Хонгцхенг Ванг, Бо Ксу
Примена Р & Д центар
Увођење
Према релативним поларитетима стационарне фазе и мобилне фазе, течна хроматографија може се поделити у нормалну фазу хроматографија (НПЦ) и преокренута фазна хроматографија (РПЦ). За РПЦ је поларитет мобилне фазе јачи од стационарне фазе. РПЦ је постао најчешће кориштен један у течним режимима раздвајања хроматографије због своје високе ефикасности, добре резолуције и јасног механизма задржавања. Стога је РПЦ погодан за раздвајање и пречишћавање различитих поларних или неполарних једињења, укључујући алкалоиде, угљене хидрате, масних киселина, стероида, нуклеинских киселина, аминокиселина, пептида, протеина, итд. У РПЦ-у, што је најчешће коришћена стационарна фаза, која је у РПЦ-у, која је силика гел матрица, укључујући Ц18, Ц8, Ц4, укључујући Ц18, Ц8, Ц4, цијано, амино итд. Међу тим везаним функционалним групама, најчешће се користи је Ц18. Процењује се да више од 80% РПЦ-а сада користи фазу везане за Ц18. Стога је Ц18 колона хроматографије постала мора имати универзална колона за сваку лабораторију.
Иако се Ц18 колона може користити у веома широком спектру апликација, међутим, за неке узорке који су веома поларни или високо хидрофилни, редовни Ц18 ступци могу имати проблема када се користе за пречишћавање таквих узорака. У РПЦ-у се обично користе растварачи елуције могу се наручити у складу са њиховом поларитетом: вода <метанол <ацетонитрил <етанол <тетрахидрофуран <изопропанол. Да би се осигурало добре задржавање на колони за ове узорке (снажан поларни или високо хидрофилни), потребно је користити висок удио воденог система да се користи као мобилна фаза. Међутим, када користите чисти систем воде (укључујући чисто раствор воде или чистог соли), као и мобилна фаза, дугачки угљенични ланац на стационарној фази Ц18 колоне тежи да избегне воду и мешају се једни са другима, што резултира тренутним смањењем капацитета за задржавање или чак никакво задржавање. Ова појава се назива "колапс хидрофобне фазе" (као што је приказано на левом делу слике 1). Иако је ова ситуација реверзибилна када се колона испере са органским растварачима, попут метанола или ацетонитрила, и даље може проузроковати оштећење колоне. Стога је потребно спречити да се ова ситуација не догоди.
Слика 1. Схематски дијаграм везаних фаза на површини силика гела у редовној Ц18 колони (лево) и Ц18АК колони (десно).
Да би се позабавило горе поменутим проблемима, хроматографски произвођачи материјала за паковање направили су техничка побољшања. Једна од ових побољшања прави неке модификације на површини силикатријске матрице, као што је увођење хидрофилних цијано група (као што је приказано у десном делу слике 1), да би се површина силика гела учинила више хидрофиличним. Тако се Ц18 ланци на површини силицијума могу у потпуности проширити под високо воденим условима и може се избећи колапс хидрофобне фазе. Ови модификовани Ц18 ступци називају се водени Ц18 колоне, наиме Ц18АК колоне, који су дизајнирани за високо водене услове елуције и могу толерисати 100% водени систем. Ц18АК колоне се широко примењују у раздвајању и пречишћавању јаких поларних једињења, укључујући органске киселине, пептиде, нуклеозиде и водним витаминима растворљивим.
Опуштање је једна од типичних апликација ц18ак колона у пречишћавању флека за узорке, који уклањају компоненте соли или пуфера у узорку растварача како би се олакшала примени узорка у наредним студијама. У овом посту, сјајна плава ФЦФ са снажном поларитетом коришћена је као узорак и пречишћена на Ц18АК колони. Растварач узорка замењен је органским растварачем од раствора пуфера, на тај начин олакшавање следећег ротационог испаравања као и уштеде растварача и растварача и растварача. Поред тога, чистоћа узорака је побољшана уклањањем неких нечистоћа у узорку.
Експериментални одељак
Слика 2. Хемијска структура узорка.
Сјајно плави ФЦФ коришћен је као узорак у овом посту. Чистоћа сировог узорка је била 86%, а хемијска структура узорка приказана је на слици 2. Да бисте припремили раствор узорка, 300 мг прашкасте чврсте супстанце сјајне плаве ФЦФ-а је растворено у 1 М раствор пуфера 1 М нах2ПО4 и добро је требало да постане потпуно јасан решење. Раствор узорка је затим убризган у Фласх колону од стране ињектора. Експериментално подешавање флеш пречишћавања је наведено у табели 1.
| Инструмент | Сепабеан ™ машина2 | |||
| Кертриџи | 12 г Сепафласх Ц18 РП Фласх Цартридге (сферна силика, 20 - 45 μм, 100 а, број наруџбе: СВ-5222-012-СП) | 12 г Сепафласх Ц18АК РП Фласх Цартридге (сферна силика, 20 - 45 μм, 100 а, број наруџбе: СВ-5222-012-СП (АК))) | ||
| Таласна дужина | 254 нм | |||
| Мобилна фаза | Растварач а: вода Растварач б: метанол | |||
| Брзина протока | 30 мл / мин | |||
| Учитавање узорака | 300 мг (сјајно плави ФЦФ са чистоћом од 86%) | |||
| Градијент | Време (ЦВ) | Растварач б (%) | Време (ЦВ) | Растварач б (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Резултати и дискусија
За ојачање и пречишћавање узорка је коришћен сепафласх ц18ак рп флеш кертриџ. Градијент корака је коришћен у којој је чиста вода коришћена као мобилна фаза на почетку елуције и покреће се за 10 волумена колоне (ЦВ). Као што је приказано на слици 3, када користите чисту воду као мобилну фазу, узорак је у потпуности задржан на флеш кертриџу. Затим је метанол у мобилној фази директно повећан на 100%, а градијент је одржаван за 7,5 животописа. Узорак је елуиран од 11,5 до 13,5 цв. У прикупљеним фракцијама, раствор узорка је замењен из раствора наХ2ПО4 у метанолу. Поређење са високо воденим раствором, метанол је много лакше уклоњен ротацијским испаравањем у наредним кораку, који олакшава следећа истраживања.
Слика 3. Фласх хроматограм узорка на Ц18ак улошци.
Да би упоредили понашање задржавања Ц18АК кертриџа и редовне Ц18 кертриџа за узорке снажне поларитета, извршена је паралелни поредни тест. Коришћена је сепафласх ц18 рп флисх кертриџ и флеш хроматограм за узорак приказан је на слици 4. За редовне Ц18 кертриџе, највиши толерирани водени коефицијент је око 90%. Стога је старт градијент постављен на 10% метанола у води од 90%. Као што је приказано на слици 4, због колапса хидрофобних фаза Ц18 ланца изазваних високим воденим омјером, узорак је једва задржан на регуларном Ц18 кертриџу и директно је елуирао мобилном фазом. Као резултат тога, рад одисања или пречишћавања узорка не може се завршити.
Слика 4. Фласх хроматограм узорка на регуларном Ц18 кертриџу.
Упоређивање са линеарним градијентним употребом градијента корака има следеће предности:
1. Употреба растварача и време рада за пречишћавање узорака се смањује.
2 Циљни производ Елуира на оштар врхун, који смањује обим прикупљених фракција и на тај начин олакшава следећу ротациону испаравање, као и време уштеде.
3. Прикупљени производ је у метанолу који се лако испарава, чиме је време сушења смањено.
Закључно, за пречишћавање узорка који је снажно поларни или високо хидрофилни, сепафласх ц18ак рп флеш патроне који комбинују са препаративном флеш хроматографијом систем сепабеан ™ могло би да понуди брзо и ефикасно решење.
О Сепафласх-у везаним серијама Ц18 РП Фласх кертриџе
Постоје серија сепафласх ц18ак рп флеш кертриџа са различитим спецификацијама из Сантаи технологије (као што је приказано у Табели 2).
| Број предмета | Величина колоне | Брзина протока (мл / мин) | Мак.тпрессуре (Пси / бар) |
| СВ-5222-004-СП (АК) | 5.4 г | 5-15 | 400 / 27.5 |
| СВ-5222-012-СП (АК) | 20 г | 10-25 | 400 / 27.5 |
| СВ-5222-025-СП (АК) | 33 г | 10-25 | 400 / 27.5 |
| СВ-5222-040-СП (АК) | 48 г | 15-30 | 400 / 27.5 |
| СВ-5222-080-СП (АК) | 105 г | 25-50 | 350/24.0 |
| СВ-5222-120-СП (АК) | 155 г | 30-60 | 300 / 20.7 |
| СВ-5222-220-СП (АК) | 300 г | 40-80 | 300 / 20.7 |
| СВ-5222-330-СП (АК) | 420 г | 40-80 | 250 / 17.2 |
Табела 2 Сепафласх Ц18АК РП Фласх кертриџи.
Материјали за паковање: СПХЕРИЧКА ХИГХТФИОНЦИОНСЕ СПХЕРИЧКЕ Ц18 (АК) -БОНЕД СилиЦа, 20 - 45 ум, 100 а.
Логи (као што је приказано у Табели 2).
Вријеме поште: август-27-2018