayon ang peptide na ito ay maaaring magkaroon ng malakas na polarity at lubos na natutunaw sa tubig.Sa panahon ng purification procedure para sa malalakas na sample ng polar peptide na ito sa pamamagitan ng reversed-phase chromatography, magaganap ang isang phenomenon na tinatawag na hydrophobic phase collapse (sumangguni sa isang naunang na-publish na application note ng Santai Technologies: Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Columns at Kanilang Mga Aplikasyon).Kung ikukumpara sa mga regular na column ng C18, ang mga pinahusay na column ng C18AQ ay pinakaangkop para sa paglilinis ng malakas na mga sample ng polar o hydrophilic.Sa post na ito, isang malakas na polar peptide ang ginamit bilang sample at nalinis ng isang haligi ng C18AQ.Bilang resulta, ang target na produkto na nakakatugon sa mga kinakailangan ay nakuha at maaaring magamit sa sumusunod na pananaliksik at pag-unlad.
| Instrumento | SepaBean™makina 2 | |||
| Mga Cartridge | 12 g SepaFlash C18 RP flash cartridge (spherical silica, 20 - 45 μm, 100 Å, Order nunber：SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP flash cartridge (spherical silica, 20 - 45 μm, 100 Å, Numero ng order：SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Haba ng daluyong | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobile phase | Solvent A: Tubig Solvent B: Acetonitrile | |||
| Daloy ng rate | 15 mL/min | 20 mL/min | ||
| Sample loading | 30 mg | |||
| Gradient | Oras (CV) | Solvent B (%) | Oras (min) | Solvent B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Resulta at diskusyon
Upang ihambing ang pagganap ng purification para sa polar peptide sample sa pagitan ng regular na C18 column at C18AQ column, gumamit kami ng regular na C18 column para sa flash purification ng sample bilang panimula.Tulad ng ipinapakita sa Figure 2, dahil sa pagbagsak ng hydrophobic phase ng mga chain ng C18 na sanhi ng mataas na aqueous ratio, ang sample ay halos hindi nananatili sa regular na C18 cartridge at direktang na-eluted ng mobile phase.Bilang resulta, ang sample ay hindi epektibong nahiwalay at nalinis.
Figure 2. Ang flash chromatogram ng sample sa isang regular na C18 cartridge.
Susunod, gumamit kami ng column na C18AQ para sa flash purification ng sample.Tulad ng ipinapakita sa Figure 3, ang peptide ay epektibong napanatili sa column at pagkatapos ay natanggal.Ang target na produkto ay pinaghiwalay mula sa mga impurities sa hilaw na sample at nakolekta.Pagkatapos ng lyophilization at pagkatapos ay nasuri ng HPLC, ang purified na produkto ay may kadalisayan na 98.2% at maaaring magamit pa para sa susunod na hakbang na pananaliksik at pag-unlad.
Figure 3. Ang flash chromatogram ng sample sa isang C18AQ cartridge.
Sa konklusyon, ang SepaFlash C18AQ RP flash cartridge ay pinagsama sa flash chromatography system na SepaBean™machine ay maaaring mag-alok ng isang mabilis at epektibong solusyon para sa paglilinis ng malakas na polar o hydrophilic sample.
Mayroong isang serye ng mga SepaFlash C18AQ RP flash cartridge na may iba't ibang mga detalye mula sa Santai Technology (tulad ng ipinapakita sa Talahanayan 2).
| Bilang | Laki ng Column | Daloy ng rate (mL/min) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Talahanayan 2. SepaFlash C18AQ RP flash cartridges.Mga materyales sa pag-iimpake: High-efficiency spherical C18(AQ)-bonded silica, 20 - 45 μm, 100 Å.
Para sa karagdagang impormasyon sa mga detalyadong detalye ng SepaBean™ machine, o ang impormasyon sa pag-order sa mga flash cartridge ng serye ng SepaFlash, mangyaring bisitahin ang aming website.
Oras ng post: Okt-12-2018