Rui Huang, Bo Xu
Kituo cha R&D cha Maombi
Utangulizi
Peptidi ni kiwanja kinachoundwa na asidi ya amino, ambayo kila moja ina sifa za kipekee za kimwili na kemikali kutokana na aina tofauti na mpangilio wa mabaki ya asidi ya amino inayounda mfuatano wake.Pamoja na maendeleo ya usanisi wa kemikali wa awamu dhabiti, usanisi wa kemikali wa peptidi amilifu mbalimbali umepata maendeleo makubwa.Walakini, kwa sababu ya muundo mgumu wa peptidi iliyopatikana kwa usanisi wa awamu dhabiti, bidhaa ya mwisho inapaswa kusafishwa kwa njia za kuaminika za kujitenga.Mbinu zinazotumiwa kwa kawaida za utakaso wa peptidi ni pamoja na kromatografia ya kubadilishana ioni (IEC) na kromatografia ya hali ya juu ya utendakazi wa awamu ya nyuma (RP-HPLC), ambazo zina hasara za uwezo mdogo wa upakiaji wa sampuli, gharama kubwa ya vyombo vya habari vya kutenganisha, vifaa ngumu na vya gharama kubwa vya kutenganisha, n.k. Kwa ajili ya utakaso wa haraka wa peptidi ndogo za molekuli (MW <1 kDa), kesi iliyofaulu ya maombi ilichapishwa hapo awali na Santai Technologies, ambapo cartridge ya SepaFlash RP C18 ilitumika kwa utakaso wa haraka wa thymopentin (TP-5) na bidhaa lengwa ilikidhi mahitaji ilipatikana.
Mchoro 1. Asidi 20 za amino za kawaida (zinazotolewa kutoka www.bachem.com).
Kuna aina 20 za asidi ya amino ambayo ni ya kawaida katika muundo wa peptidi.Asidi hizi za amino zinaweza kugawanywa katika vikundi vifuatavyo kulingana na polarity na mali ya msingi wa asidi: isiyo ya polar (hydrophobic), polar (isiyo na chaji), asidi au msingi (kama inavyoonyeshwa kwenye Mchoro 1).Katika mfuatano wa peptidi, ikiwa amino asidi zinazounda mfuatano huo nyingi ni za polar (kama ilivyoonyeshwa kwa rangi ya waridi kwenye Mchoro 1), kama vile Cysteine, Glutamine, Asparagine, Serine, Threonine, Tyrosine, n.k. basi peptidi hii inaweza kuwa na nguvu kali. polarity na kuwa na mumunyifu sana katika maji.Wakati wa utaratibu wa utakaso wa sampuli hizi kali za peptidi ya polar kwa kromatografia ya awamu iliyogeuzwa, jambo linaloitwa mkunjo wa awamu ya haidrofobi litatokea (rejelea dokezo la maombi lililochapishwa hapo awali na Santai Technologies: Kuanguka kwa Awamu ya Hydrophobic, Safu za Kromatografia ya Awamu ya AQ na Matumizi Yake).Ikilinganishwa na safu wima za C18 za kawaida, safu wima za C18AQ zilizoboreshwa zinafaa zaidi kwa utakaso wa sampuli kali za polar au hidrofili.Katika chapisho hili, peptidi kali ya polar ilitumiwa kama sampuli na kusafishwa na safu wima ya C18AQ.Kwa hivyo, bidhaa inayolengwa ilikidhi mahitaji ilipatikana na inaweza kutumika katika utafiti na maendeleo yafuatayo.
| Chombo | SepaBean™mashine 2 | |||
| Cartridges | 12 g SepaFlash C18 RP flash cartridge (silika duara, 20 - 45 μm, 100 Å, Nambari ya kuagiza:SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP cartridge flash (silika ya duara, 20 - 45 μm, 100 Å, Nambari ya agizo:SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Urefu wa mawimbi | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Awamu ya rununu | Tengeneza A: Maji Kimumunyisho B: Acetonitrile | |||
| Kiwango cha mtiririko | 15 ml / min | 20 ml / min | ||
| Upakiaji wa sampuli | 30 mg | |||
| Gradient | Muda (CV) | Kiyeyushi B (%) | Muda (dakika) | Kiyeyushi B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Matokeo na majadiliano
Ili kulinganisha utendaji wa utakaso wa sampuli ya peptidi ya polar kati ya safu wima ya kawaida ya C18 na safu wima ya C18AQ, tulitumia safu wima ya C18 ya kawaida kwa usafishaji wa sampuli kama mwanzo.Kama inavyoonyeshwa kwenye Mchoro 2, kutokana na kuanguka kwa awamu ya haidrofobi ya minyororo ya C18 kulikosababishwa na uwiano wa juu wa maji, sampuli iliwekwa kwa shida kwenye katriji ya kawaida ya C18 na ilitolewa moja kwa moja na awamu ya simu.Matokeo yake, sampuli haikutenganishwa kwa ufanisi na kusafishwa.
Kielelezo 2. Chromatogram ya flash ya sampuli kwenye cartridge ya kawaida ya C18.
Kisha, tulitumia safu ya C18AQ kwa utakaso wa flash wa sampuli.Kama inavyoonyeshwa katika Mchoro 3, peptidi ilihifadhiwa kwenye safu kwa ufanisi na kisha kutolewa nje.Bidhaa inayolengwa ilitenganishwa na uchafu kwenye sampuli mbichi na kukusanywa.Baada ya lyophilization na kisha kuchambuliwa na HPLC, bidhaa iliyosafishwa ina usafi wa 98.2% na inaweza kutumika zaidi kwa utafiti na maendeleo ya hatua inayofuata.
Kielelezo 3. Chromatogram ya flash ya sampuli kwenye cartridge ya C18AQ.
Kwa kumalizia, cartridge ya SepaFlash C18AQ RP pamoja na mfumo wa kromatografia wa SepaBean.™mashine inaweza kutoa suluhisho la haraka na la ufanisi kwa ajili ya utakaso wa sampuli kali za polar au hidrofili.
Kuna mfululizo wa cartridges za SepaFlash C18AQ RP zenye vipimo tofauti kutoka kwa Teknolojia ya Santai (kama inavyoonyeshwa katika Jedwali la 2).
| Nambari ya Kipengee | Ukubwa wa Safu | Kiwango cha Mtiririko (mL/dakika) | Upeo.Shinikizo (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Jedwali 2. SepaFlash C18AQ RP flash cartridges.Vifaa vya kufunga: Silika yenye ubora wa juu ya spherical C18(AQ)-iliyounganishwa, 20 - 45 μm, 100 Å.
Kwa habari zaidi juu ya maelezo ya kina ya mashine ya SepaBean™, au maelezo ya kuagiza kwenye mfululizo wa cartridges za SepaFlash, tafadhali tembelea tovuti yetu.
Muda wa kutuma: Oct-12-2018