Rui Huang, Bo Xu
Aplikasi R & D Center
Bubuka
Ion exchange chromatography (IEC) nyaéta métode kromatografi nu ilahar dipaké pikeun misahkeun jeung ngamurnikeun sanyawa nu dibere dina bentuk ionik dina leyuran.Numutkeun kaayaan muatan béda ion nu bisa ditukeurkeun, IEC bisa dibagi jadi dua jenis, kromatografi bursa kation jeung kromatografi bursa anion.Dina kromatografi tukeran kation, gugus asam kabeungkeut kana beungeut média separation.Contona, asam sulfonat (-SO3H) nyaéta gugus nu ilahar dipaké dina bursa kation kuat (SCX), nu ngadisosiasikeun H+ jeung gugus nu boga muatan négatif -SO3- sahingga bisa nyerep kation séjén dina leyuran.Dina kromatografi bursa anion, gugus basa kabeungkeut kana beungeut média separation.Contona, amina kuarterner (-NR3OH, dimana R nyaéta gugus hidrokarbon) biasana dipaké dina bursa anion kuat (SAX), nu dissociates OH- jeung gugus muatan positif -N+R3 bisa adsorb anion séjén dina leyuran, hasilna anion. pangaruh bursa.
Diantara produk alami, flavonoid parantos narik perhatian panaliti kusabab peranna dina pencegahan sareng pengobatan panyakit kardiovaskular.Kusabab molekul flavonoid asam alatan ayana gugus hidroksil fenolik, kromatografi bursa ion mangrupa pilihan alternatif salian ti fase normal konvensional atawa kromatografi fase tibalik pikeun misahkeun jeung purifikasi sanyawa asam ieu.Dina kromatografi flash, média separation nu ilahar dipaké pikeun bursa ion nyaéta matriks silika gél dimana gugus bursa ion kabeungkeut kana beungeut cai.Modeu pertukaran ion anu paling sering dianggo dina kromatografi lampu kilat nyaéta SCX (biasana gugus asam sulfonat) sareng SAX (biasana gugus amina kuaterner).Dina catetan aplikasi saméméhna diterbitkeun kalawan judul "The Application of SepaFlash Strong Cation Exchange Chromatography Columns in the Purification of Alkaline Compounds" ku Santai Technologies, kolom SCX dianggo pikeun ngamurnikeun sanyawa basa.Dina tulisan ieu, campuran standar nétral sareng asam dipaké salaku sampel pikeun ngajalajah aplikasi kolom SAX dina purifikasi sanyawa asam.
Bagian Ékspérimén
Gambar 1. Diagram skéma tina fase cicing kabeungkeut kana beungeut média separation SAX.
Dina tulisan ieu, kolom SAX anu tos dipak ku silika kabeungkeut amin kuarterér dipaké (sapertos anu dipidangkeun dina Gambar 1).Campuran Kromon sareng asam 2,4-dihydroxybenzoic dipaké salaku sampel pikeun dimurnikeun (sakumaha ditémbongkeun dina Gambar 2).Campuran ieu leyur dina métanol sarta dimuat kana cartridge flash ku injector.Setélan ékspérimén pikeun purifikasi lampu kilat dibéréndélkeun dina Tabél 1.
Gambar 2. Struktur kimia dua komponén dina campuran sampel.
| Instrumén | Mesin SepaBean™ T | |||||
| Cartridges | 4 g cartridge flash SepaFlash Standard Series (silika henteu teratur, 40 - 63 μm, 60 Å, Nomer pesenan: S-5101-0004) | 4 g SepaFlash Bonded Series SAX flash cartridge (silika henteu teratur, 40 - 63 μm, 60 Å, Nomer pesenan:SW-5001-004-IR) | ||||
| Panjang gelombang | 254 nm (deteksi), 280 nm (monitoring) | |||||
| Fase mobile | Pangleyur A: N-héksana | |||||
| Pangleyur B: Étil asetat | ||||||
| Laju aliran | 30 ml / mnt | 20 ml/min | ||||
| Sampel loading | 20 mg (campuran Komponén A sareng Komponén B) | |||||
| Gradién | Waktos (CV) | Pangleyur B (%) | Waktos (CV) | Pangleyur B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Hasil sareng diskusi
Mimitina, campuran sampel dipisahkeun ku kartrij flash fase normal anu tos dibungkus ku silika biasa.Sapertos anu dipidangkeun dina Gambar 3, dua komponén dina sampel dikaluarkeun tina kartrij hiji-hiji.Salajengna, kartrij flash SAX dianggo pikeun ngamurnikeun sampel.Sapertos dina Gambar 4, Komponén B asam lengkep disimpen dina kartrij SAX.Komponén nétral A laun-laun diélusi tina kartrij kalayan élusi fase gerak.
Gambar 3. Kromatogram flash sampel dina cartridge fase normal biasa.
Gambar 4. Kromatogram flash sampel dina cartridge SAX.
Ngabandingkeun Gambar 3 jeung Gambar 4, komponén A boga bentuk puncak inconsistent dina dua cartridges flash béda.Pikeun ngonfirmasi naha puncak élusi pakait sareng komponén, urang tiasa nganggo fitur scanning panjang gelombang pinuh anu diwangun kana parangkat lunak kontrol mesin SepaBean™.Buka data ékspérimén tina dua separasi, séred ka garis indikator dina sumbu waktu (CV) dina kromatogram ka titik pangluhurna jeung titik pangluhurna kadua puncak élusi pakait jeung Komponén A, sarta spéktrum panjang gelombang pinuh dua ieu. titik bakal otomatis ditémbongkeun di handap kromatogram (sakumaha ditémbongkeun dina Gambar 5 jeung Gambar 6).Ngabandingkeun data spéktrum panjang gelombang pinuh dua separations ieu, komponén A boga spéktrum serep konsisten dina dua percobaan.Ku sabab Komponén A gaduh bentuk puncak anu teu konsisten dina dua kartrij flash anu béda, diduga aya najis khusus dina Komponén A anu gaduh ingetan anu béda dina kartrij fase normal sareng kartrij SAX.Ku alatan éta, runtuyan eluting béda pikeun Komponén A jeung najis dina dua cartridges flash ieu, hasilna bentuk puncak inconsistent on kromatograms.
Gambar 5. Spéktrum panjang gelombang pinuh tina Komponén A jeung impurity dipisahkeun ku cartridge fase normal.
Gambar 6. Spéktrum panjang gelombang pinuh tina Komponén A jeung impurity dipisahkeun ku cartridge SAX.
Upami produk udagan anu bakal dikumpulkeun nyaéta Komponén A nétral, tugas purifikasi tiasa gampang réngsé ku langsung nganggo kartrij SAX pikeun élusi saatos ngamuat sampel.Sabalikna, upami produk udagan anu bakal dikumpulkeun nyaéta Komponén B anu asam, cara pelepasan-nangkep tiasa dilaksanakeun kalayan ngan ukur sakedik panyesuaian dina léngkah-léngkah ékspérimén: nalika sampel dimuat dina kartrij SAX sareng Komponén A nétral. Ieu sagemblengna eluted kaluar kalawan pangleyur organik fase normal, pindah fase mobile kana solusi métanol ngandung 5% asam asétat.Ion asétat dina fase sélulér bakal bersaing jeung Komponén B pikeun ngariung kana gugus ion amina kuarternér dina fase stasioner kartrij SAX, ku kituna ngaluarkeun Komponén B tina kartrij pikeun meunangkeun produk udagan.Kromatogram sampel anu dipisahkeun dina modeu tukeur ion dipidangkeun dina Gambar 7.
Gambar 7. Kromatogram lampu kilat tina Komponén B diélusi dina modeu tukeur ion dina kartrij SAX.
Dina kacindekan, sampel asam atawa nétral bisa gancang dimurnikeun ku cartridge SAX digabungkeun jeung cartridge fase normal ngagunakeun strategi purifikasi béda.Saterusna, kalayan bantuan fitur scanning panjang gelombang pinuh diwangun kana software kontrol mesin SepaBean ™, spéktrum nyerep karakteristik fraksi élusi bisa gampang dibandingkeun jeung dikonfirmasi, mantuan panalungtik gancang nangtukeun komposisi jeung purity tina fraksi éluted sahingga ngaronjatkeun. efisiensi gawé.
| Nomer Barang | Ukuran Kolom | Laju Ngalir (mL/mnt) | Max.Tekanan (psi/bar) |
| SW-5001-004-IR | 5,9 g | 10-20 | 400/27.5 |
| SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27.5 |
| SW-5001-080-IR | 122 g | 30-60 | 350/24.0 |
| SW-5001-120-IR | 180 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/20.7 |
| SW-5001-330-IR | 475 g | 50-100 | 250/17.2
|
meja 2. SepaFlash kabeungkeut Series SAX flash cartridges.Bahan bungkusan: Silika kabeungkeut SAX anu henteu teratur murni, 40 - 63 μm, 60 Å.
Kanggo inpo nu langkung lengkep ihwal spésifikasi detil SepaBean™mesin, atawa informasi mesen on cartridges flash runtuyan SepaFlash, mangga buka ramatloka kami.
waktos pos: Nov-09-2018