హాంగ్‌చెంగ్ వాంగ్, బో జు
అప్లికేషన్ R&D కేంద్రం
పరిచయం
నిశ్చల దశ మరియు మొబైల్ దశ యొక్క సాపేక్ష ధ్రువణాల ప్రకారం, ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీని సాధారణ దశ క్రోమాటోగ్రఫీ (NPC) మరియు రివర్స్డ్ ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (RPC)గా విభజించవచ్చు.RPC కోసం, మొబైల్ దశ యొక్క ధ్రువణత స్థిరమైన దశ కంటే బలంగా ఉంటుంది.అధిక సామర్థ్యం, మంచి రిజల్యూషన్ మరియు క్లియర్ రిటెన్షన్ మెకానిజం కారణంగా లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ సెపరేషన్ మోడ్‌లలో RPC అత్యంత విస్తృతంగా ఉపయోగించబడుతుంది.అందువల్ల ఆల్కలాయిడ్స్, కార్బోహైడ్రేట్‌లు, కొవ్వు ఆమ్లాలు, స్టెరాయిడ్‌లు, న్యూక్లియిక్ ఆమ్లాలు, అమైనో ఆమ్లాలు, పెప్టైడ్‌లు, ప్రొటీన్‌లు మొదలైన వివిధ ధ్రువ లేదా ధ్రువ రహిత సమ్మేళనాల విభజన మరియు శుద్ధీకరణకు RPC అనుకూలంగా ఉంటుంది. RPCలో సాధారణంగా ఉపయోగించే స్థిరమైన దశ. C18, C8, C4, ఫినైల్, సైనో, అమినో మొదలైన వివిధ క్రియాత్మక సమూహాలతో బంధించబడిన సిలికా జెల్ మాతృక. ఈ బంధిత ఫంక్షనల్ సమూహాలలో, అత్యంత విస్తృతంగా ఉపయోగించేది C18.80% కంటే ఎక్కువ RPC ఇప్పుడు C18 బంధిత దశను ఉపయోగిస్తున్నట్లు అంచనా వేయబడింది.అందువల్ల C18 క్రోమాటోగ్రఫీ కాలమ్ ప్రతి ప్రయోగశాలకు తప్పనిసరిగా ఉండవలసిన సార్వత్రిక కాలమ్‌గా మారింది.
C18 కాలమ్‌ను చాలా విస్తృతమైన అప్లికేషన్‌లలో ఉపయోగించగలిగినప్పటికీ, చాలా ధ్రువ లేదా అధిక హైడ్రోఫిలిక్ ఉన్న కొన్ని నమూనాల కోసం, సాధారణ C18 నిలువు వరుసలు అటువంటి నమూనాలను శుద్ధి చేయడానికి ఉపయోగించినప్పుడు సమస్యలను కలిగి ఉండవచ్చు.RPCలో, సాధారణంగా ఉపయోగించే ఎల్యూషన్ సాల్వెంట్‌లను వాటి ధ్రువణత ప్రకారం ఆర్డర్ చేయవచ్చు: నీరు < మిథనాల్ < అసిటోనిట్రైల్ < ఇథనాల్ < టెట్రాహైడ్రోఫ్యూరాన్ < ఐసోప్రొపనాల్.ఈ నమూనాల (బలమైన పోలార్ లేదా అధిక హైడ్రోఫిలిక్) కోసం నిలువు వరుసలో మంచి నిలుపుదలని నిర్ధారించడానికి, మొబైల్ ఫేజ్‌గా అధిక నిష్పత్తిలో సజల వ్యవస్థను ఉపయోగించడం అవసరం.అయినప్పటికీ, స్వచ్ఛమైన నీటి వ్యవస్థను (స్వచ్ఛమైన నీరు లేదా స్వచ్ఛమైన ఉప్పు ద్రావణంతో సహా) మొబైల్ ఫేజ్‌గా ఉపయోగిస్తున్నప్పుడు, C18 నిలువు వరుస యొక్క స్థిరమైన దశలో ఉన్న పొడవైన కార్బన్ గొలుసు నీటిని నివారించడం మరియు ఒకదానితో ఒకటి కలపడం జరుగుతుంది, ఫలితంగా తక్షణమే తగ్గుతుంది కాలమ్ యొక్క నిలుపుదల సామర్థ్యం లేదా నిలుపుదల కూడా లేదు.ఈ దృగ్విషయాన్ని "హైడ్రోఫోబిక్ ఫేజ్ పతనం" అని పిలుస్తారు (మూర్తి 1 యొక్క ఎడమ భాగంలో చూపిన విధంగా).మెథనాల్ లేదా అసిటోనిట్రైల్ వంటి సేంద్రీయ ద్రావకాలతో కాలమ్‌ను కడిగినప్పుడు ఈ పరిస్థితి తిరిగి మార్చుకోగలిగినప్పటికీ, ఇది ఇప్పటికీ కాలమ్‌కు హాని కలిగించవచ్చు.అందువల్ల, ఈ పరిస్థితి జరగకుండా నిరోధించడం అవసరం.
మూర్తి 1. సాధారణ C18 నిలువు వరుస (ఎడమ) మరియు C18AQ నిలువు (కుడి)లో సిలికా జెల్ ఉపరితలంపై బంధిత దశల స్కీమాటిక్ రేఖాచిత్రం.
పైన పేర్కొన్న సమస్యలను పరిష్కరించడానికి, క్రోమాటోగ్రాఫిక్ ప్యాకింగ్ మెటీరియల్స్ తయారీదారులు సాంకేతిక మెరుగుదలలు చేసారు.ఈ మెరుగుదలలలో ఒకటి సిలికా జెల్ యొక్క ఉపరితలం మరింత హైడ్రోఫిలిక్ చేయడానికి హైడ్రోఫిలిక్ సైనో సమూహాలను (చిత్రం 1 యొక్క కుడి భాగంలో చూపిన విధంగా) పరిచయం చేయడం వంటి సిలికా మ్యాట్రిక్స్ యొక్క ఉపరితలంపై కొన్ని మార్పులను చేయడం.అందువల్ల సిలికా ఉపరితలంపై ఉన్న C18 గొలుసులు అత్యంత సజల పరిస్థితులలో పూర్తిగా విస్తరించబడతాయి మరియు హైడ్రోఫోబిక్ దశ పతనాన్ని నివారించవచ్చు.ఈ సవరించిన C18 నిలువు వరుసలను సజల C18 నిలువు వరుసలు అని పిలుస్తారు, అవి C18AQ నిలువు వరుసలు, ఇవి అధిక సజల ఎలుషన్ పరిస్థితుల కోసం రూపొందించబడ్డాయి మరియు 100% సజల వ్యవస్థను తట్టుకోగలవు.సేంద్రీయ ఆమ్లాలు, పెప్టైడ్‌లు, న్యూక్లియోసైడ్‌లు మరియు నీటిలో కరిగే విటమిన్‌లతో సహా బలమైన ధ్రువ సమ్మేళనాల విభజన మరియు శుద్ధీకరణలో C18AQ నిలువు వరుసలు విస్తృతంగా వర్తించబడ్డాయి.
డీసాల్టింగ్ అనేది నమూనాల కోసం ఫ్లాష్ ప్యూరిఫికేషన్‌లోని C18AQ నిలువు వరుసల యొక్క సాధారణ అప్లికేషన్‌లలో ఒకటి, ఇది తదుపరి అధ్యయనాలలో నమూనా యొక్క అనువర్తనాన్ని సులభతరం చేయడానికి నమూనా ద్రావకంలోని ఉప్పు లేదా బఫర్ భాగాలను తొలగిస్తుంది.ఈ పోస్ట్‌లో, బలమైన ధ్రువణత కలిగిన బ్రిలియంట్ బ్లూ FCF నమూనాగా ఉపయోగించబడింది మరియు C18AQ కాలమ్‌లో శుద్ధి చేయబడింది.నమూనా ద్రావకం బఫర్ ద్రావణం నుండి సేంద్రీయ ద్రావకంతో భర్తీ చేయబడింది, తద్వారా కింది రోటరీ బాష్పీభవనాన్ని సులభతరం చేయడంతోపాటు ద్రావకాలు మరియు ఆపరేటింగ్ సమయాన్ని ఆదా చేస్తుంది.ఇంకా, నమూనాలోని కొన్ని మలినాలను తొలగించడం ద్వారా నమూనా యొక్క స్వచ్ఛత మెరుగుపరచబడింది.
ప్రయోగాత్మక విభాగం
మూర్తి 2. నమూనా యొక్క రసాయన నిర్మాణం.
ఈ పోస్ట్‌లో బ్రిలియంట్ బ్లూ FCF నమూనాగా ఉపయోగించబడింది.ముడి నమూనా యొక్క స్వచ్ఛత 86% మరియు నమూనా యొక్క రసాయన నిర్మాణం మూర్తి 2లో చూపబడింది. నమూనా ద్రావణాన్ని సిద్ధం చేయడానికి, బ్రిలియంట్ బ్లూ FCF యొక్క 300 mg పొడి ముడి ఘనపదార్థాన్ని 1 M NaH2PO4 బఫర్ ద్రావణంలో కరిగించి, బాగా కదిలించారు. పూర్తిగా స్పష్టమైన పరిష్కారం.నమూనా పరిష్కారం అప్పుడు ఒక ఇంజెక్టర్ ద్వారా ఫ్లాష్ కాలమ్‌లోకి ఇంజెక్ట్ చేయబడింది.ఫ్లాష్ ప్యూరిఫికేషన్ యొక్క ప్రయోగాత్మక సెటప్ టేబుల్ 1లో ఇవ్వబడింది.
| వాయిద్యం | SepaBean™ మెషిన్2 | |||
| గుళికలు | 12 గ్రా SepaFlash C18 RP ఫ్లాష్ కాట్రిడ్జ్ (గోళాకార సిలికా, 20 - 45 μm, 100 Å, ఆర్డర్ నంబర్: SW-5222-012-SP) | 12 గ్రా SepaFlash C18AQ RP ఫ్లాష్ కార్ట్రిడ్జ్ (గోళాకార సిలికా, 20 - 45 μm, 100 Å, ఆర్డర్ నంబర్:SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| తరంగదైర్ఘ్యం | 254 ఎన్ఎమ్ | |||
| మొబైల్ దశ | ద్రావకం A: నీరు ద్రావకం B: మిథనాల్ | |||
| ప్రవాహం రేటు | 30 మి.లీ./నిమి | |||
| నమూనా లోడ్ అవుతోంది | 300 mg (86% స్వచ్ఛతతో బ్రిలియంట్ బ్లూ FCF) | |||
| ప్రవణత | సమయం (CV) | ద్రావకం B (%) | సమయం (CV) | ద్రావకం B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
ఫలితాలు మరియు చర్చ
ఒక SepaFlash C18AQ RP ఫ్లాష్ కార్ట్రిడ్జ్ నమూనా డీసల్టింగ్ మరియు శుద్దీకరణ కోసం ఉపయోగించబడింది.స్టెప్ గ్రేడియంట్ ఉపయోగించబడింది, దీనిలో ఎలుషన్ ప్రారంభంలో మొబైల్ ఫేజ్‌గా స్వచ్ఛమైన నీటిని ఉపయోగించారు మరియు 10 కాలమ్ వాల్యూమ్‌ల (CV) కోసం అమలు చేయబడింది.మూర్తి 3లో చూపినట్లుగా, స్వచ్ఛమైన నీటిని మొబైల్ దశగా ఉపయోగిస్తున్నప్పుడు, నమూనా పూర్తిగా ఫ్లాష్ కార్ట్రిడ్జ్‌పై ఉంచబడుతుంది.తరువాత, మొబైల్ దశలోని మిథనాల్ నేరుగా 100%కి పెంచబడింది మరియు 7.5 CV కోసం ప్రవణత నిర్వహించబడుతుంది.నమూనా 11.5 నుండి 13.5 CV వరకు తొలగించబడింది.సేకరించిన భిన్నాలలో, నమూనా పరిష్కారం NaH2PO4 బఫర్ ద్రావణం నుండి మిథనాల్‌కు భర్తీ చేయబడింది.అత్యంత సజల ద్రావణంతో పోల్చి చూస్తే, తదుపరి దశలో రోటరీ బాష్పీభవనం ద్వారా మిథనాల్ తొలగించడం చాలా సులభం, ఇది క్రింది పరిశోధనను సులభతరం చేస్తుంది.
మూర్తి 3. C18AQ కాట్రిడ్జ్‌పై నమూనా యొక్క ఫ్లాష్ క్రోమాటోగ్రామ్.
బలమైన ధ్రువణత యొక్క నమూనాల కోసం C18AQ గుళిక మరియు సాధారణ C18 కాట్రిడ్జ్ యొక్క నిలుపుదల ప్రవర్తనను పోల్చడానికి, సమాంతర పోలిక పరీక్ష నిర్వహించబడింది.ఒక SepaFlash C18 RP ఫ్లాష్ కార్ట్రిడ్జ్ ఉపయోగించబడింది మరియు నమూనా కోసం ఫ్లాష్ క్రోమాటోగ్రామ్ మూర్తి 4లో చూపబడింది. సాధారణ C18 కాట్రిడ్జ్‌ల కోసం, అత్యధికంగా తట్టుకునే సజల దశ నిష్పత్తి దాదాపు 90%.అందువల్ల ప్రారంభ ప్రవణత 90% నీటిలో 10% మిథనాల్ వద్ద సెట్ చేయబడింది.మూర్తి 4లో చూపినట్లుగా, అధిక సజల నిష్పత్తి కారణంగా ఏర్పడిన C18 గొలుసుల యొక్క హైడ్రోఫోబిక్ దశ పతనం కారణంగా, నమూనా సాధారణ C18 గుళికపై కేవలం ఉంచబడింది మరియు మొబైల్ దశ ద్వారా నేరుగా తొలగించబడింది.ఫలితంగా, నమూనా డీసల్టింగ్ లేదా శుద్దీకరణ యొక్క ఆపరేషన్ పూర్తి చేయబడదు.
మూర్తి 4. సాధారణ C18 కాట్రిడ్జ్‌పై నమూనా యొక్క ఫ్లాష్ క్రోమాటోగ్రామ్.
లీనియర్ గ్రేడియంట్‌తో పోల్చి చూస్తే, స్టెప్ గ్రేడియంట్ ఉపయోగం క్రింది ప్రయోజనాలను కలిగి ఉంది:
1. నమూనా శుద్ధి కోసం ద్రావకం వినియోగం మరియు రన్ సమయం తగ్గించబడింది.
2. లక్ష్య ఉత్పత్తి పదునైన శిఖరంలో పెరుగుతుంది, ఇది సేకరించిన భిన్నాల పరిమాణాన్ని తగ్గిస్తుంది మరియు తద్వారా క్రింది రోటరీ బాష్పీభవనాన్ని సులభతరం చేస్తుంది మరియు సమయాన్ని ఆదా చేస్తుంది.
3. సేకరించిన ఉత్పత్తి మిథనాల్‌లో ఉంటుంది, ఇది సులభంగా ఆవిరైపోతుంది, అందువలన ఎండబెట్టడం సమయం తగ్గుతుంది.
ముగింపులో, దృఢమైన ధ్రువ లేదా అధిక హైడ్రోఫిలిక్ నమూనా యొక్క శుద్దీకరణ కోసం, SepaBean™ మెషిన్ సన్నాహక ఫ్లాష్ క్రోమాటోగ్రఫీ సిస్టమ్‌తో కలిపి SepaFlash C18AQ RP ఫ్లాష్ కాట్రిడ్జ్‌లు వేగవంతమైన మరియు సమర్థవంతమైన పరిష్కారాన్ని అందించగలవు.
SepaFlash బాండెడ్ సిరీస్ C18 RP ఫ్లాష్ కాట్రిడ్జ్‌ల గురించి
సెపాఫ్లాష్ C18AQ RP ఫ్లాష్ కాట్రిడ్జ్‌ల శ్రేణిలో Santai టెక్నాలజీ నుండి విభిన్న స్పెసిఫికేషన్‌లు ఉన్నాయి (టేబుల్ 2లో చూపిన విధంగా).
| అంశం సంఖ్య | కాలమ్ పరిమాణం | ప్రవాహం రేటు (mL/min) | గరిష్ట ఒత్తిడి (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 గ్రా | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 గ్రా | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 గ్రా | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 గ్రా | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 గ్రా | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 గ్రా | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 గ్రా | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 గ్రా | 40-80 | 250/17.2 |
టేబుల్ 2. SepaFlash C18AQ RP ఫ్లాష్ కాట్రిడ్జ్‌లు.
ప్యాకింగ్ పదార్థాలు: అధిక సామర్థ్యం గల గోళాకార C18(AQ)-బంధిత సిలికా, 20 - 45 μm, 100 Å.
logy (టేబుల్ 2 లో చూపిన విధంగా).
పోస్ట్ సమయం: ఆగస్ట్-27-2018