Hongçeng Wan, Bo Şu
Gözleg we gözleg merkezi
Giriş
Stasionar fazanyň we ykjam fazanyň otnositel polýarlyklaryna görä, suwuk hromatografiýany adaty faza hromatografiýasyna (NPC) we tersine faza hromatografiýasyna (RPC) bölmek mümkin.RPC üçin ykjam fazanyň polýarlygy stasionar fazadan has güýçlidir.RPC, ýokary netijeliligi, oňat çözgüdi we aýdyň saklaýyş mehanizmi sebäpli suwuk hromatografiýa bölüniş reesimlerinde iň köp ulanylýan birine öwrüldi.Şonuň üçin RPC dürli polýar ýa-da polýar däl birleşmeleri bölmek we arassalamak üçin amatly, alkaloidler, uglewodlar, ýag kislotalary, steroidler, nuklein kislotalar, aminokislotalar, peptidler, beloklar we ş.m. RPC-de iň köp ulanylýan stasionar faza. C18, C8, C4, fenil, siano, amin we ş.m. ýaly dürli funksional toparlar bilen baglanyşdyrylan kremniy gel matrisasy. Bu baglanyşyk funksiýa toparlarynyň arasynda iň köp ulanylýan C18.Hasaplamalara görä, RPC-iň 80% -den gowragy C18 baglanyşyk fazasyny ulanýar.Şonuň üçin C18 hromatografiýa sütüni her bir laboratoriýa üçin hökmany uniwersal sütüne öwrüldi.
C18 sütüni köp sanly programmada ulanylyp bilinýän bolsa-da, gaty polýar ýa-da ýokary gidrofil bolan käbir nusgalar üçin, adaty C18 sütünleri şeýle nusgalary arassalamak üçin ulanylanda kynçylyk çekip biler.RPC-de, köplenç ulanylýan elýus erginlerini polýarlygyna görä sargyt edip bolýar: suw
Surat 1. Adaty C18 sütüninde (çepde) we C18AQ sütüninde (sagda) silisiýa jeliniň üstündäki baglanyşyk fazalarynyň shemasy.
Aboveokarda agzalan meseleleri çözmek üçin hromatografiki gaplaýyş materiallaryny öndürijiler tehniki taýdan gowulaşdylar.Bu gowulaşmalardan biri, kremniniň geliniň üstüni has gidrofil etmek üçin, gidrofil siano toparlaryny girizmek (1-nji suratyň sag böleginde görkezilişi ýaly) kremniniň matrisasynyň üstünde käbir üýtgeşmeler girizmekdir.Şeýlelik bilen, kremniniň üstündäki C18 zynjyrlary ýokary suwly şertlerde doly uzaldylyp bilner we gidrofobiki fazanyň çökmeginiň öňüni alyp bolar.Bu üýtgedilen C18 sütünlerine suwly C18 sütünleri diýilýär, ýagny C18AQ sütünleri, ýokary suwly elitasiýa şertleri üçin döredilen we 100% suw ulgamyna çydap bilýär.Organiki kislotalar, peptidler, nukleozidler we suwda erän witaminler ýaly güýçli polýar birleşmeleri bölmekde we arassalamakda C18AQ sütünleri giňden ulanyldy.
Suwy süýjediji, nusgalar üçin fleş arassalamakda C18AQ sütünleriniň adaty goşundylaryndan biridir, bu indiki gözleglerde nusganyň ulanylmagyny ýeňilleşdirmek üçin nusga erginindäki duz ýa-da bufer böleklerini aýyrýar.Bu ýazgyda güýçli polýarlygy bolan Brilliant Blue FCF nusga hökmünde ulanyldy we C18AQ sütüninde arassalandy.Nusga çözüji bufer ergininden organiki erginç bilen çalşyryldy, şeýlelik bilen aşakdaky aýlaw bugarmagyny ýeňilleşdirdi, şeýle hem erginleri we iş wagtyny tygşytlady.Mundan başga-da, nusgadaky arassalygy, nusgadaky käbir hapalary aýyrmak arkaly ýokarlandy.
Synag bölümi
Surat 2. Nusganyň himiki gurluşy.
Bu ýazgyda nusga hökmünde “Brilliant Blue FCF” ulanyldy.Çig nusganyň arassalygy 86% bolup, nusganyň himiki gurluşy 2-nji suratda görkezildi. Nusga erginini taýýarlamak üçin, Brilliant Blue FCF-iň 300 mg tozan çig maly 1 M NaH2PO4 bufer ergininde eritildi we gowy boldy düýbünden aýdyň çözgüt.Soňra nusga çözgüdi injektor tarapyndan fleş sütünine sanjym edildi.Fleş arassalamasynyň synag synaglary 1-nji tablisada görkezilýär.
| Gural | SepaBean ™ enjamy2 | |||
| Kartrijler | 12 g SepaFlash C18 RP fleş kartrij (sferik kremnisi, 20 - 45 μm, 100 Å, Sargyt belgisi: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP fleş kartrij (sferik kremnisi, 20 - 45 μm, 100 Å, Sargyt belgisi ： SW-5222-012-SP (AQ))） | ||
| Tolkun uzynlygy | 254 nm | |||
| Jübi tapgyry | Solvent A ： Suw Solvent B ： Metanol | |||
| Akyş tizligi | 30 ml / min | |||
| Adingükleme nusgasy | 300 mg (Arassalygy 86% bolan Brilliant Blue FCF) | |||
| Gradient | Wagt (CV) | Solvent B (%) | Wagt (CV) | Solvent B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Netijeler we çekişme
Suwy süýjediji we arassalamak üçin SepaFlash C18AQ RP fleş kartrij ulanyldy.Basgançak gradienti ulanyldy, onda arassa suw elitasiýa başynda ykjam faza hökmünde ulanyldy we 10 sütün göwrümi (CV) üçin işledi.3-nji suratda görkezilişi ýaly, arassa suwy ykjam faza hökmünde ulananyňyzda, nusga fleş kartrijde doly saklandy.Ondan soň ykjam fazadaky metanol gönüden-göni 100% ýokarlandy we gradient 7.5 CV üçin saklandy.Nusga 11.5-den 13.5 CV aralygynda çykaryldy.Collectedygnalan fraksiýalarda nusga ergini NaH2PO4 bufer ergininden metanola çalşyldy.Örän suwly ergin bilen deňeşdirilende, indiki gözlegde ýeňilleşýän indiki ädimde aýlaw bugarmagy bilen metanol aýyrmak has aňsatdy.
Surat 3. C18AQ kartrijdäki nusganyň fleş hromatogrammasy.
Güýçli polýarlygyň nusgalary üçin C18AQ kartrijiniň we yzygiderli C18 patronyň saklanyş häsiýetini deňeşdirmek üçin parallel deňeşdirme synagy geçirildi.“SepaFlash C18 RP” fleş kartrij ulanyldy we nusga üçin fleş hromatogramma 4-nji suratda görkezildi. Adaty C18 patronlary üçin iň ýokary çydamly suw fazasy 90% töweregi.Şonuň üçin başlangyç gradienti 90% suwda 10% metanol derejesinde kesgitlenildi.4-nji suratda görkezilişi ýaly, ýokary suw gatnaşygy sebäpli dörän C18 zynjyrlarynyň gidrofobiki fazasynyň çökmegi sebäpli, nusga adaty C18 kartrijinde zordan saklandy we göçme faza bilen gönüden-göni çykaryldy.Netijede, suwy süýjediji ýa-da arassalamak işi tamamlanyp bilinmez.
Surat 4. Adaty C18 kartrijdäki nusganyň fleş hromatogrammasy.
Çyzykly gradient bilen deňeşdirilende, basgançak gradiýentini ulanmak aşakdaky artykmaçlyklara eýedir:
1. Solventiň ulanylyşy we nusga arassalamak üçin iş wagty azalýar.
2. Maksatly önüm, ýygnanan fraksiýalaryň göwrümini azaldýan we şeýlelik bilen wagty aýlamak bilen bir hatarda aşakdaky aýlaw bugarmagyny ýeňilleşdirýän ýiti ýokary derejä çykýar.
3. collectedygnalan önüm bugarmak aňsat metanolda, şonuň üçin guratmagyň wagty azalýar.
Sözümiň ahyrynda, güýçli polýar ýa-da ýokary gidrofil bolan nusgany arassalamak üçin, SepaFlash C18AQ RP fleş kartrijleri, taýynlyk fleş hromatografiýa ulgamy SepaBean ™ Machine çalt we täsirli çözgüt hödürläp biler.
“SepaFlash Bonded Series C18 RP” fleş kartrijleri hakda
Santai Technology-den dürli aýratynlyklary bolan SepaFlash C18AQ RP fleş patronlarynyň bir hatary bar (2-nji tablisada görkezilişi ýaly).
| Haryt belgisi | Sütüniň ululygy | Akyş tizligi (mL / min) | Maks (psi / bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 gr | 5-15 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 gr | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 gr | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 gr | 15-30 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 gr | 25-50 | 350 / 24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 gr | 30-60 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 gr | 40-80 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 gr | 40-80 | 250 / 17.2 |
Tablisa 2. SepaFlash C18AQ RP fleş kartrijleri.
Gaplaýyş materiallary: efficiencyokary öndürijilikli sferik C18 (AQ) kondensat, 20 - 45 μm, 100 Å.
logy (2-nji tablisada görkezilişi ýaly).
Iş wagty: 27-nji awgust-27-nji awgust