Aplikácia silných aniónových výmenných chromatografických kolón SepaFlash pri čistení kyslých zlúčenín

Výsledky a diskusia

Po prvé, zmes vzoriek sa oddelila pomocou flash kazety s normálnou fázou vopred naplnenej bežným oxidom kremičitým.Ako je znázornené na obrázku 3, dve zložky vo vzorke sa eluovali z patróny jedna po druhej.Ďalej sa na čistenie vzorky použila kazeta SAX flash.Ako je znázornené na obrázku 4, kyslá zložka B bola úplne zadržaná na kazete SAX.Neutrálna zložka A sa postupne eluovala z patróny elúciou mobilnej fázy.

Obrázok 3. Bleskový chromatogram vzorky na bežnej náplni s normálnou fázou.

Obrázok 4. Bleskový chromatogram vzorky na kazete SAX.
V porovnaní s obrázkom 3 a obrázkom 4 má komponent A nekonzistentný tvar vrcholu na dvoch rôznych flash kazetách.Na potvrdenie, či elučný pík zodpovedá komponentu, môžeme využiť funkciu skenovania s plnou vlnovou dĺžkou, ktorá je zabudovaná do riadiaceho softvéru stroja SepaBean™.Otvorte experimentálne údaje dvoch separácií, potiahnite na indikačnú čiaru na časovej osi (CV) v chromatograme do najvyššieho bodu a druhého najvyššieho bodu elučného píku zodpovedajúceho zložke A a celého spektra vlnovej dĺžky týchto dvoch body sa automaticky zobrazia pod chromatogramom (ako je znázornené na obrázku 5 a obrázku 6).Pri porovnaní údajov o spektre celej vlnovej dĺžky týchto dvoch separácií má zložka A konzistentné absorpčné spektrum v dvoch experimentoch.Z dôvodu, že zložka A má nekonzistentný vrcholový tvar na dvoch rôznych bleskových náplniach, predpokladá sa, že v zložke A je špecifická nečistota, ktorá má rozdielne zadržiavanie na náplni s normálnou fázou a náplni SAX.Preto je elučná sekvencia pre zložku A a nečistoty na týchto dvoch flash kazetách odlišná, výsledkom čoho je nekonzistentný tvar píkov na chromatogramoch.

Obrázok 5. Spektrum celej vlnovej dĺžky zložky A a nečistoty oddelené náplňou s normálnou fázou.

Obrázok 6. Kompletné spektrum vlnovej dĺžky komponentu A a nečistoty oddelené kazetou SAX.

Ak je cieľovým produktom, ktorý sa má odobrať, neutrálna zložka A, purifikačná úloha môže byť jednoducho dokončená priamym použitím náplne SAX na elúciu po nanesení vzorky.Na druhej strane, ak je cieľovým produktom, ktorý sa má odobrať, kyslá zložka B, spôsob zachytávania a uvoľňovania by sa mohol použiť len s miernou úpravou v experimentálnych krokoch: keď bola vzorka naložená na kazetu SAX a neutrálna zložka A bol úplne vymytý pomocou organických rozpúšťadiel s normálnou fázou, prepnite mobilnú fázu na metanolový roztok obsahujúci 5 % kyselinu octovú.Acetátové ióny v mobilnej fáze budú súťažiť so zložkou B o väzbu na kvartérne amínové iónové skupiny na stacionárnej fáze náplne SAX, čím sa z náplne eluuje zložka B, čím sa získa cieľový produkt.Chromatogram vzorky separovanej v režime iónovej výmeny je znázornený na obrázku 7.

Obrázok 7. Bleskový chromatogram zložky B eluovanej v režime iónovej výmeny na kazete SAX.

Záverom možno povedať, že kyslá alebo neutrálna vzorka môže byť rýchlo purifikovaná kazetou SAX kombinovanou s kazetou s normálnou fázou s použitím rôznych purifikačných stratégií.Okrem toho pomocou funkcie skenovania plnej vlnovej dĺžky zabudovanej do riadiaceho softvéru stroja SepaBean™ bolo možné ľahko porovnať a potvrdiť charakteristické absorpčné spektrum eluovaných frakcií, čo pomáha výskumníkom rýchlo určiť zloženie a čistotu eluovaných frakcií a tým zlepšiť efektívnosť práce.