Rui Huang, Bo Xu
Aplikasi R & D Center
Bubuka
Péptida nyaéta sanyawa nu diwangun ku asam amino, nu masing-masing miboga sipat fisik jeung kimia nu unik alatan rupa-rupa jenis jeung urutan résidu asam amino nu ngawangun runtuyanana.Kalawan ngembangkeun sintésis kimia fase padet, sintésis kimia rupa péptida aktip geus nyieun kamajuan hébat.Nanging, kusabab komposisi péptida anu rumit anu diala ku sintésis fase padet, produk ahir kedah dimurnikeun ku metode pamisahan anu dipercaya.Métode purifikasi anu biasa dianggo pikeun péptida kalebet kromatografi bursa ion (IEC) sareng kromatografi cair kinerja tinggi fase balik (RP-HPLC), anu ngagaduhan kalemahan kapasitas muatan sampel anu rendah, biaya média pamisahan anu luhur, alat pamisahan rumit sareng mahal. Pikeun purifikasi gancang péptida molekul leutik (MW <1 kDa), kasus aplikasi suksés saméméhna diterbitkeun ku Santai Technologies, nu hiji cartridge SepaFlash RP C18 ieu garapan pikeun purifikasi gancang tina thymopentin (TP-5) jeung produk target minuhan sarat ieu dicandak.
Gambar 1. 20 asam amino umum (dihasilkeun tina www.bachem.com).
Aya 20 rupa asam amino anu umum dina komposisi péptida.Asam amino ieu bisa dibagi kana golongan handap nurutkeun polaritasna jeung sipat asam-basa: non-polar (hidrofobik), polar (teu boga muatan), asam atawa basa (sakumaha ditémbongkeun dina Gambar 1).Dina runtuyan péptida, lamun asam amino constituting runtuyan lolobana polar (sakumaha ditandaan dina warna pink dina Gambar 1), kayaning Cysteine, Glutamine, Asparagine, Serine, Threonine, Tyrosine, jsb. polaritasna sarta jadi kacida leyur dina cai.Salila prosedur purifikasi pikeun sampel péptida polar kuat ieu ku kromatografi fase-malik, fenomena disebut runtuhna fase hidrofobik bakal lumangsung (tingali catetan aplikasi saméméhna diterbitkeun ku Santai Technologies: Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Columns jeung Aplikasi maranéhanana).Dibandingkeun sareng kolom C18 biasa, kolom C18AQ anu ningkat paling cocog pikeun ngamurnikeun sampel polar atanapi hidrofilik anu kuat.Dina tulisan ieu, péptida polar anu kuat dianggo salaku conto sareng dimurnikeun ku kolom C18AQ.Hasilna, produk udagan anu nyumponan sarat dicandak sareng tiasa dianggo dina panalungtikan sareng pamekaran di handap ieu.
| Instrumén | SepaBean™mesin 2 | |||
| Cartridges | 12 g SepaFlash C18 RP flash cartridge (silika buleud, 20 - 45 μm, 100 Å, Order nunber:SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP flash cartridge (silika buleud, 20 - 45 μm, 100 Å, Nomer pesenan:SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Panjang gelombang | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Fase mobile | Pangleyur A: Cai Pangleyur B: Acetonitrile | |||
| Laju aliran | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Sampel loading | 30 mg | |||
| Gradién | Waktos (CV) | Pangleyur B (%) | Waktos (mnt) | Pangleyur B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Hasil sareng diskusi
Pikeun ngabandingkeun kinerja purifikasi pikeun sampel péptida polar antara kolom C18 biasa na kolom C18AQ, urang garapan kolom C18 biasa pikeun purifikasi flash sampel salaku awal.Ditémbongkeun saperti dina Gambar 2, alatan runtuhna fase hidrofobik tina ranté C18 disababkeun ku rasio cai tinggi, sampel ieu bieu dipikagaduh dina cartridge C18 biasa na ieu langsung eluted kaluar ku fase mobile.Hasilna, sampel henteu sacara efektif dipisahkeun sareng dimurnikeun.
Gambar 2. Kromatogram flash sampel dina cartridge C18 biasa.
Salajengna, kami nganggo kolom C18AQ pikeun purifikasi flash sampel.Ditémbongkeun saperti dina Gambar 3, péptida ieu éféktif dipikagaduh dina kolom lajeng eluted kaluar.Produk target dipisahkeun tina najis dina sampel atah sareng dikumpulkeun.Saatos lyophilization teras dianalisis ku HPLC, produk anu dimurnikeun ngagaduhan kamurnian 98,2% sareng tiasa dianggo salajengna pikeun panalungtikan sareng pamekaran léngkah salajengna.
Gambar 3. Kromatogram flash sampel dina cartridge C18AQ.
Kasimpulanana, kartrid lampu kilat SepaFlash C18AQ RP digabungkeun sareng sistem kromatografi lampu kilat SepaBean™Mesin tiasa nawiskeun solusi anu gancang sareng efektif pikeun ngamurnikeun conto polar atanapi hidrofilik anu kuat.
Aya runtuyan cartridges flash SepaFlash C18AQ RP kalawan spésifikasi béda ti Téhnologi Santai (sakumaha ditémbongkeun dina Table 2).
| Nomer Barang | Ukuran Kolom | Laju Ngalir (mL/mnt) | Max.Tekanan (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
meja 2. SepaFlash C18AQ RP flash cartridges.bahan bungkusan:-efisiensi luhur buleud C18(AQ)-kabeungkeut silika, 20 - 45 μm, 100 Å.
Kanggo inpo nu langkung lengkep ihwal spésifikasi detil mesin SepaBean™, atanapi inpormasi pesenan ngeunaan kartrij flash séri SepaFlash, mangga buka halaman wéb kami.
waktos pos: Oct-12-2018