Примена колоне СепаФласх јаке ањонске хроматографије у пречишћавању киселих једињења

Резултати и дискусија

Прво, мешавина узорка је одвојена нормалним фазним флеш картриџом претходно упакованим обичним силицијум диоксидом.Као што је приказано на слици 3, две компоненте у узорку су елуиране из кертриџа једна за другом.Затим је коришћен САКС флеш кертриџ за пречишћавање узорка.Као што је приказано на слици 4, кисела компонента Б је у потпуности задржана на САКС кертриџу.Неутрална компонента А је постепено елуирана из кертриџа са елуирањем мобилне фазе.

Слика 3. Флеш хроматограм узорка на обичном кертриџу нормалне фазе.

Слика 4. Фласх хроматограм узорка на САКС кертриџу.
Упоређујући слике 3 и 4, компонента А има недоследан облик врха на два различита флеш кертриџа.Да бисмо потврдили да ли пик елуције одговара компоненти, можемо да користимо функцију скенирања пуне таласне дужине која је уграђена у управљачки софтвер СепаБеан™ машине.Отворите експерименталне податке за два раздвајања, превуците до индикаторске линије на временској оси (ЦВ) у хроматограму до највише тачке и друге највише тачке елуационог пика која одговара компоненти А, и пуни спектар таласних дужина ове две тачке ће се аутоматски приказати испод хроматограма (као што је приказано на слици 5 и слици 6).Упоређујући пуне податке о спектру таласне дужине ова два раздвајања, компонента А има конзистентан апсорпциони спектар у два експеримента.Из разлога што компонента А има недоследан облик врха на два различита флеш кертриџа, спекулише се да постоји специфична нечистоћа у компоненти А која има различито задржавање на кертриџу са нормалном фазом и на САКС кертриџу.Због тога је секвенца елуирања различита за компоненту А и нечистоћу на ова два флеш кертриџа, што резултира недоследним обликом врха на хроматограмима.

Слика 5. Пуни спектар таласне дужине компоненте А и нечистоће одвојене кертриџом нормалне фазе.

Слика 6. Пуни спектар таласне дужине компоненте А и нечистоћа одвојена САКС кертриџом.

Ако је циљни производ који треба сакупити неутрална компонента А, задатак пречишћавања се лако може завршити директном употребом САКС кертриџа за елуирање након пуњења узорка.С друге стране, ако је циљни производ који треба сакупити кисела компонента Б, начин хватања-отпуштања могао би се усвојити уз само мало прилагођавање у експерименталним корацима: када је узорак напуњен на САКС кертриџ и неутралну компоненту А је потпуно елуиран са органским растварачима нормалне фазе, пребацити мобилну фазу у раствор метанола који садржи 5% сирћетне киселине.Ацетатни јони у мобилној фази ће се такмичити са компонентом Б за везивање за кватернарне аминске јонске групе на стационарној фази САКС кертриџа, чиме ће елуирати компоненту Б из кертриџа да би се добио циљни производ.Хроматограм узорка одвојеног у режиму јонске размене приказан је на слици 7.

Слика 7. Флеш хроматограм компоненте Б елуиране у режиму јонске размене на САКС кертриџу.

У закључку, кисели или неутрални узорак може се брзо пречистити САКС кертриџом у комбинацији са кертриџом нормалне фазе користећи различите стратегије пречишћавања.Штавише, уз помоћ функције скенирања пуне таласне дужине уграђене у управљачки софтвер СепаБеан™ машине, карактеристичан спектар апсорпције елуираних фракција може се лако упоредити и потврдити, помажући истраживачима да брзо одреде састав и чистоћу елуираних фракција и на тај начин побољшају ефикасност рада.