Mingzu Yang, bo xu
Centrum výskumu a vývoja aplikácií
Zavedenie
Antibiotiká sú triedou sekundárnych metabolitov produkovaných mikroorganizmami (vrátane baktérií, húb, aktinomycetov) alebo podobných zlúčenín, ktoré sú chemicky syntetizované alebo polo-syntetizované. Antibiotiká môžu inhibovať rast a prežitie iných mikroorganizmov. Prvé antibiotikum, ktoré objavil človek, penicilín, objavil britský mikrobiológ Alexander Fleming v roku 1928. Poznamenal, že baktérie v blízkosti plesne nemohli rásť v kultúre Staphylococcus, ktorá bola kontaminovaná plesňou. Predpokladal, že forma musí vylučovať antibakteriálnu látku, ktorú v roku 1928 pomenoval penicilín. Aktívne zložky sa však v tom čase nevyčistili. V roku 1939 sa Ernst Chain a Howard Florey z Oxfordskej univerzity rozhodli vyvinúť liek, ktorý dokáže liečiť bakteriálne infekcie. Po kontakte Fleming, aby získali kmene, úspešne extrahovali a vyčistili penicilín z kmeňov. Za úspešný vývoj penicilínu ako terapeutického liečiva Fleming, Chain a Florey zdieľali Nobelovu cenu za medicínu z roku 1945.
Antibiotiká sa používajú ako antibakteriálne látky na liečbu alebo prevenciu bakteriálnych infekcií. Existuje niekoľko hlavných kategórií antibiotík ako antibakteriálne látky: antibiotiká β-laktámu (vrátane penicilínu, cefalosporínu atď.), Aminoglykozidov, makrolidové antibiotiká, tetracyklínový antibiotiká, chloramfenikól, chloramphenikol (celková syntetická antibiotiká), atď. Semi-syntéza a celková syntéza. Antibiotiká produkované biologickou fermentáciou musia byť štrukturálne modifikované chemickými metódami v dôsledku chemickej stability, toxických vedľajších účinkov, antibakteriálneho spektra a ďalších problémov. Po chemicky modifikácii by antibiotiká mohli dosiahnuť zvýšenú stabilitu, znížené toxické vedľajšie účinky, rozšírené antibakteriálne spektrum, zníženú rezistenciu na liečivo, zlepšenú biologickú dostupnosť a tým zlepšiť účinok liečby liečiva. Preto sú semi-syntetické antibiotiká v súčasnosti najobľúbenejším smerom vo vývoji antibiotických liekov.
Pri vývoji semi-syntetických antibiotík majú antibiotiká vlastnosti nízkej čistoty, veľa vedľajších produktov a komplexných zložiek, pretože sú odvodené z mikrobiálnych fermentačných produktov. V tomto prípade je obzvlášť dôležitá analýza a kontrola nečistôt v semisyntetických antibiotikách. Aby sa účinne identifikovala a charakterizovala nečistoty, je potrebné získať dostatočné množstvo nečistôt zo syntetického produktu semi-syntetických antibiotík. Medzi bežne používané techniky prípravy nečistôt je blesková chromatografia nákladovo efektívna metóda s výhodami, ako je veľké množstvo zaťaženia vzoriek, nízke náklady, úspory času atď. Flash chromatografia bola viac a viac využívaná syntetickými výskumníkmi.
V tomto príspevku sa ako vzorka použila hlavná nečistota semi-syntetického aminoglykozidového antibiotiku a čistila sa kazetou Sepaflash C18AQ kombinovanou so strojom Sepabean ™ Flash Chromatograph System SEPABEAN ™. Úspešne sa dosiahol cieľový produkt, ktorý spĺňal požiadavky, čo naznačuje vysoko účinné riešenie na čistenie týchto zlúčenín.
Experimentálna časť
Vzoru láskavo poskytla miestna farmaceutická spoločnosť. Vzorka bola akýmsi aminokycyklickým uhľohydrátom a jej molekulárna štruktúra bola podobná s aminoglykozidovými antibiotikami. Polarita vzorky bola pomerne vysoká, vďaka čomu bola veľmi rozpustná vo vode. Schematický diagram molekulárnej štruktúry vzorky bol znázornený na obrázku 1. Čistota surovej vzorky bola asi 88% analyzovaná pomocou HPLC. Na čistenie týchto zlúčenín s vysokou polaritou by sa vzorka sotva zachovala na bežných stĺpcoch C18 podľa našich predchádzajúcich skúseností. Preto sa na čistenie vzorky použil kolón C18AQ.
Obrázok 1. Schematický diagram molekulárnej štruktúry vzorky.
Na prípravu roztoku vzorky sa 50 mg surovej vzorky rozpustilo v 5 ml čistej vode a potom ultrazvukové, aby sa stala úplne jasným roztokom. Roztok vzorky bol potom vstreknutý do kolóny Flash injektorom. Experimentálne nastavenie čistenia blesku bolo uvedené v tabuľke 1.
| Prístroj | Stroj SEPABEAN ™ 2 | |
| Kazety | 12 G Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridge (sférický oxid kremičitý, 20-45 μm, 100 Á, číslo objednávky ： SW-5222-012-SP (aq)) | |
| Vlnová dĺžka | 204 nm, 220 nm | |
| Mobilná fáza | Rozpúšťadlo A: Voda Rozpúšťadlo B: acetonitril | |
| Prietok | 15 ml/min | |
| Zaťaženie vzorky | 50 mg | |
| Gradient | Čas (min) | Rozpúšťadlo B (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47.0 | 80 | |
| 52.0 | 80 | |
Výsledky
Flash chromatogram vzorky na kazete C18AQ bol znázornený na obrázku 2. Ako je znázornené na obrázku 2, vysoko polárna vzorka sa účinne zachovala na kazete C18AQ. Po lyofolizácii pre zhromaždené frakcie mal cieľový produkt čistotu 96,2% (ako je znázornené na obrázku 3) pomocou HPLC analýzy. Výsledky naznačujú, že vyčistený produkt by sa mohol ďalej využívať v ďalšom kroku výskum a vývoj.
Obrázok 2. Flash chromatogram vzorky na kazete C18AQ.
Obrázok 3. HPLC chromatogram cieľového produktu.
Záverom možno povedať, že Sepaflash C18AQ RP Flash Flash Cartridge v kombinácii so systémom Flash chromatografia SEPABEAN ™ by mohla ponúknuť rýchle a efektívne riešenie na čistenie vysoko polárnych vzoriek.
O Flash Cartridges Sepaflash C18AQ RP
Existuje séria kazety SEPAFLASH C18AQ RP Flash s rôznymi špecifikáciami z technológie Santai (ako je uvedené v tabuľke 2).
| Číslo položky | Veľkosť stĺpca | Prietok (ml/min) | Max. (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 g | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP (aq) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabuľka 2. Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridges. Balenie materiálov: vysokoúčinný sférický oxid kremičitý C18 (AQ), 20-45 μm, 100 Á.
Ďalšie informácie o podrobných špecifikáciách stroja SEPABEAN ™ alebo o objednávkových informáciách o seriáli Sepaflash Series Flash, navštívte našu webovú stránku.
Čas príspevku: október 26-2018