Rui Huang, Bo Xu
Center za raziskave in razvoj
Uvod
Peptid je spojina, sestavljena iz aminokislin, od katerih ima vsaka edinstvene fizikalne in kemijske lastnosti zaradi različnih vrst in vrstnega reda aminokislinskih ostankov, ki predstavljajo njegovo zaporedje. Z razvojem kemične sinteze v trdni fazi je kemična sinteza različnih aktivnih peptidov močno napredovala. Vendar pa je treba zaradi zapletene sestave peptida, dobljenega s sintezo trdne faze, končni produkt očistiti z zanesljivimi metodami ločevanja. The commonly used purification methods for peptides include ion exchange chromatography (IEC) and reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC), which have the disadvantages of low sample loading capacity, high cost of separation media, complicated and costly separation equipment, etc. For the rapid purification of small molecule peptides (MW < 1 kDa), a successful application case was previously published by Santai Technologies, in which a Za hitro čiščenje timopentina (TP-5) je bila uporabljena kartuša SEPAFLASH RP C18, pridobljen je bil ciljni izdelek, ki izpolnjuje zahteve.
Slika 1. 20 Običajne aminokisline (reproducirano z www.bachem.com).
Obstaja 20 vrst aminokislin, ki so pogoste v sestavi peptidov. Te aminokisline lahko razdelimo na naslednje skupine glede na njihovo polarnost in lastnosti kisline: nepolarne (hidrofobne), polarne (neopažene), kisle ali osnovne (kot je prikazano na sliki 1). V peptidnem zaporedju, če so aminokisline, ki sestavljajo zaporedje, večinoma polarne (kot so označene v roza barvi na sliki 1), kot so cistein, glutamin, asparagin, serin, treonin, tirozin itd., Potem ima ta peptid lahko močno polarnost in je zelo topno v vodi. Med postopkom čiščenja za te močne polarne peptidne vzorce s kromatografijo z obratno fazo se bo pojavil pojav, imenovan hidrofobni fazni propad (glejte predhodno objavljeno aplikacijsko opombo Santai Technologies: Hidrofobni fazni kolaps, AQ obrnjena fazna kromatografija in njihove aplikacije). V primerjavi z običajnimi stolpci C18 so izboljšani stolpci C18AQ najprimernejši za čiščenje močnih polarnih ali hidrofilnih vzorcev. V tej objavi smo kot vzorec uporabili močan polarni peptid in očistili s stolpcem C18AQ. Kot rezultat tega je bil ciljni izdelek, ki izpolnjuje zahteve, pridobljen in ga je mogoče uporabiti v naslednjih raziskavah in razvoju.
| Instrument | SEPABEAN™Stroj 2 | |||
| Kartuše | 12 g sepaflash C18 RP Flash kartuša (sferični silicijev dioksid, 20-45 μm, 100 Å, red Nunber ： SW-5222-012-SP) | 12 g sepaflash C18AQ RP Flash kartuša (sferični kremen, 20-45 μm, 100 Å, številka naročila: SW-5222-012-SP (aq))) | ||
| Valovna dolžina | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobilna faza | Topilo A: voda Topilo B: acetonitril | |||
| Pretok | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Nalaganje vzorca | 30 mg | |||
| Gradient | Čas (cv) | Topilo B (%) | Čas (min) | Topilo B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Rezultati in razprava
Za primerjavo zmogljivosti za čiščenje za vzorec polarnega peptida med običajnim stolpcem C18 in stolpcem C18AQ smo kot začetek uporabili navaden stolpec C18 za čiščenje vzorca. Kot je prikazano na sliki 2, je bil zaradi hidrofobnega faznega kolapsa verig C18, ki jih povzroča visoko vodno razmerje, vzorec komaj zadržan na običajni kartuši C18 in ga neposredno eluirala mobilna faza. Kot rezultat, vzorec ni bil učinkovito ločen in očiščen.
Slika 2. Flash kromatogram vzorca na običajni kartuši C18.
Nato smo za čiščenje vzorca uporabili stolpec C18AQ. Kot je prikazano na sliki 3, smo peptid učinkovito zadržali na stolpcu in nato eluirali. Ciljni izdelek je bil ločen od nečistoč v surovem vzorcu in zbran. Po liofilizaciji in nato analizirani s HPLC ima prečiščeni izdelek čistost 98,2% in ga je mogoče nadalje uporabiti za raziskovanje in razvoj naslednjih korakov.
Slika 3. Flash kromatogram vzorca na kartuši C18AQ.
Za zaključek, Flash kartuša Sepaflash C18AQ RP v kombinaciji s sistemom Flash kromatografije Sepabean™Stroj bi lahko ponudil hitro in učinkovito rešitev za čiščenje močnih polarnih ali hidrofilnih vzorcev.
Obstaja serija flash kartuš SEPAFLASH C18AQ RP z različnimi specifikacijami iz tehnologije Santai (kot je prikazano v tabeli 2).
| Številka predmeta | Velikost stolpca | Pretok (ml/min) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (aq) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabela 2. Sepaflash C18AQ RP Flash kartuše. Pakirani materiali: sferični silicijev dioksid z visoko učinkovitostjo sferičnega C18 (aq), 20-45 μm, 100 Å.
Za dodatne informacije o podrobnih specifikacijah naprave Sepabean ™ ali o informacijah o naročanju na seriji Sepaflash Flash kartuše obiščite našo spletno stran.
Čas objave: 12. oktober 2018