Bendera ya habari

Habari

Matumizi ya nguzo za C18AQ katika utakaso wa peptidi kali za polar

Matumizi ya nguzo za C18AQ katika utakaso wa peptidi kali za polar

Rui Huang, Bo Xu
Maombi ya R&D

Utangulizi
Peptide ni kiwanja kinachojumuisha asidi ya amino, ambayo kila moja ina mali ya kipekee ya mwili na kemikali kwa sababu ya aina tofauti na mpangilio wa mabaki ya asidi ya amino inayounda mlolongo wake. Pamoja na ukuzaji wa muundo wa kemikali wa awamu thabiti, muundo wa kemikali wa peptides tofauti umefanya maendeleo makubwa. Walakini, kwa sababu ya muundo mgumu wa peptide iliyopatikana na muundo wa awamu thabiti, bidhaa ya mwisho inapaswa kusafishwa na njia za kuaminika za kutenganisha. Njia za kawaida za utakaso zinazotumiwa kwa peptides ni pamoja na ion kubadilishana chromatography (IEC) na mabadiliko ya kiwango cha juu cha kioevu chromatografia (RP-HPLC), ambayo ina shida za uwezo wa chini wa upakiaji, gharama kubwa ya media ya kujitenga, vifaa vya utenganisho na vya gharama, nk kwa utakaso wa haraka wa utambuzi wa chini wa huduma, kwa sababu ya utambuzi wa mapema, kwa sababu ya utakaso wa mapema, kwa sababu ya utambuzi wa utambuzi wa watu, kwa sababu ya utakaso wa mapema, vifaa vya utengenezaji wa pIPS, swd in p. ambayo cartridge ya Sepaflash RP C18 ilitumiwa kwa utakaso wa haraka wa thymopentin (TP-5) na lengo la bidhaa inayokusudiwa mahitaji yalipatikana.

Kielelezo 1. 20 asidi ya kawaida ya amino (iliyochapishwa tena kutoka www.bachem.com).

Kuna aina 20 za asidi ya amino ambayo ni ya kawaida katika muundo wa peptides. Asidi hizi za amino zinaweza kugawanywa katika vikundi vifuatavyo kulingana na mali yao ya polarity na asidi-msingi: isiyo ya polar (hydrophobic), polar (isiyo na asidi), asidi au ya msingi (kama inavyoonyeshwa kwenye Mchoro 1). Katika mlolongo wa peptide, ikiwa asidi ya amino inayounda mlolongo ni zaidi ya polar (kama alama ya rangi ya rangi ya pinki kwenye Kielelezo 1), kama vile cysteine, glutamine, asparagine, serine, threonine, tyrosine, nk basi peptide hii inaweza kuwa na polarity kali na kuwa mumunyifu sana katika maji. Wakati wa utaratibu wa utakaso wa sampuli hizi kali za peptidi ya polar na chromatografia ya awamu iliyobadilishwa, jambo linaloitwa kuanguka kwa awamu ya hydrophobic litatokea (rejea barua iliyochapishwa hapo awali na Teknolojia ya Santai: Kuanguka kwa Awamu ya Hydrophobic, AQ ilibadilisha safu ya chromatografia na matumizi yao). Ikilinganishwa na nguzo za kawaida za C18, nguzo zilizoboreshwa za C18AQ zinafaa zaidi kwa utakaso wa sampuli kali za polar au hydrophilic. Katika chapisho hili, peptidi kali ya polar ilitumiwa kama sampuli na kusafishwa na safu ya C18AQ. Kama matokeo, bidhaa inayokusudiwa mahitaji ya mahitaji yalipatikana na yanaweza kutumiwa katika utafiti na maendeleo yafuatayo.

Sehemu ya majaribio
Sampuli iliyotumiwa katika jaribio hilo ilikuwa peptidi ya syntetisk, ambayo ilitolewa kwa fadhili na maabara ya wateja. Peptide ilikuwa karibu 1 kDa katika MW na ina polarity kali kwa sababu ya mabaki ya asidi ya polar amino katika mlolongo wake. Usafi wa sampuli mbichi ni karibu 80%. Ili kuandaa suluhisho la mfano, sampuli nyeupe ya poda nyeupe ya poda ilifutwa katika maji safi ya mililita 5 na kisha ikabadilishwa ili kuifanya iwe suluhisho wazi kabisa. Suluhisho la mfano liliingizwa kwenye safu ya flash na sindano. Usanidi wa majaribio ya utakaso wa flash umeorodheshwa kwenye Jedwali 1.

Chombo

Sepabeanmashine 2

Cartridges

12 G Sepaflash C18 RP Flash cartridge (silika ya spherical, 20-45 μm, 100 Å, Agizo Nunber: SW-5222-012-SP)

12 G Sepaflash C18AQ RP Flash cartridge (silika ya spherical, 20-45 μm, 100 Å, nambari ya agizo: SW-5222-012-SP (aq))

Wavelength

254 nm, 220 nm

214 nm

Awamu ya rununu

Kutengenezea A: Maji

Solvent B: acetonitrile

Kiwango cha mtiririko

15 ml/min

20 ml/min

Upakiaji wa sampuli

30 mg

Gradient

Wakati (CV)

Kutengenezea B (%)

Wakati (min)

Kutengenezea B (%)

0

0

0

4

1.0

0

1.0

4

10.0

6

7.5

18

12.5

6

13.0

18

16.5

10

14.0

22

19.0

41

15.5

22

21.0

41

18.0

38

/

/

20.0

38

22.0

87

29.0

87

Jedwali 1. Usanidi wa majaribio ya utakaso wa flash.

Matokeo na majadiliano
Ili kulinganisha utendaji wa utakaso wa sampuli ya peptidi ya polar kati ya safu ya kawaida ya C18 na safu ya C18AQ, tulitumia safu ya kawaida ya C18 kwa utakaso wa sampuli kama mwanzo. Kama inavyoonyeshwa kwenye Mchoro 2, kwa sababu ya kuanguka kwa awamu ya hydrophobic ya minyororo ya C18 iliyosababishwa na kiwango cha juu cha maji, sampuli hiyo ilihifadhiwa kwenye cartridge ya kawaida ya C18 na ilibadilishwa moja kwa moja na awamu ya rununu. Kama matokeo, sampuli haikutengwa vizuri na kusafishwa.

Kielelezo 2. Chromatogram ya sampuli kwenye cartridge ya kawaida ya C18.

Ifuatayo, tulitumia safu ya C18AQ kwa utakaso wa sampuli. Kama inavyoonyeshwa kwenye Mchoro 3, peptide ilihifadhiwa vizuri kwenye safu na kisha ikatolewa. Bidhaa iliyolengwa ilitengwa na uchafu katika sampuli mbichi na kukusanywa. Baada ya lyophilization na kisha kuchambuliwa na HPLC, bidhaa iliyosafishwa ina usafi wa 98.2% na inaweza kutumiwa zaidi kwa utafiti na maendeleo ya hatua inayofuata.

Kielelezo 3. Chromatogram ya sampuli kwenye cartridge ya C18AQ.

Kwa kumalizia, sepaflash C18AQ RP Flash cartridge pamoja na mfumo wa chromatografia ya flash SepabeanMashine inaweza kutoa suluhisho la haraka na madhubuti kwa utakaso wa sampuli kali za polar au hydrophilic.

Kuhusu sepaflash C18AQ RP cartridges

Kuna safu ya cartridges za sepaflash C18AQ RP na maelezo tofauti kutoka kwa teknolojia ya Santai (kama inavyoonyeshwa kwenye Jedwali 2).

Nambari ya bidhaa

Saizi ya safu

Kiwango cha mtiririko

(ml/min)

Max.pressure

(psi/bar)

SW-5222-004-SP (aq)

5.4 g

5-15

400/27.5

SW-5222-012-SP (aq)

20 g

10-25

400/27.5

SW-5222-025-SP (aq)

33 g

10-25

400/27.5

SW-5222-040-SP (aq)

48 g

15-30

400/27.5

SW-5222-080-SP (aq)

105 g

25-50

350/24.0

SW-5222-120-SP (aq)

155 g

30-60

300/20.7

SW-5222-220-SP (aq)

300 g

40-80

300/20.7

SW-5222-330-SP (aq)

420 g

40-80

250/17.2

Jedwali 2. Sepaflash C18AQ RP Cartridges. Vifaa vya Ufungashaji: Ufanisi wa hali ya juu wa C18 (aq)-silika, 20-45 μm, 100 Å.

Kwa habari zaidi juu ya maelezo ya kina ya Mashine ya Sepabean ™, au habari ya kuagiza juu ya SepaFlash Series Flash Cartridges, tafadhali tembelea tovuti yetu.


Wakati wa chapisho: Oct-12-2018