Uporaba kolon za močno anionsko izmenjevalno kromatografijo SepaFlash pri čiščenju kislih spojin

Rezultati in razprava

Najprej je bila zmes vzorca ločena z normalnim faznim flash vložkom, predpakiranim z običajnim silicijevim dioksidom.Kot je prikazano na sliki 3, sta bili dve komponenti v vzorcu eluirani iz vložka ena za drugo.Nato je bila za čiščenje vzorca uporabljena flash kartuša SAX.Kot je prikazano na sliki 4, je bila kisla komponenta B v celoti ohranjena na kartuši SAX.Nevtralno komponento A smo postopoma eluirali iz vložka z eluacijo mobilne faze.

Slika 3. Flash kromatogram vzorca na kartuši običajne normalne faze.

Slika 4. Flash kromatogram vzorca na kartuši SAX.
Če primerjamo sliki 3 in sliki 4, ima komponenta A nedosledno obliko vrha na dveh različnih bliskovnih kartušah.Za potrditev, ali elucijski vrh ustreza komponenti, lahko uporabimo funkcijo skeniranja celotne valovne dolžine, ki je vgrajena v krmilno programsko opremo naprave SepaBean™.Odprite eksperimentalne podatke obeh ločitev, povlecite na indikatorsko črto na časovni osi (CV) v kromatogramu do najvišje točke in druge najvišje točke elucijskega vrha, ki ustreza komponenti A, in celotnega spektra valovnih dolžin teh dveh točke bodo samodejno prikazane pod kromatogramom (kot je prikazano na sliki 5 in sliki 6).Če primerjamo podatke celotnega spektra valovnih dolžin teh dveh ločitev, ima komponenta A dosleden absorpcijski spekter v dveh poskusih.Ker ima komponenta A nedosledno obliko vrha na dveh različnih bliskovnih kartušah, se špekulira, da je v komponenti A posebna nečistoča, ki ima različno zadrževanje na kartuši z normalno fazo in kartuši SAX.Zato je zaporedje eluiranja drugačno za komponento A in nečistoče na teh dveh bliskovnih kartušah, kar povzroči nedosledno obliko vrhov na kromatogramih.

Slika 5. Celoten spekter valovne dolžine komponente A in nečistoče, ločene s kartušo normalne faze.

Slika 6. Celoten spekter valovne dolžine komponente A in nečistoče, ločene s kartušo SAX.

Če je ciljni produkt, ki ga je treba zbrati, nevtralna komponenta A, je nalogo čiščenja enostavno dokončati z neposredno uporabo kartuše SAX za elucijo po nalaganju vzorca.Po drugi strani pa, če je ciljni produkt, ki ga je treba zbrati, kisla komponenta B, bi lahko način zajemanja in sproščanja sprejeli le z rahlo prilagoditvijo v eksperimentalnih korakih: ko je bil vzorec naložen na kartušo SAX in nevtralno komponento A je bila popolnoma eluirana z organskimi topili normalne faze, mobilno fazo zamenjajte z raztopino metanola, ki vsebuje 5 % ocetne kisline.Acetatni ioni v mobilni fazi bodo tekmovali s komponento B za vezavo na ionske skupine kvarternega amina na stacionarni fazi vložka SAX, s čimer bodo eluirali komponento B iz vložka, da dobimo ciljni produkt.Kromatogram vzorca, ločenega v načinu ionske izmenjave, je prikazan na sliki 7.

Slika 7. Flash kromatogram komponente B, eluirane v načinu ionske izmenjave na kartuši SAX.

Skratka, kisel ali nevtralen vzorec je mogoče hitro prečistiti s kartušo SAX v kombinaciji s kartušo normalne faze z uporabo različnih strategij čiščenja.Poleg tega je bilo mogoče s pomočjo funkcije skeniranja celotne valovne dolžine, vgrajene v krmilno programsko opremo stroja SepaBean™, zlahka primerjati in potrditi značilni absorpcijski spekter eluiranih frakcij, kar raziskovalcem pomaga hitro določiti sestavo in čistost eluiranih frakcij in tako izboljšati delovna učinkovitost.