Tillämpningen av SEPAFLASH Strong Anion Exchange Chromatography -kolumner vid rening av sura föreningar

Resultat och diskussion

För det första separerades provblandningen med en normal fasflaskkassett förpackad med regelbunden kiseldioxid. Som show i figur 3 eluerades de två komponenterna i provet från patronen efter varandra. Därefter användes en SAX -flashkassett för rening av provet. Som show i figur 4 behölls den sura komponenten B helt på saxpatronen. Den neutrala komponenten A eluerades gradvis från patronen med eluering av den mobila fasen.

Figur 3. Provets blixtkromatogram på en regelbunden normalfaspatron.

Figur 4. Provets blixtkromatogram på en saxkassett.
Jämförelse av figur 3 och figur 4 har komponenten A en inkonsekvent toppform på de två olika flashpatronerna. För att bekräfta om elueringstoppen motsvarar komponenten kan vi använda den fullständiga våglängdsskanningsfunktionen som är inbyggd i kontrollprogramvaran för SEPABEAN ™ -maskinen. Öppna experimentella data för de två separationerna, dra till indikatorlinjen på tidsaxeln (CV) i kromatogrammet till den högsta punkten och den näst högsta punkten i elueringstoppen motsvarande komponenten A, och hela våglängdsspektrumet för dessa två punkter kommer automatiskt att visas under kromatogrammet (såsom visas i figur 5 och figur 6). Jämförelse av hela våglängdsspektrumdata för dessa två separationer har komponenten A ett konsekvent absorptionsspektrum i två experiment. Av orsaken till komponenten A har inkonsekvent toppform på två olika flashpatroner spekuleras det i att det finns specifik föroreningar i komponenten A som har olika retention på den normala faspatronen och saxpatronen. Därför är den eluerande sekvensen annorlunda för komponenten A och orenheten på dessa två flashpatroner, vilket resulterar i inkonsekvent toppform på kromatogrammen.

Figur 5. Det fullständiga våglängdsspektrumet för komponenten A och föroreningen separerad med normal faskatron.

Figur 6. Det fullständiga våglängdsspektrumet för komponenten A och föroreningen separerad av saxkassetten.

Om målprodukten som ska samlas in är den neutrala komponenten A, kan reningsuppgiften enkelt slutföras genom att direkt använda SAX -patronen för eluering efter provbelastning. Å andra sidan, om målprodukten som ska samlas in är den sura komponenten B, kunde fångstfrisättningssättet antas med endast en liten justering i de experimentella stegen: när provet laddades på SAX-patronen och den neutrala komponenten A uteloppades helt med normala fasorganiska lösningsmedel, växla mobilfasen till metanollösning. Acetatjonerna i den mobila fasen kommer att konkurrera med komponenten B för att binda till de kvartära aminjongrupperna på den stationära fasen av SAX -patronen och därmed eluera komponenten B från patronen för att erhålla målprodukten. Kromatogrammet för provet separerade i jonbytarläge visades i figur 7.

Figur 7. Flash -kromatogrammet för komponenten B eluerades i jonbytarläge på en SAX -patron.

Sammanfattningsvis kan surt eller neutralt prov snabbt renas med SAX -patroner i kombination med normal faspatron med olika reningsstrategier. Vidare, med hjälp av full våglängdsskanningsfunktion inbyggd i kontrollprogramvaran för SEPABEAN ™ -maskinen, kunde det karakteristiska absorptionsspektrumet för de eluerade fraktionerna lätt jämföras och bekräftas, vilket hjälper forskare att snabbt bestämma sammansättningen och renheten i de eluerade fraktionerna och därmed förbättra arbetseffektiviteten.