Hongcheng Wang, Bo Xu
Talosaga R&D Nofoaga Autu
Folasaga
E tusa ai ma polarities o le vaega tumau ma le vaega feaveai, chromatography vai e mafai ona vaevaeina i vaega masani chromatography (NPC) ma reversed phase chromatography (RPC).Mo le RPC, o le polarity o le vaega feaveaʻi e sili atu le malosi nai lo le tulaga tumau.Ua avea le RPC ma fa'aoga sili ona fa'aaogaina i le va'aiga o le chromatography vai ona o lona maualuga maualuga, lelei fa'ai'uga ma manino le fa'atumauina.O le mea lea e talafeagai ai le RPC mo le vavaeeseina ma le faʻamamaina o polar poʻo le non-polar compounds, e aofia ai alkaloids, carbohydrates, fatty acids, steroids, nucleic acids, amino acids, peptides, proteins, ma isi. le silica gel matrix lea o loʻo faʻapipiʻiina ma vaega eseese o galuega, e aofia ai C18, C8, C4, phenyl, cyano, amino, ma isi.O loʻo faʻatatauina e sili atu i le 80% o le RPC o loʻo faʻaogaina nei le vaega faʻapipiʻi C18.O le mea lea ua avea ai le koluma C18 chromatography ma koluma e tatau ona iai mo falesu'esu'e uma.
E ui lava e mafai ona faʻaogaina le koluma C18 i le tele o faʻaoga, peitaʻi, mo nisi faʻataʻitaʻiga e matua polar poʻo maualuga hydrophilic, koluma masani C18 atonu e iai faʻafitauli pe a faʻaaogaina e faʻamamā ai ia faʻataʻitaʻiga.I totonu o le RPC, e mafai ona fa'atonu mea fa'afefete e masani ona fa'aaogaina e tusa ai ma lo latou polarity: vai < methanol < acetonitrile < ethanol < tetrahydrofuran < isopropanol.Ina ia faʻamautinoa lelei le taofiga i luga o le koluma mo nei faʻataʻitaʻiga (malosi polar poʻo le maualuga o le hydrophilic), e manaʻomia le maualuga o le vai e faʻaaogaina e fai ma vaega feaveaʻi.Ae peita'i, pe a fa'aogaina le vai mama (e aofia ai le vai mama po'o le vai masima mama) e avea ma vaega feavea'i, o le filifili umi o le carbon i luga o le vaega tumau o le koluma C18 e taumafai e aloese mai le vai ma fa'afefiloi le tasi ma le isi, e mafua ai le fa'aitiitia vave o le mafai ona taofi o le koluma po'o le leai foi o se taofi.O lenei fa'alavelave e ta'ua o le "hydrophobic phase collapse" (e pei ona fa'aalia i le itu agavale o le Ata 1).E ui ina mafai ona toe fa'afo'i le tulaga lea pe a fufulu le koluma i so'o fa'aola pei ole methanol po'o le acetonitrile, e mafai lava ona fa'aleagaina le koluma.O le mea lea, e tatau ona taofia lenei tulaga mai le tupu.
Ata 1. O le ata faʻataʻitaʻiga o vaega faʻapipiʻi i luga o le silica gel ile koluma masani C18 (agavale) ma le koluma C18AQ (taumatau).
Ina ia foia faʻafitauli ua taʻua i luga, ua faia e le au gaosi mea faʻapipiʻi chromatographic ni faʻaleleia faʻapitoa.O se tasi o nei faʻaleleia o loʻo faia ni suiga i luga o le silica matrix, e pei o le faʻaofiina o vaega o le cyano hydrophilic (e pei ona faʻaalia i le itu taumatau o le Ata 1), ina ia sili atu le hydrophilic luga o le silica gel.O lea la o filifili C18 i luga o le silica e mafai ona faʻalauteleina atoa i lalo o tulaga maualuga o le vai ma mafai ai ona aloese mai le paʻu o le vaega o le hydrophobic.O nei koluma C18 ua suia e ta'ua o koluma C18 vai, e ta'ua o koluma C18AQ, lea ua mamanuina mo tulaga elution maualuga ma e mafai ona talia le 100% aqueous system.C18AQ koluma ua faʻaaogaina lautele i le vavaeeseina ma le faʻamamāina o mea faʻapipiʻi malosi, e aofia ai vailaʻau faʻalaʻau, peptides, nucleosides ma vai-soluble vitamini.
Desalting o se tasi o faʻaoga masani o koluma C18AQ i le faʻamamaina moli mo faʻataʻitaʻiga, lea e aveese ai le masima poʻo le paʻu vaega i totonu o le solvent faʻataʻitaʻiga e faʻafaigofie ai le faʻaogaina o le faʻataʻitaʻiga i suʻesuʻega mulimuli ane.I lenei pou, o le Brilliant Blue FCF ma le malosi polarity na faʻaaogaina e fai ma faʻataʻitaʻiga ma faʻamamaina i luga o le koluma C18AQ.O le fa'ata'ita'iga solvent na suia i so'o so'o mai vaifofo pa'u, ma fa'afaigofie ai le fa'asosolo fa'asolo fa'atasi ai ma le fa'asaoina o solvents ma le taimi fa'atino.E le gata i lea, o le mama o le faʻataʻitaʻiga na faʻaleleia e ala i le aveesea o nisi o mea leaga i totonu o le faʻataʻitaʻiga.
Vaega Fa'ata'ita'i
Ata 2. Le fa'asologa o vaila'au o le fa'ata'ita'iga.
O le Brilliant Blue FCF na faʻaaogaina e fai ma faʻataʻitaʻiga i lenei pou.O le mama o le faʻataʻitaʻiga mata o le 86% ma le faʻasologa o vailaʻau o le faʻataʻitaʻiga na faʻaalia i le Ata 2. Ina ia saunia le vaifofo faʻataʻitaʻiga, 300 mg paʻu paʻu mama o Brilliant Blue FCF na faʻamavaeina i le 1 M NaH2PO4 vaifofo paʻu ma lulu lelei e avea se fofo manino atoatoa.O le vaifofo faʻataʻitaʻi na tui i totonu o le koluma moli e se tui.Ole seti fa'ata'ita'iga ole fa'amama moli o lo'o lisiina ile Laulau 1.
| Meafaigaluega | SepaBean™ masini2 | |||
| Cartridges | 12 g SepaFlash C18 RP kesi moli (silika lapotopoto, 20 - 45 μm, 100 Å, Numera oka: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP kesi moli (silika lapotopoto, 20 - 45 μm, 100 Å, Numera oka:SW-5222-012-SP(AQ)） | ||
| Umi ole galu | 254 nm | |||
| Vaega feavea'i | Solvent A: Vai Solvent B:Methanol | |||
| Fuafuaga tafe | 30 mL/min | |||
| Fa'ata'ita'iga uta | 300 mg (Brilliant Blue FCF ma le mama o le 86%) | |||
| Gradient | Taimi (CV) | Solvent B (%) | Taimi (CV) | Solvent B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
I'uga ma Talanoaga
O le SepaFlash C18AQ RP flash cartridge sa fa'aogaina mo le fa'amama fa'ata'ita'iga ma le fa'amamāina.Na fa'aogaina le fa'agasologa o le la'asaga lea na fa'aaogaina ai le vai mama e fai ma vaega fe'avea'i i le amataga o le elution ma tamo'e mo le 10 koluma voluma (CV).E pei ona faʻaalia i le Ata 3, pe a faʻaaogaina le vai mama e pei o le telefoni feaveaʻi, o le faʻataʻitaʻiga na faʻatumauina atoatoa i luga o le pusa moli.O le isi, o le methanol i le telefoni feaveaʻi na faʻatupuina saʻo i le 100% ma faʻatumauina le gradient mo le 7.5 CV.O le faʻataʻitaʻiga na faʻaumatia mai le 11.5 i le 13.5 CV.I vaega ninii na aoina, na suia le vaifofo faʻataʻitaʻi mai le NaH2PO4 vaifofo paʻu ile methanol.Fa'atusatusa i vaifofō sili ona vai, e sili atu ona faigofie le aveese o le methanol e ala i le fa'asu'a solo i le laasaga mulimuli, lea e faafaigofie ai le su'esu'ega o lo'o mulimuli mai.
Ata 3. O le chromatogram moli o le fa'ata'ita'iga i luga o se kesi C18AQ.
Ina ia faʻatusatusa le amio faʻatumauina o le C18AQ cartridge ma masani C18 cartridge mo faʻataʻitaʻiga o le polarity malosi, na faia le suʻega faʻatusatusa tutusa.O le SepaFlash C18 RP flash cartridge na faʻaaogaina ma o le chromatogram flash mo le faʻataʻitaʻiga na faʻaalia i le Ata 4. Mo pusa masani C18, o le maualuga o le faʻafefe o le vaega o le vai e tusa ma le 90%.O le mea lea na fa'atulaga ai le gradient amata ile 10% methanol ile 90% vai.E pei ona faʻaalia i le Ata 4, ona o le pa'ū o le vaega o le hydrophobic o filifili C18 e mafua mai i le maualuga o le vai, o le faʻataʻitaʻiga na tau le taofia i luga o le pusa masani C18 ma sa faʻasaʻo saʻo e le vaega feaveaʻi.O le i'uga, e le mafai ona mae'a le fa'agaioiga o le fa'amama fa'ata'ita'i po'o le fa'amamāina.
Ata 4. O le chromatogram moli o le fa'ata'ita'iga i luga o se kesi masani C18.
Faʻatusatusa i le laina laina, o le faʻaogaina o le laasaga gradient ei ai tulaga lelei nei:
1. Fa'aaogaina ole soli ma le taimi fa'ata'ita'i mo le fa'amama fa'ata'ita'iga ua fa'aitiitia.
2. O le oloa fa'atatau e alu i se tumutumu ma'ai, lea e fa'aitiitia ai le tele o vaega ninii ua aoina ma fa'afaigofie ai le fa'aoso fa'asolosolo fa'apea ma le fa'asaoina o le taimi.
3. O le oloa aoina o loʻo i totonu o le methanol lea e faigofie ona faʻafefe, o lea e faʻaitiitia ai le taimi faʻagogo.
I le fa'ai'uga, mo le fa'amamāina o le fa'ata'ita'iga e malosi polar po'o le maualuga o le hydrophilic, SepaFlash C18AQ RP flash cartridges tu'ufa'atasia ma le faiga o le chromatography flash sauniuni SepaBean ™ Machine e mafai ona ofoina atu se fofo vave ma lelei.
E uiga i pusa moli uila SepaFlash Bonded Series C18 RP
O loʻo i ai se faʻasologa o le SepaFlash C18AQ RP faʻapipiʻi moli ma faʻamatalaga eseese mai le Santai Technology (e pei ona faʻaalia i le Laulau 2).
| Numera o mea | Tele o le koluma | Fua Faatatau (mL/min) | Max.Omiga (psi/pa) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Fuafuaga 2. SepaFlash C18AQ RP kasini moli.
Mea fa'apipi'i: Silika fa'apipi'i sili C18(AQ) maualuga, 20 - 45 μm, 100 Å.
logy (e pei ona fa'aalia i le Laulau 2).
Taimi meli: Aug-27-2018