Rui Huang, bo xu
Centrum výskumu a vývoja aplikácií
Zavedenie
Peptid je zlúčenina zložená z aminokyselín, z ktorých každá má jedinečné fyzikálne a chemické vlastnosti v dôsledku rôznych typov a poradia zvyškov aminokyselín, ktoré tvoria jeho sekvenciu. S vývojom chemickej syntézy v tuhej fáze sa chemická syntéza rôznych aktívnych peptidov dosiahla veľký pokrok. Avšak v dôsledku komplikovaného zloženia peptidu získaného syntézou tuhej fázy by sa konečný produkt mal čistiť spoľahlivými metódami separácie. Bežne používané čistiace metódy pre peptidy zahŕňajú chromatografiu iónovej výmeny (IEC) a vysoko výkonná kvapalina-fázová kvapalinová chromatografia (RP-HPLC), ktoré majú nevýhody nízkej kapacity nakladania vzorky, vysoké náklady na separačné médium, komplikované a nákladné separačné vybavenie atď. Na rýchle čistenie tymopentínu (TP-5) sa použila kazeta Sepaflash RP C18 a dosiahol sa cieľový produkt, ktorý spĺňa požiadavky.
Obrázok 1. 20 Bežné aminokyseliny (reprodukované z www.bachem.com).
Existuje 20 druhov aminokyselín, ktoré sú bežné pri zložení peptidov. Tieto aminokyseliny sa dajú rozdeliť do nasledujúcich skupín podľa ich vlastnosti polarity a kyseliny: nepolárne (hydrofóbne), polárne (nezavedené), kyslé alebo základné (ako je znázornené na obrázku 1). V peptidovej sekvencii, ak sú aminokyseliny tvoriace sekvenciu väčšinou polárne (ako sú označené ružovou farbou na obrázku 1), ako je cysteín, glutamín, asparagín, serín, treonín, tyrozín atď. Počas purifikácie pre tieto silné vzorky polárnych peptidov pomocou chromatografie s reverznou fázou sa uskutoční jav nazývaný hydrofóbny fázový kolaps (pozri predtým publikovanú aplikáciu poznámku od spoločnosti Santai Technologies: Hydrofóbna fázový kolaps, AQ obrátené fázové chromatografie a ich aplikácie). V porovnaní s bežnými stĺpcami C18 sú vylepšené kolóny C18AQ najvhodnejšie na čistenie silných polárnych alebo hydrofilných vzoriek. V tomto príspevku sa ako vzorka použila silný polárny peptid a čistený stĺpcom C18AQ. Výsledkom bolo, že cieľový produkt, ktorý spĺňa požiadavky, bol získaný a mohol sa použiť v nasledujúcom výskume a vývoji.
| Prístroj | Sepabean™stroj 2 | |||
| Kazety | 12 G Sepaflash C18 RP Flash Cableredle (sférický oxid kremičitý, 20-45 μm, 100 Á, Order Nunber ： SW-5222-012-SP) | 12 G Sepaflash C18AQ RP Flash Cabinidge (sférický oxid kremičitý, 20-45 μm, 100 Á, číslo objednávky ： SW-5222-012-SP (aq)) | ||
| Vlnová dĺžka | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobilná fáza | Rozpúšťadlo A: Voda Rozpúšťadlo B: acetonitril | |||
| Prietok | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Zaťaženie vzorky | 30 mg | |||
| Gradient | Čas (cv) | Rozpúšťadlo B (%) | Čas (min) | Rozpúšťadlo B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Výsledky
Na porovnanie výkonu čistenia pre vzorku polárneho peptidu medzi pravidelným stĺpcom C18 a C18AQ sme ako začiatok použili pravidelný stĺpec C18 na čistenie vzorky blesk. Ako je znázornené na obrázku 2, v dôsledku kolapsu hydrofóbnej fázy reťazcov C18 spôsobených vysokým vodným pomerom sa vzorka sotva zachovala na bežnej kazete C18 a bola priamo eluovaná mobilnou fázou. V dôsledku toho nebola vzorka účinne oddelená a čistená.
Obrázok 2. Flash chromatogram vzorky na bežnej kazete C18.
Ďalej sme použili stĺpec C18AQ na čistenie vzorky. Ako je znázornené na obrázku 3, peptid sa účinne zachoval na stĺpci a potom sa eluoval. Cieľový produkt bol oddelený od nečistôt vo vzorke surovej a zhromaždený. Po lyofilizácii a potom analyzovanou pomocou HPLC má čistený produkt čistotu 98,2% a mohol sa ďalej využívať na ďalší krok výskum a vývoj.
Obrázok 3. Flash chromatogram vzorky na kazete C18AQ.
Na záver, Sepaflash C18AQ RP Flash Cabtridge kombinovaný s flash chromatografickým systémom Sepaban™Stroj by mohol ponúknuť rýchle a efektívne riešenie na čistenie silných polárnych alebo hydrofilných vzoriek.
Existuje séria kazety SEPAFLASH C18AQ RP Flash s rôznymi špecifikáciami z technológie Santai (ako je uvedené v tabuľke 2).
| Číslo položky | Veľkosť stĺpca | Prietok (ml/min) | Max. (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 g | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP (aq) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabuľka 2. Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridges. Balenie materiálov: vysokoúčinný sférický oxid kremičitý C18 (AQ), 20-45 μm, 100 Á.
Ďalšie informácie o podrobných špecifikáciách stroja SEPABEAN ™ alebo o objednávkových informáciách o seriáli Sepaflash Series Flash, navštívte našu webovú stránku.
Čas príspevku: október 12-2018