Руи Хуанг, Бо Ксу
Центар за истраживање и развој апликација
Увод
Пептид је једињење састављено од аминокиселина, од којих свака има јединствена физичка и хемијска својства због различитих типова и редоследа аминокиселинских остатака који чине његову секвенцу.Са развојем хемијске синтезе чврсте фазе, хемијска синтеза различитих активних пептида је постигла велики напредак.Међутим, због компликованог састава пептида добијеног синтезом у чврстој фази, коначни производ треба пречистити поузданим методама раздвајања.Уобичајене методе пречишћавања пептида укључују хроматографију јонске измене (ИЕЦ) и течну хроматографију високих перформанси са реверзном фазом (РП-ХПЛЦ), које имају недостатке као што су мали капацитет пуњења узорка, висока цена медија за сепарацију, компликована и скупа опрема за сепарацију, итд. За брзо пречишћавање пептида малих молекула (МВ < 1 кДа), Сантаи Тецхнологиес је претходно објавио успешан случај примене, у коме је СепаФласх РП Ц18 кертриџ коришћен за брзо пречишћавање тимопентина (ТП-5) и добијен је циљни производ који испуњава захтеве.
Слика 1. 20 уобичајених аминокиселина (репродуковано са ввв.бацхем.цом).
Постоји 20 врста аминокиселина које су уобичајене у саставу пептида.Ове аминокиселине се могу поделити у следеће групе према њиховом поларитету и киселинско-базном својству: неполарне (хидрофобне), поларне (ненаелектрисане), киселе или базне (као што је приказано на слици 1).У пептидној секвенци, ако су аминокиселине које чине секвенцу углавном поларне (као што је означено ружичастом бојом на слици 1), као што су цистеин, глутамин, аспарагин, серин, треонин, тирозин, итд., онда би овај пептид могао имати јак поларитета и бити високо растворљиви у води.Током поступка пречишћавања ових јаких поларних пептидних узорака хроматографијом обрнуте фазе, појавиће се феномен који се назива колапс хидрофобне фазе (погледајте претходно објављену напомену о примени од стране Сантаи Тецхнологиес: Хидрофобна фаза колапса, АК колоне хроматографије обрнуте фазе и њихове примене).У поређењу са редовним Ц18 колонама, побољшане Ц18АК колоне су најпогодније за пречишћавање јаких поларних или хидрофилних узорака.У овом посту, јак поларни пептид је коришћен као узорак и пречишћен помоћу Ц18АК колоне.Као резултат, добијен је циљни производ који испуњава захтеве и може се користити у наредним истраживањима и развоју.
| Инструмент | СепаБеан™машина 2 | |||
| Кертриџи | 12 г СепаФласх Ц18 РП флеш кертриџ (сферични силицијум диоксид, 20 - 45 μм, 100 А, број поруџбине: СВ-5222-012-СП) | 12 г СепаФласх Ц18АК РП флеш кертриџ (сферични силицијум диоксид, 20 - 45 μм, 100 А, број поруџбине: СВ-5222-012-СП(АК)) | ||
| Таласна дужина | 254 нм, 220 нм | 214 нм | ||
| Мобилна фаза | Растварач А: Вода Растварач Б: ацетонитрил | |||
| Проток | 15 мЛ/мин | 20 мЛ/мин | ||
| Учитавање узорка | 30 мг | |||
| Градијент | време (ЦВ) | Растварач Б (%) | време (мин) | Растварач Б (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Резултати и дискусија
Да бисмо упоредили перформансе пречишћавања за узорак поларног пептида између редовне колоне Ц18 и колоне Ц18АК, користили смо редовну колону Ц18 за брзо пречишћавање узорка као почетак.Као што је приказано на слици 2, услед колапса хидрофобне фазе ланаца Ц18 изазваног високим воденим односом, узорак се једва задржао на обичном Ц18 кертриџу и директно је елуиран мобилном фазом.Као резултат тога, узорак није био ефикасно одвојен и пречишћен.
Слика 2. Флеш хроматограм узорка на обичном Ц18 кертриџу.
Затим смо користили колону Ц18АК за брзо пречишћавање узорка.Као што је приказано на слици 3, пептид је ефикасно задржан на колони и затим елуиран.Циљни производ је одвојен од нечистоћа у сировом узорку и сакупљен.Након лиофилизације и затим анализе помоћу ХПЛЦ, пречишћени производ има чистоћу од 98,2% и може се даље користити за следећи корак истраживања и развоја.
Слика 3. Флеш хроматограм узорка на Ц18АК кертриџу.
У закључку, СепаФласх Ц18АК РП флеш кертриџ у комбинацији са системом флеш хроматографије СепаБеан™машина би могла да понуди брзо и ефикасно решење за пречишћавање јаких поларних или хидрофилних узорака.
Постоји серија СепаФласх Ц18АК РП флеш кертриџа са различитим спецификацијама компаније Сантаи Тецхнологи (као што је приказано у табели 2).
| Број предмета | Величина колоне | Проток (мЛ/мин) | Мак.Прессуре (пси/бар) |
| СВ-5222-004-СП(АК) | 5,4 г | 5-15 | 400/27.5 |
| СВ-5222-012-СП(АК) | 20 г | 10-25 | 400/27.5 |
| СВ-5222-025-СП(АК) | 33 г | 10-25 | 400/27.5 |
| СВ-5222-040-СП(АК) | 48 г | 15-30 | 400/27.5 |
| СВ-5222-080-СП(АК) | 105 г | 25-50 | 350/24.0 |
| СВ-5222-120-СП(АК) | 155 г | 30-60 | 300/20.7 |
| СВ-5222-220-СП(АК) | 300 г | 40-80 | 300/20.7 |
| СВ-5222-330-СП(АК) | 420 г | 40-80 | 250/17.2 |
Табела 2. СепаФласх Ц18АК РП флеш кертриџи.Материјали за паковање: Високоефикасни сферни силицијум-диоксид повезан са Ц18(АК), 20 - 45 μм, 100 А.
За даље информације о детаљним спецификацијама СепаБеан™ машине, или информације о поруџбини флеш кертриџа СепаФласх серије, посетите нашу веб страницу.
Време објаве: 12.10.2018