Hongcheng Wang, Bo Xu
Aplikasi R & D Center
Bubuka
Nurutkeun polaritasna relatif fase diam jeung fase gerak, kromatografi cair bisa dibagi jadi kromatografi fase normal (NPC) jeung kromatografi fase terbalik (RPC).Pikeun RPC, polaritasna fase mobile leuwih kuat batan fase cicing.RPC parantos janten anu paling seueur dianggo dina mode pamisahan kromatografi cair kusabab efisiensi anu luhur, résolusi anu saé sareng mékanisme ingetan anu jelas.Ku alatan éta, RPC cocog pikeun pamisahan jeung purifikasi rupa-rupa sanyawa polar atawa non-polar, kaasup alkaloid, karbohidrat, asam lemak, stéroid, asam nukléat, asam amino, péptida, protéin, jsb Dina RPC, fase cicing nu paling ilahar dipake nyaeta matrix gél silika nu kabeungkeut ku rupa-rupa gugus fungsi, kaasup C18, C8, C4, phenyl, cyano, amino, jsb.Diperkirakeun langkung ti 80% RPC ayeuna nganggo fase kabeungkeut C18.Ku alatan éta, kolom kromatografi C18 parantos janten kolom universal anu wajib pikeun unggal laboratorium.
Sanajan kolom C18 bisa dipaké dina rentang pisan lega aplikasi, kumaha oge, pikeun sababaraha sampel nu pisan polar atawa kacida hidrofilik, kolom C18 biasa bisa boga masalah nalika dipaké pikeun purify sampel misalna.Dina RPC, pangleyur élusi nu ilahar dipaké bisa diurutkeun nurutkeun polaritasna: cai
Gambar 1. Diagram skéma tina fase kabeungkeut dina beungeut silika gél dina kolom C18 biasa (kénca) jeung kolom C18AQ (katuhu).
Pikeun ngabéréskeun masalah anu disebatkeun di luhur, produsén bahan bungkusan kromatografi parantos ngadamel perbaikan téknis.Salah sahiji perbaikan ieu nyieun sababaraha modifikasi dina beungeut matrix silika, kayaning bubuka gugus siano hidrofilik (sakumaha ditémbongkeun dina bagian katuhu Gambar 1), sangkan beungeut silika gél leuwih hidrofilik.Ku kituna ranté C18 dina beungeut silika bisa pinuh diperpanjang dina kaayaan cai kacida sarta runtuhna fase hidrofobik bisa dihindari.Kolom C18 anu dirobih ieu disebut kolom C18 cai, nyaéta kolom C18AQ, anu dirarancang pikeun kaayaan élusi cai anu luhur sareng tiasa toleran 100% sistem cai.Kolom C18AQ geus loba dilarapkeun dina separation jeung purifikasi sanyawa polar kuat, kaasup asam organik, péptida, nukléosida jeung vitamin cai-leyur.
Desalting mangrupakeun salah sahiji aplikasi has kolom C18AQ dina purifikasi flash pikeun sampel, nu ngaluarkeun uyah atawa panyangga komponén dina pangleyur sampel pikeun mempermudah aplikasi tina sampel dina studi salajengna.Dina tulisan ieu, Brilliant Blue FCF kalayan polaritas anu kuat dianggo salaku conto sareng dimurnikeun dina kolom C18AQ.Sampel pangleyur diganti ku pangleyur organik tina solusi panyangga, sahingga facilitating nu rotary évaporasi handap ogé nyimpen pangleyur jeung waktu operasi.Saterusna, purity sampel ieu ningkat ku nyoplokkeun sababaraha pangotor dina sampel.
Bagian Ékspérimén
Gambar 2. Struktur kimia sampel.
The Brilliant Blue FCF dipaké salaku sampel dina pos ieu.Purity sampel atah éta 86% jeung struktur kimia sampel ieu ditémbongkeun dina Gambar 2. Pikeun nyiapkeun solusi sampel, 300 mg powdery atah padet Brilliant Blue FCF ieu leyur dina 1 M NaH2PO4 solusi panyangga jeung ngoyagkeun ogé pikeun jadi. solusi lengkep jelas.Solusi sampel ieu lajeng nyuntik kana kolom flash ku injector.Setélan ékspérimén pikeun purifikasi lampu kilat dibéréndélkeun dina Tabél 1.
| Instrumén | Mesin SepaBean™2 | |||
| Cartridges | 12 g SepaFlash C18 RP flash cartridge (silika buleud, 20 - 45 μm, 100 Å, Nomer pesenan: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP flash cartridge (silika buleud, 20 - 45 μm, 100 Å, Jumlah pesenan:SW-5222-012-SP(AQ))） | ||
| Panjang gelombang | 254 nm | |||
| Fase mobile | Pangleyur A: Cai Pangleyur B: Métanol | |||
| Laju aliran | 30 ml / mnt | |||
| Sampel loading | 300 mg (Brilliant Blue FCF kalayan kemurnian 86%) | |||
| Gradién | Waktos (CV) | Pangleyur B (%) | Waktos (CV) | Pangleyur B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Hasil sareng diskusi
A cartridge flash SepaFlash C18AQ RP dipaké pikeun desalting sampel sarta purifikasi.Gradién léngkah dianggo dimana cai murni dianggo salaku fase gerak dina mimiti élusi sareng ngajalankeun 10 volume kolom (CV).Ditémbongkeun saperti dina Gambar 3, lamun ngagunakeun cai murni salaku fase mobile, sampel sagemblengna disimpen dina cartridge flash.Salajengna, métanol dina fase gerak langsung ningkat kana 100% sareng gradiénna dijaga pikeun 7,5 CV.Sampel diélusi tina 11,5 dugi ka 13,5 CV.Dina fraksi dikumpulkeun, solusi sampel diganti tina NaH2PO4 solusi panyangga kana métanol.Ngabandingkeun sareng solusi cai anu luhur, métanol langkung gampang dileungitkeun ku évaporasi rotary dina léngkah saterasna, anu ngagampangkeun panalungtikan di handap ieu.
Gambar 3. Kromatogram flash sampel dina cartridge C18AQ.
Pikeun ngabandingkeun paripolah ingetan tina kartrij C18AQ sareng kartrij C18 biasa pikeun conto polaritasna kuat, uji ngabandingkeun paralel dilakukeun.A cartridge flash SepaFlash C18 RP dipaké sarta kromatogram flash pikeun sampel ieu ditémbongkeun dina Gambar 4. Pikeun cartridges C18 biasa, rasio fase cai nu ditolerir pangluhurna nyaéta ngeunaan 90%.Ku alatan éta, gradién mimiti disetel dina 10% métanol dina 90% cai.Ditémbongkeun saperti dina Gambar 4, alatan runtuhna fase hidrofobik tina ranté C18 disababkeun ku rasio cai tinggi, sampel ieu bieu dipikagaduh dina cartridge C18 biasa na ieu langsung eluted kaluar ku fase mobile.Hasilna, operasi desalting atanapi purifikasi sampel teu tiasa réngsé.
Gambar 4. Kromatogram flash sampel dina cartridge C18 biasa.
Ngabandingkeun sareng gradién linier, panggunaan gradién léngkah ngagaduhan kaunggulan ieu:
1. pamakéan pangleyur tur ngajalankeun waktos keur purifikasi sampel diréduksi.
2. Produk udagan elutes dina puncak seukeut, nu ngurangan volume fraksi dikumpulkeun sahingga facilitates évaporasi Rotary handap ogé ngahemat waktos.
3. Produk dikumpulkeun aya dina métanol nu gampang pikeun ngejat, sahingga drying waktu diréduksi.
Kasimpulanana, pikeun ngamurnikeun sampel anu kuat polar atawa kacida hidrofilik, SepaFlash C18AQ RP flash cartridges digabungkeun jeung preparative flash chromatography system SepaBean™ Machine bisa nawarkeun solusi gancang jeung efisien.
Ngeunaan cartridges flash SepaFlash kabeungkeut Series C18 RP
Aya runtuyan cartridges flash SepaFlash C18AQ RP kalawan spésifikasi béda ti Téhnologi Santai (sakumaha ditémbongkeun dina Table 2).
| Nomer Barang | Ukuran Kolom | Laju Ngalir (mL/mnt) | Max.Tekanan (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
meja 2. SepaFlash C18AQ RP flash cartridges.
bahan bungkusan:-efisiensi luhur buleud C18(AQ)-kabeungkeut silika, 20 - 45 μm, 100 Å.
logy (sakumaha ditémbongkeun dina Table 2).
waktos pos: Aug-27-2018