Rui Huang, Bo Xu
แอปพลิเคชัน R&D Center
การแนะนำ
เปปไทด์เป็นสารประกอบที่ประกอบด้วยกรดอะมิโนแต่ละชนิดมีคุณสมบัติทางกายภาพและทางเคมีที่เป็นเอกลักษณ์เนื่องจากชนิดต่าง ๆ และลำดับของกรดอะมิโนตกค้างที่ประกอบขึ้นเป็นลำดับ ด้วยการพัฒนาของการสังเคราะห์ทางเคมีของโซลิดเฟสการสังเคราะห์ทางเคมีของเปปไทด์ที่ใช้งานต่าง ๆ ได้ดำเนินการอย่างมาก อย่างไรก็ตามเนื่องจากองค์ประกอบที่ซับซ้อนของเปปไทด์ที่ได้จากการสังเคราะห์เฟสของแข็งผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายควรได้รับการชำระให้บริสุทธิ์โดยวิธีการแยกที่เชื่อถือได้ วิธีการทำให้บริสุทธิ์ที่ใช้กันทั่วไปสำหรับเปปไทด์ ได้แก่ การแลกเปลี่ยนไอออนโครมาโตกราฟี (IEC) และโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง (RP-HPLC) ซึ่งมีข้อเสียของความสามารถในการโหลดตัวอย่างต่ำ ซึ่งใช้คาร์ทริดจ์ Sepaflash RP C18 สำหรับการทำให้บริสุทธิ์อย่างรวดเร็วของ thymopentin (TP-5) และผลิตภัณฑ์เป้าหมายได้รับการปฏิบัติตามข้อกำหนด
รูปที่ 1. 20 กรดอะมิโนทั่วไป (ทำซ้ำจาก www.bachem.com)
มีกรดอะมิโน 20 ชนิดที่พบได้ทั่วไปในองค์ประกอบของเปปไทด์ กรดอะมิโนเหล่านี้สามารถแบ่งออกเป็นกลุ่มต่อไปนี้ตามขั้วและคุณสมบัติของกรด: ไม่ใช่โพลาร์ (ไม่ชอบน้ำ), ขั้ว (ไม่มีประจุ), เป็นกรดหรือพื้นฐาน (ดังแสดงในรูปที่ 1) ในลำดับของเปปไทด์หากกรดอะมิโนประกอบลำดับส่วนใหญ่เป็นขั้วโลก (ตามที่ทำเครื่องหมายไว้ในสีชมพูในรูปที่ 1) เช่นซีสเตอีนกลูตามีนแอสปาราจินซีรีนไทโรนีนไทโรซีน ฯลฯ ในระหว่างขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์สำหรับตัวอย่างเปปไทด์ขั้วที่แข็งแกร่งเหล่านี้โดยโครมาโตกราฟีแบบย้อนกลับปรากฏการณ์ที่เรียกว่าการยุบเฟสไฮโดรโฟบิกจะเกิดขึ้น (หมายถึงโน้ตแอปพลิเคชันที่ตีพิมพ์ก่อนหน้านี้โดย Santai Technologies: การล่มสลายของเฟส Hydrophobic เมื่อเปรียบเทียบกับคอลัมน์ C18 ปกติคอลัมน์ C18AQ ที่ได้รับการปรับปรุงนั้นเหมาะสมที่สุดสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของตัวอย่างขั้วที่แข็งแกร่งหรือ hydrophilic ในโพสต์นี้มีการใช้เปปไทด์ขั้วที่แข็งแกร่งเป็นตัวอย่างและทำให้บริสุทธิ์โดยคอลัมน์ C18AQ เป็นผลให้การประชุมผลิตภัณฑ์เป้าหมายได้รับข้อกำหนดและสามารถใช้ในการวิจัยและพัฒนาดังต่อไปนี้
| อุปกรณ์ | กรีก™เครื่อง 2 | |||
| ตลับหมึก | 12 กรัม sepaflash C18 RP แฟลชคาร์ทริดจ์ (ซิลิกาทรงกลม, 20-45 μm, 100 Å, สั่งซื้อ nunber： SW-5222-012-SP) | 12 กรัม sepaflash C18AQ RP คาร์ทริดจ์ (ซิลิกาทรงกลม, 20-45 μm, 100 Å, หมายเลขคำสั่งซื้อ： SW-5222-012-SP (AQ))) | ||
| ความยาวคลื่น | 254 nm, 220 nm | 214 นาโนเมตร | ||
| ขั้นตอนมือถือ | ตัวทำละลาย A: น้ำ ตัวทำละลาย B: acetonitrile | |||
| อัตราการไหล | 15 มล./นาที | 20 มล./นาที | ||
| การโหลดตัวอย่าง | 30 มก. | |||
| การไล่ระดับสี | เวลา (CV) | ตัวทำละลาย B (%) | เวลา (นาที) | ตัวทำละลาย B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
ผลลัพธ์และการอภิปราย
ในการเปรียบเทียบประสิทธิภาพการทำให้บริสุทธิ์สำหรับตัวอย่างเปปไทด์ขั้วโลกระหว่างคอลัมน์ C18 ปกติและคอลัมน์ C18AQ เราใช้คอลัมน์ C18 ปกติสำหรับการทำให้บริสุทธิ์แฟลชของตัวอย่างเป็นจุดเริ่มต้น ดังที่แสดงในรูปที่ 2 เนื่องจากการล่มสลายของเฟสที่ไม่ชอบน้ำของโซ่ C18 ที่เกิดจากอัตราส่วนน้ำสูงตัวอย่างแทบจะไม่ถูกเก็บไว้ในตลับ C18 ปกติและถูกชะออกโดยตรงจากเฟสเคลื่อนที่ เป็นผลให้ตัวอย่างไม่ได้แยกและบริสุทธิ์อย่างมีประสิทธิภาพ
รูปที่ 2. แฟลชโครมาโตแกรมของตัวอย่างบนตลับ C18 ปกติ
ต่อไปเราใช้คอลัมน์ C18AQ สำหรับการทำให้บริสุทธิ์แฟลชของตัวอย่าง ดังที่แสดงในรูปที่ 3 เปปไทด์จะถูกเก็บรักษาไว้อย่างมีประสิทธิภาพในคอลัมน์แล้วชะงักงัน ผลิตภัณฑ์เป้าหมายถูกแยกออกจากสิ่งสกปรกในตัวอย่างดิบและรวบรวม หลังจาก Lyophilization และวิเคราะห์โดย HPLC ผลิตภัณฑ์ที่บริสุทธิ์มีความบริสุทธิ์ 98.2% และสามารถนำไปใช้เพิ่มเติมสำหรับการวิจัยและพัฒนาขั้นตอนต่อไป
รูปที่ 3. แฟลชโครมาโตแกรมของตัวอย่างบนตลับหมึก C18AQ
โดยสรุปคาร์ทริดจ์แฟลช Sepaflash C18AQ RP รวมกับระบบโครมาโตกราฟีแฟลชซีปาเบียน™เครื่องสามารถเสนอวิธีแก้ปัญหาที่รวดเร็วและมีประสิทธิภาพสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของตัวอย่างขั้วโลกที่แข็งแกร่งหรือ hydrophilic
มีชุดของคาร์ทริดจ์แฟลช Sepaflash C18AQ RP ที่มีข้อกำหนดที่แตกต่างจากเทคโนโลยี Santai (ดังแสดงในตารางที่ 2)
| หมายเลขรายการ | ขนาดคอลัมน์ | อัตราการไหล (ml/min) | สูงสุด (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 กรัม | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 กรัม | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 กรัม | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 กรัม | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 กรัม | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 กรัม | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 กรัม | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 กรัม | 40-80 | 250/17.2 |
ตารางที่ 2. Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridges วัสดุบรรจุภัณฑ์: ทรงกลมที่มีประสิทธิภาพสูง C18 (AQ)-ซิลิกาที่ถูกยึดไว้, 20-45 μm, 100 Å
สำหรับข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับข้อกำหนดรายละเอียดของเครื่อง Sepabean ™หรือข้อมูลการสั่งซื้อเกี่ยวกับ Sepaflash Series Flash Cartridges กรุณาเยี่ยมชมเว็บไซต์ของเรา
เวลาโพสต์: ต.ค. -12-2018