రుయి హువాంగ్, బో జు
అప్లికేషన్ R&D కేంద్రం
పరిచయం
పెప్టైడ్ అనేది అమైనో ఆమ్లాలతో కూడిన సమ్మేళనం, వీటిలో ప్రతి ఒక్కటి దాని క్రమాన్ని కలిగి ఉన్న అమైనో ఆమ్ల అవశేషాల యొక్క వివిధ రకాలు మరియు క్రమం కారణంగా ప్రత్యేకమైన భౌతిక మరియు రసాయన లక్షణాలను కలిగి ఉంటుంది.ఘన దశ రసాయన సంశ్లేషణ అభివృద్ధితో, వివిధ క్రియాశీల పెప్టైడ్‌ల రసాయన సంశ్లేషణ గొప్ప పురోగతిని సాధించింది.అయినప్పటికీ, ఘన దశ సంశ్లేషణ ద్వారా పొందిన పెప్టైడ్ యొక్క సంక్లిష్టమైన కూర్పు కారణంగా, తుది ఉత్పత్తిని విశ్వసనీయ విభజన పద్ధతుల ద్వారా శుద్ధి చేయాలి.పెప్టైడ్‌ల కోసం సాధారణంగా ఉపయోగించే ప్యూరిఫికేషన్ పద్ధతులలో అయాన్ ఎక్స్ఛేంజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (IEC) మరియు రివర్స్డ్-ఫేజ్ హై పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (RP-HPLC) ఉన్నాయి, ఇవి తక్కువ నమూనా లోడింగ్ కెపాసిటీ, సెపరేషన్ మీడియా యొక్క అధిక ధర, సంక్లిష్టమైన మరియు ఖరీదైన వేరుచేసే పరికరాలు వంటి ప్రతికూలతలను కలిగి ఉంటాయి. మొదలైనవి. చిన్న మాలిక్యూల్ పెప్టైడ్స్ (MW <1 kDa) యొక్క వేగవంతమైన శుద్దీకరణ కోసం, గతంలో Santai టెక్నాలజీస్ ద్వారా ఒక విజయవంతమైన అప్లికేషన్ కేస్ ప్రచురించబడింది, దీనిలో థైమోపెంటిన్ (TP-5) యొక్క వేగవంతమైన శుద్దీకరణ కోసం SepaFlash RP C18 కాట్రిడ్జ్ ఉపయోగించబడింది. అవసరాలకు అనుగుణంగా లక్ష్య ఉత్పత్తి పొందబడింది.
మూర్తి 1. 20 సాధారణ అమైనో ఆమ్లాలు (www.bachem.com నుండి పునరుత్పత్తి చేయబడింది).
పెప్టైడ్‌ల కూర్పులో సాధారణంగా ఉండే 20 రకాల అమైనో ఆమ్లాలు ఉన్నాయి.ఈ అమైనో ఆమ్లాలను వాటి ధ్రువణత మరియు యాసిడ్-బేస్ ప్రాపర్టీ ప్రకారం క్రింది సమూహాలుగా విభజించవచ్చు: నాన్-పోలార్ (హైడ్రోఫోబిక్), పోలార్ (ఛార్జ్ చేయని), ఆమ్ల లేదా ప్రాథమిక (మూర్తి 1లో చూపిన విధంగా).పెప్టైడ్ సీక్వెన్స్‌లో, సిస్టీన్, గ్లుటామైన్, ఆస్పరాజైన్, సెరైన్, థ్రెయోనిన్, టైరోసిన్ మొదలైన అమైనో ఆమ్లాలు ఎక్కువగా ధృవమైనవి (చిత్రం 1లో పింక్ కలర్‌లో గుర్తించబడినట్లుగా) ఉంటే, ఈ పెప్టైడ్ బలంగా ఉండవచ్చు. ధ్రువణత మరియు నీటిలో బాగా కరుగుతుంది.రివర్స్డ్-ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా ఈ బలమైన పోలార్ పెప్టైడ్ నమూనాలను శుద్ధి చేసే ప్రక్రియలో, హైడ్రోఫోబిక్ ఫేజ్ పతనం అని పిలువబడే ఒక దృగ్విషయం సంభవిస్తుంది (శాంటాయ్ టెక్నాలజీస్ ద్వారా గతంలో ప్రచురించబడిన అప్లికేషన్ నోట్‌ను చూడండి: హైడ్రోఫోబిక్ ఫేజ్ కొలాప్స్, AQ రివర్స్డ్ ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ కాలమ్‌లు మరియు వాటి అప్లికేషన్‌లు).సాధారణ C18 నిలువు వరుసలతో పోలిస్తే, మెరుగైన C18AQ నిలువు వరుసలు బలమైన ధ్రువ లేదా హైడ్రోఫిలిక్ నమూనాల శుద్ధీకరణకు చాలా అనుకూలంగా ఉంటాయి.ఈ పోస్ట్‌లో, బలమైన పోలార్ పెప్టైడ్ నమూనాగా ఉపయోగించబడింది మరియు C18AQ కాలమ్ ద్వారా శుద్ధి చేయబడింది.ఫలితంగా, అవసరాలకు అనుగుణంగా లక్ష్య ఉత్పత్తి పొందబడింది మరియు క్రింది పరిశోధన మరియు అభివృద్ధిలో ఉపయోగించవచ్చు.
| వాయిద్యం | సెపాబీన్™యంత్రం 2 | |||
| గుళికలు | 12 గ్రా SepaFlash C18 RP ఫ్లాష్ కాట్రిడ్జ్ (గోళాకార సిలికా, 20 - 45 μm, 100 Å, ఆర్డర్ నంబర్:SW-5222-012-SP) | 12 గ్రా SepaFlash C18AQ RP ఫ్లాష్ కార్ట్రిడ్జ్ (గోళాకార సిలికా, 20 - 45 μm, 100 Å, ఆర్డర్ నంబర్:SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| తరంగదైర్ఘ్యం | 254 ఎన్ఎమ్, 220 ఎన్ఎమ్ | 214 ఎన్ఎమ్ | ||
| మొబైల్ దశ | ద్రావకం A: నీరు ద్రావకం B: ఎసిటోనిట్రైల్ | |||
| ప్రవాహం రేటు | 15 మి.లీ./నిమి | 20 mL/నిమి | ||
| నమూనా లోడ్ అవుతోంది | 30 మి.గ్రా | |||
| ప్రవణత | సమయం (CV) | ద్రావకం B (%) | సమయం (నిమి) | ద్రావకం B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
ఫలితాలు మరియు చర్చ
సాధారణ C18 నిలువు వరుస మరియు C18AQ నిలువు వరుసల మధ్య ధ్రువ పెప్టైడ్ నమూనా యొక్క శుద్దీకరణ పనితీరును సరిపోల్చడానికి, మేము నమూనా యొక్క ఫ్లాష్ ప్యూరిఫికేషన్ కోసం ఒక సాధారణ C18 నిలువు వరుసను ఉపయోగించాము.మూర్తి 2లో చూపినట్లుగా, అధిక సజల నిష్పత్తి కారణంగా ఏర్పడిన C18 గొలుసుల హైడ్రోఫోబిక్ దశ పతనం కారణంగా, నమూనా సాధారణ C18 గుళికపై కేవలం ఉంచబడింది మరియు మొబైల్ దశ ద్వారా నేరుగా తొలగించబడింది.ఫలితంగా, నమూనా సమర్థవంతంగా వేరు చేయబడదు మరియు శుద్ధి చేయబడదు.
మూర్తి 2. సాధారణ C18 కాట్రిడ్జ్‌పై నమూనా యొక్క ఫ్లాష్ క్రోమాటోగ్రామ్.
తరువాత, మేము నమూనా యొక్క ఫ్లాష్ శుద్దీకరణ కోసం C18AQ నిలువు వరుసను ఉపయోగించాము.మూర్తి 3లో చూపినట్లుగా, పెప్టైడ్ కాలమ్‌పై ప్రభావవంతంగా ఉంచబడింది మరియు తరువాత తొలగించబడింది.లక్ష్య ఉత్పత్తి ముడి నమూనాలోని మలినాలనుండి వేరు చేసి సేకరించబడింది.లైయోఫైలైజేషన్ మరియు తరువాత HPLC ద్వారా విశ్లేషించబడిన తర్వాత, శుద్ధి చేయబడిన ఉత్పత్తి 98.2% స్వచ్ఛతను కలిగి ఉంటుంది మరియు తదుపరి దశ పరిశోధన మరియు అభివృద్ధి కోసం మరింత ఉపయోగించబడవచ్చు.
మూర్తి 3. C18AQ కాట్రిడ్జ్‌పై నమూనా యొక్క ఫ్లాష్ క్రోమాటోగ్రామ్.
ముగింపులో, SepaFlash C18AQ RP ఫ్లాష్ కార్ట్రిడ్జ్ ఫ్లాష్ క్రోమాటోగ్రఫీ సిస్టమ్ SepaBeanతో కలిపి ఉంది™యంత్రం బలమైన ధ్రువ లేదా హైడ్రోఫిలిక్ నమూనాల శుద్దీకరణ కోసం వేగవంతమైన మరియు సమర్థవంతమైన పరిష్కారాన్ని అందించగలదు.
సెపాఫ్లాష్ C18AQ RP ఫ్లాష్ కాట్రిడ్జ్‌ల శ్రేణిలో Santai టెక్నాలజీ నుండి విభిన్న స్పెసిఫికేషన్‌లు ఉన్నాయి (టేబుల్ 2లో చూపిన విధంగా).
| అంశం సంఖ్య | కాలమ్ పరిమాణం | ప్రవాహం రేటు (mL/min) | గరిష్ట ఒత్తిడి (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 గ్రా | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 గ్రా | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 గ్రా | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 గ్రా | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 గ్రా | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 గ్రా | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 గ్రా | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 గ్రా | 40-80 | 250/17.2 |
టేబుల్ 2. SepaFlash C18AQ RP ఫ్లాష్ కాట్రిడ్జ్‌లు.ప్యాకింగ్ పదార్థాలు: అధిక సామర్థ్యం గల గోళాకార C18(AQ)-బంధిత సిలికా, 20 - 45 μm, 100 Å.
SepaBean™ మెషీన్ యొక్క వివరణాత్మక స్పెసిఫికేషన్‌లు లేదా SepaFlash సిరీస్ ఫ్లాష్ కాట్రిడ్జ్‌లపై ఆర్డరింగ్ సమాచారం కోసం, దయచేసి మా వెబ్‌సైట్‌ను సందర్శించండి.
పోస్ట్ సమయం: అక్టోబర్-12-2018