Användningen av SepaFlash Strong Anion Exchange Chromatography Kolumner vid rening av sura föreningar

Resultat och diskussion

Först separerades provblandningen med en normalfas flashpatron förpackad med vanlig kiseldioxid.Såsom visas i figur 3 eluerades de två komponenterna i provet från patronen en efter en.Därefter användes en SAX flash-patron för rening av provet.Som visas i figur 4 hölls den sura komponenten B fullständigt kvar på SAX-patronen.Den neutrala komponenten A eluerades gradvis från patronen med elueringen av den mobila fasen.

Figur 3. Flashkromatogrammet för provet på en vanlig normalfaspatron.

Figur 4. Flashkromatogrammet för provet på en SAX-patron.
Vid jämförelse av figur 3 och figur 4 har komponent A en inkonsekvent toppform på de två olika flashkassetterna.För att bekräfta om elueringstoppen motsvarar komponenten, kan vi använda fullvåglängdsskanningsfunktionen som är inbyggd i SepaBean™-maskinens kontrollprogramvara.Öppna experimentdata för de två separationerna, dra till indikatorlinjen på tidsaxeln (CV) i kromatogrammet till den högsta punkten och den näst högsta punkten för elueringstoppen som motsvarar komponent A, och hela våglängdsspektrumet för dessa två punkter kommer automatiskt att visas under kromatogrammet (som visas i figur 5 och figur 6).Genom att jämföra fullvåglängdsspektrumdata för dessa två separationer har komponent A ett konsekvent absorptionsspektrum i två experiment.På grund av att komponent A har inkonsekvent toppform på två olika flashkassetter, spekuleras det att det finns specifik förorening i komponent A som har olika retention på normalfaskassetten och SAX-kassetten.Därför är elueringssekvensen annorlunda för komponent A och föroreningen på dessa två flashpatroner, vilket resulterar i inkonsekvent toppform på kromatogrammen.

Figur 5. Hela våglängdsspektrumet för komponent A och föroreningen separerade av normalfaspatron.

Figur 6. Hela våglängdsspektrumet för komponent A och föroreningen separerade av SAX-kassetten.

Om målprodukten som ska samlas in är den neutrala komponent A, kan reningsuppgiften enkelt slutföras genom att direkt använda SAX-patronen för eluering efter provladdning.Å andra sidan, om målprodukten som ska samlas in är den sura komponent B, kan sättet för infångning och frisättning användas med endast en liten justering i experimentstegen: när provet laddades på SAX-patronen och den neutrala komponent A eluerades fullständigt med organiska lösningsmedel i normalfas, byt den mobila fasen till metanollösning innehållande 5 % ättiksyra.Acetatjonerna i den mobila fasen kommer att konkurrera med komponent B om att binda till de kvartära aminjongrupperna på den stationära fasen av SAX-patronen, och därigenom eluera komponent B från patronen för att erhålla målprodukten.Kromatogrammet för provet separerat i jonbytesläge visades i figur 7.

Figur 7. Flashkromatogrammet för komponent B eluerade i jonbytesläge på en SAX-kassett.

Sammanfattningsvis kan surt eller neutralt prov snabbt renas med SAX-kassett kombinerad med normalfaskassett med olika reningsstrategier.Dessutom, med hjälp av fullvåglängdsskanningsfunktion inbyggd i SepaBean™-maskinens kontrollprogramvara, kunde det karakteristiska absorptionsspektrumet för de eluerade fraktionerna enkelt jämföras och bekräftas, vilket hjälper forskare att snabbt fastställa sammansättningen och renheten hos de eluerade fraktionerna och därmed förbättra Arbetseffektivitet.