Rui Huang, bo xu
Aplikimi R&D Center
Prezantim
Një peptid është një përbërje e përbërë nga aminoacide, secila prej të cilave ka veti unike fizike dhe kimike për shkak të llojeve të ndryshme dhe rendit të mbetjeve të aminoacideve që përbëjnë sekuencën e tij. Me zhvillimin e sintezës kimike të fazës së ngurtë, sinteza kimike e peptideve të ndryshme aktive ka bërë përparim të madh. Sidoqoftë, për shkak të përbërjes së ndërlikuar të peptidit të marrë nga sinteza e fazës së ngurtë, produkti përfundimtar duhet të pastrohet me metoda të besueshme të ndarjes. Metodat e pastrimit të përdorur zakonisht për peptidet përfshijnë kromatografinë e shkëmbimit të joneve (IEC) dhe kromatografinë e lëngshme të performancës së lartë të fazës së kundërt (RP-HPLC), të cilat kanë disavantazhet e kapacitetit të ulët të ngarkimit të mostrave, kostoja e lartë e mediave të ndarjes, të komplikuara dhe të kostos së pajisjeve të ndarjes, etj. Për pastrimin e shpejtë të spektrimeve të molekulave të vogla (MW <1 kda), një rast i suksesshëm i aplikimit dhe i botuar nga SA-të, SAPS, SAPI. në të cilën u përdor një fishek Sepaflash RP C18 për pastrimin e shpejtë të timopentinës (TP-5) dhe produktit të synuar u plotësua kërkesat.
Figura 1. 20 aminoacidet e zakonshme (të riprodhuara nga www.bachem.com).
Ekzistojnë 20 lloje të aminoacideve që janë të zakonshme në përbërjen e peptideve. Këto aminoacide mund të ndahen në grupet e mëposhtme sipas polaritetit të tyre dhe pronës së bazës së acidit: jo polar (hidrofobik), polar (të pa ngarkuar), acid ose themelor (siç tregohet në figurën 1). Në një sekuencë peptide, nëse aminoacidet që përbëjnë sekuencën janë kryesisht ato polare (siç shënohet në ngjyrën rozë në figurën 1), siç janë cisteina, glutamina, asparagina, serina, threonine, tirozina, etj. Atëherë ky peptid mund të ketë një polaritet të fortë dhe të jetë shumë i tretshëm në ujë. Gjatë procedurës së pastrimit për këto mostra të forta polare të peptideve nga kromatografia e fazës së kundërt, do të ndodhë një fenomen i quajtur kolapsi i fazës hidrofobike (referojuni një shënimi të aplikimit të publikuar më parë nga Santai Technologies: kolapsi i fazës hidrofobike, kolapsi i fazës së kthyer në AQ dhe aplikimet e tyre). Krahasuar me kolonat e rregullta C18, kolonat e përmirësuara C18AQ janë më të përshtatshme për pastrimin e mostrave të forta polare ose hidrofile. Në këtë post, një peptid i fortë polar u shfrytëzua si mostra dhe u pastrua nga një kolonë C18AQ. Si rezultat, produkti i synuar që plotëson kërkesat u mor dhe mund të përdoret në hulumtimin dhe zhvillimin e mëposhtëm.
| Instrument | Sepabian-Makina 2 | |||
| Fishekë | 12 g Sepaflash C18 RP Flash Flash (Silica Sferike, 20-45 μm, 100 Å, porositje Nunber ： SW-5222-012-SP) | 12 g Sepaflash C18AQ RP Flash Flash (silicë sferike, 20-45 μm, 100 Å, numri i porosisë ： SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Gjatësi vale | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Faza e lëvizshme | Tretës A: Uji Tretësi B: acetonitrile | |||
| Normë e rrjedhës | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Mostra e ngarkimit | 30 mg | |||
| Gradient | Koha (CV) | Tretës b (%) | Koha (min) | Tretës b (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Rezultatet dhe diskutimi
Për të krahasuar performancën e pastrimit për mostrën peptide polare midis kolonës së rregullt C18 dhe kolonës C18AQ, ne kemi përdorur një kolonë të rregullt C18 për pastrimin e flashit të mostrës si fillim. Siç tregohet në Figurën 2, për shkak të rrëzimit të fazës hidrofobike të zinxhirëve C18 të shkaktuar nga raporti i lartë ujor, mostra mezi u mbajt në fishekun e rregullt C18 dhe u zgjodh drejtpërdrejt nga faza e lëvizshme. Si rezultat, mostra nuk u nda dhe u pastrua në mënyrë efektive.
Figura 2. Kromatogrami flash të mostrës në një fishek të rregullt C18.
Tjetra, ne kemi përdorur një kolonë C18AQ për pastrimin e flashit të mostrës. Siç tregohet në Figurën 3, peptidi u mbajt në mënyrë efektive në kolonë dhe më pas u zgjodh. Produkti i synuar u nda nga papastërtitë në mostrën e papërpunuar dhe u mblodh. Pas lyofilizimit dhe më pas analizuar nga HPLC, produkti i pastruar ka një pastërti prej 98.2% dhe mund të përdoret më tej për hulumtimin dhe zhvillimin e hapit tjetër.
Figura 3. Kromatogrami flash të mostrës në një fishek C18AQ.
Si përfundim, Sepaflash C18AQ RP Flash Flash i kombinuar me sistemin e kromatografisë flash Sepabean-Makina mund të ofrojë një zgjidhje të shpejtë dhe efektive për pastrimin e mostrave të forta polare ose hidrofile.
Ekzistojnë një seri e fishekëve flash të Sepaflash C18AQ RP me specifikime të ndryshme nga teknologjia Santai (siç tregohet në Tabelën 2).
| Numri i artikullit | Madhësia e kolonës | Normë e rrjedhës (ml/min) | Presion maksimal (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 G | 40-80 | 250/17.2 |
Tabela 2. Sepaflash C18AQ RP Flash Flash. Materialet e paketimit: me efikasitet të lartë sferik C18 (AQ)-silicë të ndërtuar, 20-45 μm, 100.
Për informacione të mëtejshme mbi specifikimet e hollësishme të makinës Sepabean, ose informacionin e porositjes në Sepaflash Series Flash Flash, ju lutemi vizitoni faqen tonë të internetit.
Koha e Postimit: Tet-12-2018