Rui Huang, Bo Xu
Application FoU Center
Introduktion
En peptid är en förening som består av aminosyror, som var och en har unika fysiska och kemiska egenskaper på grund av olika typer och ordning på aminosyrarester som utgör dess sekvens. Med utvecklingen av kemisk syntes av fast fas har den kemiska syntesen av olika aktiva peptider gjort stora framsteg. På grund av den komplicerade sammansättningen av peptiden erhållen genom fastfassyntes bör emellertid slutprodukten renas med tillförlitliga separationsmetoder. De vanligt använda reningsmetoderna för peptider inkluderar jonbytekromatografi (IEC) och omvänd-fas högpresterande vätskekromatografi (RP-HPLC), som har nackdelarna med låg provbelastningskapacitet, hög kostnad för separationsmedium, komplicerad och kostsam separeringsutrustning, etc. för snabb rening av små molekylpeptider (MW <1 KDA), som är framgångsrik och dyr separeringsutrustning, etc. för den snabba rening av små molekylpeptider (MW <1 KDA), som är tidigare publicerad, etc. En sepaflash RP C18-patron användes för snabb rening av tymopentin (TP-5) och målproduktmötet kraven erhölls.
Bild 1. 20 Vanliga aminosyror (återges från www.bachem.com).
Det finns 20 typer av aminosyror som är vanliga i sammansättningen av peptider. Dessa aminosyror kan delas upp i följande grupper enligt deras polaritet och syrabasegenskap: icke-polär (hydrofob), polar (oladdad), sur eller grundläggande (som visas i figur 1). I en peptidsekvens, om aminosyrorna som utgör sekvensen mestadels är polära (som markeras i rosa färg i figur 1), såsom cystein, glutamin, asparagin, serin, treonin, tyrosin, etc. Då kan denna peptid ha en stark polaritet och vara mycket löslig i vatten. Under reningsförfarandet för dessa starka polära peptidprover genom omvänd faskromatografi kommer ett fenomen som kallas hydrofob faskollaps att inträffa (se en tidigare publicerad applikationsnotering av Santai-teknologier: hydrofob faskollaps, AQ omvänd faskromatografikolumn och deras applikationer). Jämfört med de vanliga C18 -kolumnerna är de förbättrade C18AQ -kolumnerna mest lämpliga för rening av starka polära eller hydrofila prover. I det här inlägget användes en stark polär peptid som prov och renades med en C18AQ -kolonn. Som ett resultat erhölls målproduktmötet kraven och kunde användas i följande forskning och utveckling.
| Instrument | Sepabisk™maskin 2 | |||
| Patroner | 12 G SEPAFLASH C18 RP Flash Cartridge (sfärisk kiseldioxid, 20-45 μm, 100 Å, Beställ Nunber ： SW-5222-012-SP) | 12 G SEPAFLASH C18AQ RP Flash Cartridge (sfärisk kiseldioxid, 20-45 μm, 100 Å, ordernummer ： SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Våglängd | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobilfas | Lösningsmedel A: vatten Lösningsmedel B: acetonitril | |||
| Flödeshastighet | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Provbelastning | 30 mg | |||
| Lutning | Tid (CV) | Lösningsmedel B (%) | Tid (min) | Lösningsmedel B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16,5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Resultat och diskussion
För att jämföra reningsprestanda för det polära peptidprovet mellan regelbunden C18 -kolonn och C18AQ -kolumn, använde vi en regelbunden C18 -kolonn för flash -rening av provet som en start. Såsom visas i figur 2, på grund av den hydrofoba faskollapsen av C18 -kedjorna orsakade av högt vattenförhållande, behölls provet knappt på den vanliga C18 -patronen och eluerades direkt av den mobila fasen. Som ett resultat separerades provet inte effektivt och renades.
Figur 2. Provets blixtkromatogram på en regelbunden C18 -patron.
Därefter använde vi en C18AQ -kolumn för flash -rening av provet. Såsom visas i figur 3 bibehölls peptiden effektivt på kolonnen och eluerades sedan ut. Målprodukten separerades från föroreningarna i det råa provet och samlades in. Efter lyofilisering och sedan analyserats av HPLC har den renade produkten en renhet på 98,2% och kan användas ytterligare för nästa steg forskning och utveckling.
Figur 3. Flash -kromatogrammet för provet på en C18AQ -patron.
Sammanfattningsvis är SEPAFLASH C18AQ RP Flash -patron i kombination med flashkromatografisystemet sepabiska™Maskin kan erbjuda en snabb och effektiv lösning för rening av starka polära eller hydrofila prover.
Det finns en serie av SEPAFLASH C18AQ RP Flash -patroner med olika specifikationer från Santai -teknik (som visas i tabell 2).
| Objektnummer | Kolumnstorlek | Flödeshastighet (ml/min) | Max.tryck (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabell 2. SEPAFLASH C18AQ RP Flash -patroner. Förpackningsmaterial: Högeffektiv sfärisk C18 (AQ) -bundna kiseldioxid, 20-45 μm, 100 Å.
För ytterligare information om detaljerade specifikationer för SEPABEAN ™ -maskinen eller beställningsinformationen på SEPAFLASH -serien Flash -patroner, besök vår webbplats.
Posttid: oktober-12-2018