Мингзу Јанг, Бо Ксу
Центар за истраживање и развој апликација
Увод
Антибиотици су класа секундарних метаболита које производе микроорганизми (укључујући бактерије, гљиве, актиномицете) или слична једињења која су хемијски синтетизована или полусинтетизована.Антибиотици могу инхибирати раст и опстанак других микроорганизама.Први антибиотик који је открио човек, пеницилин, открио је британски микробиолог Александар Флеминг 1928. Он је приметио да бактерије у близини буђи не могу да расту у посуди за културу стафилокока која је била контаминирана буђом.Он је претпоставио да буђ мора да лучи антибактеријску супстанцу, коју је 1928. назвао пеницилин. Међутим, активни састојци тада нису пречишћени.Године 1939. Ернст Чејн и Хауард Флори са Универзитета Оксфорд одлучили су да развију лек који би могао да лечи бактеријске инфекције.Након што су контактирали Флеминга да би добили сојеве, они су успешно екстраховали и пречистили пеницилин из сојева.За успешан развој пеницилина као терапеутског лека, Флеминг, Цхаин и Флореи су поделили Нобелову награду за медицину 1945. године.
Антибиотици се користе као антибактеријски агенси за лечење или превенцију бактеријских инфекција.Постоји неколико главних категорија антибиотика који се користе као антибактеријски агенси: β-лактамски антибиотици (укључујући пеницилин, цефалоспорин, итд.), аминогликозидне антибиотике, макролидне антибиотике, тетрациклинске антибиотике, хлорамфеникол (укупни синтетички антибиотик) итд. Извори антибиотика су: биолошка ферментација, полусинтеза и тотална синтеза.Антибиотици произведени биолошком ферментацијом морају бити структурно модификовани хемијским методама због хемијске стабилности, токсичних нежељених ефеката, антибактеријског спектра и других проблема.Након хемијске модификације, антибиотици су могли постићи повећану стабилност, смањене токсичне нежељене ефекте, проширени антибактеријски спектар, смањену резистенцију на лекове, побољшану биодоступност, а самим тим и побољшани ефекат лечења лековима.Због тога су полусинтетички антибиотици тренутно најпопуларнији правац у развоју антибиотских лекова.
У развоју полусинтетичких антибиотика, антибиотици имају својства ниске чистоће, пуно нуспроизвода и сложених компоненти будући да су изведени из производа микробне ферментације.У овом случају је посебно важна анализа и контрола нечистоћа у полусинтетичким антибиотицима.За ефикасну идентификацију и карактеризацију нечистоћа неопходно је добити довољну количину нечистоћа из синтетичког производа полусинтетичких антибиотика.Међу најчешће коришћеним техникама припреме нечистоћа, флеш хроматографија је исплатива метода са предностима као што су велика количина учитавања узорка, ниска цена, уштеда времена, итд. Флеш хроматографију све више користе истраживачи синтетике.
У овом посту, главна нечистоћа полусинтетичког аминогликозидног антибиотика је коришћена као узорак и пречишћена помоћу СепаФласх Ц18АК кертриџа у комбинацији са машином за флеш хроматографију СепаБеан™.Успешно је добијен циљни производ који испуњава захтеве, што сугерише високо ефикасно решење за пречишћавање ових једињења.
Експериментална Секција
Узорак је љубазно дала локална фармацеутска компанија.Узорак је био врста амино полицикличних угљених хидрата и његова молекуларна структура је била слична аминогликозидним антибиотицима.Поларитет узорка је био прилично висок, што га чини веома растворљивим у води.Шематски дијаграм молекуларне структуре узорка је приказан на слици 1. Чистоћа сировог узорка је била око 88% анализирано помоћу ХПЛЦ.За пречишћавање ових једињења високог поларитета, узорак би се једва задржао на редовним Ц18 колонама према нашим претходним искуствима.Због тога је за пречишћавање узорка коришћена колона Ц18АК.
Слика 1. Шематски дијаграм молекуларне структуре узорка.
Да би се припремио раствор узорка, 50 мг сировог узорка је растворено у 5 мЛ чисте воде, а затим ултразвучно обрађено да би постао потпуно бистар раствор.Раствор узорка је затим убризган у флеш колону помоћу ињектора.Експериментална поставка флеш пречишћавања наведена је у табели 1.
| Инструмент | СепаБеан™ машина 2 | |
| Кертриџи | 12 г СепаФласх Ц18АК РП флеш кертриџ (сферични силицијум диоксид, 20 - 45 μм, 100 А, број поруџбине: СВ-5222-012-СП(АК)) | |
| Таласна дужина | 204 нм, 220 нм | |
| Мобилна фаза | Растварач А: Вода Растварач Б: ацетонитрил | |
| Проток | 15 мЛ/мин | |
| Учитавање узорка | 50 мг | |
| Градијент | време (мин) | Растварач Б (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47.0 | 80 | |
| 52.0 | 80 | |
Резултати и дискусија
Флеш хроматограм узорка на Ц18АК кертриџу је приказан на слици 2. Као што је приказано на слици 2, високо поларни узорак је ефикасно задржан на Ц18АК кертриџу.Након лиохолизације за сакупљене фракције, циљни производ је имао чистоћу од 96,2% (као што је приказано на слици 3) ХПЛЦ анализом.Резултати су показали да би се пречишћени производ могао даље користити у следећем кораку истраживања и развоја.
Слика 2. Флеш хроматограм узорка на Ц18АК кертриџу.
Слика 3. ХПЛЦ хроматограм циљног производа.
У закључку, СепаФласх Ц18АК РП флеш кертриџ у комбинацији са машином за флеш хроматографију СепаБеан™ може да понуди брзо и ефикасно решење за пречишћавање високо поларних узорака.
О СепаФласх Ц18АК РП флеш кертриџима
Постоји серија СепаФласх Ц18АК РП флеш кертриџа са различитим спецификацијама компаније Сантаи Тецхнологи (као што је приказано у табели 2).
| Број предмета | Величина колоне | Проток (мЛ/мин) | Мак.Прессуре (пси/бар) |
| СВ-5222-004-СП(АК) | 5,4 г | 5-15 | 400/27.5 |
| СВ-5222-012-СП(АК) | 20 г | 10-25 | 400/27.5 |
| СВ-5222-025-СП(АК) | 33 г | 10-25 | 400/27.5 |
| СВ-5222-040-СП(АК) | 48 г | 15-30 | 400/27.5 |
| СВ-5222-080-СП(АК) | 105 г | 25-50 | 350/24.0 |
| СВ-5222-120-СП(АК) | 155 г | 30-60 | 300/20.7 |
| СВ-5222-220-СП(АК) | 300 г | 40-80 | 300/20.7 |
| СВ-5222-330-СП(АК) | 420 г | 40-80 | 250/17.2 |
Табела 2. СепаФласх Ц18АК РП флеш кертриџи.Материјали за паковање: Високоефикасни сферни силицијум-диоксид повезан са Ц18(АК), 20 - 45 μм, 100 А.
За даље информације о детаљним спецификацијама СепаБеан™ машине, или информације о поруџбини флеш кертриџа СепаФласх серије, посетите нашу веб страницу.
Време објаве: 26.10.2018