Руи Хуанг, Бо Ксу
Примена Р & Д центар
Увођење
ИОН Екцханге хроматографија (ИЕЦ) је хроматографска метода која се обично користи за одвајање и пречишћавање једињења која су представљена у јонском облику у раствору. Према различитим најавама заменљиве јоне, ИЕЦ се може поделити на две врсте, хроматографија на размјене карије и хроматографија на анионску размену. У катионалској мери Цхроматографију, киселе групе су везане на површину медија раздвајања. На пример, сулфонска киселина (-СО3Х) је најчешће коришћена група у размени јаких катиона (СЦКС), која се дисификује Х + и негативно наплаћену групу -СО3 - на тај начин се адсорбује друге катионе у раствору. Код анионске размене хроматографија, алкалне групе су везане на површину медија раздвајања. На пример, квартарни амин (-НР3ОХ, где је Р да хидрокарбонска група) се обично користи у јаким анионским берзи (САКС), који се дисификује ОХ- и позитивно наплаћену групу -Н + Р3 може адсорбују остале анионске у решењем, што је резултирало дејством анионске размене.
Међу природним производима, флавоноиди су привукли пажњу истраживача због њихове улоге у превенцији и лечењу кардиоваскуларних болести. Пошто су молекули Флавоноида кисели због присуства фенолних хидроксилних група, хроматографија за размену ионска је алтернативна опција, поред конвенционалне уобичајене фазне или преокрећене фазне хроматографије за одвајање и пречишћавање ових киселих једињења. У флеш хроматографији, најчешће коришћени медији за одвајање за јонску размену је силика гел матрица где су ионске размене повезане на њену површину. Најчешће коришћени начини размене јонске на флеш хроматографију су СЦКС (обично група сулфонске киселине) и сак (обично квартарни амин група). У претходно објављеној примени Напомена са насловом "Примена сепафласх црномираних хроматографије на размјени катиона у пречишћавању алкалних једињења" од Сантаи технологије, СЦКС ступци су били запослени за пречишћавање алкалних једињења. У овом посту, мешавина неутралних и киселих стандарда коришћена је као узорак за истраживање примене САКС ступца у пречишћавању киселих једињења.
Експериментални одељак
Слика 1. Схематски дијаграм стационарне фазе везано је на површину медија за одвајање САКС.
У овом посту је коришћен је саксов колона прекупљен са кватернарној амином везаном силицијом (као што је приказано на слици 1). Смеша хромона и 2,4-дихидроксибензоичне киселине коришћена је док се узорак прочисти (као што је приказано на слици 2). Смеша је растворена у метанолу и убацивач на флеш кертриџ од стране ињектора. Експериментално подешавање флеш пречишћавања је наведено у табели 1.
Слика 2. Хемијска структура две компоненте у смешу узорка.
| Инструмент | Сепабеан ™ машина Т | |||||
| Кертриџи | 4 Г Сепафласх Стандард Сериес Фласх Цартридге (неправилна силика), 40 - 63 μм, 60 А, број наруџбе: С-5101-0004) | 4 Г Сепафласх Велнед серије Сакс Фласх Цартридге (неправилна силика, 40 - 63 μм, 60 а, број наруџбе: СВ-5001-004-ИР) | ||||
| Таласна дужина | 254 НМ (Детекција), 280 Нм (Мониторинг) | |||||
| Мобилна фаза | Растварач а: н-хексан | |||||
| Растварач б: етил ацетат | ||||||
| Брзина протока | 30 мл / мин | 20 мл / мин | ||||
| Учитавање узорака | 20 мг (мешавина компоненте А и компонента б) | |||||
| Градијент | Време (ЦВ) | Растварач б (%) | Време (ЦВ) | Растварач б (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Резултати и дискусија
Прво, смеша узорка је одвојена нормалном фазном флешом кертриџама унапред упакованом редовном силицом. Као што је приказана на слици 3, две компоненте у узорку биле су елуиране из кертриџа један за другим. Затим је коришћен сакс флеш кертриџ за пречишћавање узорка. Као што је приказа на слици 4, кисела компонента Б је у потпуности задржана на саксокској улози. Неутрална компонента А је постепено елуирана из кертриџа са елуцијом мобилне фазе.
Слика 3. Фласх хроматограм узорка на редовној нормалној фазни улошци.
Слика 4. Фласх хроматограм узорка на саксок-кертриџу.
Поређење слике 3 и Слика 4, компонента А има недоследан врхунски облик на два различита флешична касета. Да би потврдили да ли је врх елуције одговара компоненти, можемо да искористимо потпуну функцију скенирања таласне дужине која је уграђена у контролни софтвер Сепабеан ™ машине. Отворите експерименталне податке о два одвојености, превуците на индикаторску линију на временској оси (ЦВ) у хроматограу на највишу тачку и другу највишу тачку врха елуције који одговара компоненти А, а потпуна таласна дужина ове две тачке биће аутоматски приказана испод хроматограма (као што је приказано на слици 5 и СЛИКА 6). Поређење пуних података о спектру таласних дужина од ова два одвојена, компонента А има доследан апсорпциони спектар у два експеримента. Из разлога компоненте А има недоследни вршни облик на две различите флеш патроне, то је спекулисано да у компоненту постоји специфична нечистоћа у компоненту А која има различито задржавање на нормалној фазни уложак и сакс кертриџ. Стога је елуинг секвенца разликује за компоненту А и нечистоћу на ова два флешична патрона, што је резултирало недоследном вршном облику на хроматограмима.
Слика 5. Потпуна таласна дужина спектра компоненте А и нечистоћа одвојена нормалном фазном улошком.
Слика 6.. Потпуна таласна дужина спектар компоненте А и нечистоћа одвојена саксерићом.
Ако је циљни производ прикупљен је неутрална компонента А, задатак пречишћавања се лако може завршити директно коришћењем САКС топљења за елуцију након утовара узорака. С друге стране, ако је циљни производ сакупљен је кисела компонента Б, може се усвојити само лагано прилагођавање у експерименталним корацима: када је узорак учитан на САКС кертриџ и неутрална компонента А у потпуности је елуирана са нормалним фазним органским растварачима, пребацује мобилну фазу органским растварачима, пребаците мобилну фазу раствора у метанолу. Ацетатни јони у мобилној фази ће се такмичити са компонентом Б за везивањем до квартерних аминских јонованих група на стационарној фази САКС кертриџа, иако елуира компоненту Б из кертриџа за добијање циљаног производа. Хроматограм узорка раздвојеног у режим рада ИОН-а приказан је на слици 7.
Слика 7. Фласх хроматограм компоненте Б је елуирала режим рада у ИОН-у на САКС кертриџу.
Закључно, кисели или неутрални узорак могао би се брзо пречистити саксок кертриџа у комбинацији са нормалном фазном картоном која користи различите стратегије пречишћавања. Поред тога, уз помоћ потпуне таласне функције за скенирање уграђене у контролни софтвер Сепабеан ™ машине, могу се лако упоредити и потврдити карактеристичан апсорпциони спектар елуираних фракција и потврђен, помажући истраживачима да брзо одреде састав и чистоћу елуираних фракција и тако побољшавају ефикасност.
| Број предмета | Величина колоне | Брзина протока (мл / мин) | Мак.тпрессуре (Пси / бар) |
| СВ-5001-004-ИР | 5.9 г | 10-20 | 400 / 27.5 |
| СВ-5001-012-ИР | 23 г | 15-30 | 400 / 27.5 |
| СВ-5001-025-ИР | 38 г | 15-30 | 400 / 27.5 |
| СВ-5001-040-ИР | 55 г | 20-40 | 400 / 27.5 |
| СВ-5001-080-ИР | 122 г | 30-60 | 350/24.0 |
| СВ-5001-120-ИР | 180 г | 40-80 | 300 / 20.7 |
| СВ-5001-220-ИР | 340 г | 50-100 | 300 / 20.7 |
| СВ-5001-330-ИР | 475 г | 50-100 | 250 / 17.2
|
Табела 2. Сепафласх ведро серије Сакс Фласх кертриџи. Материјали за паковање: ултра-чисто неправилна сак-верована силика, 40 - 63 μм, 60 а.
За даље информације о детаљним спецификацијама Сепабеан ™Машина или информације о наручивању на Фласх кертриџима Сепафласх серишите, посетите нашу веб страницу.
Вријеме поште: Нов-09-2018