Rui Huang, Bo Xu
යෙදුම් R&D මධ්‍යස්ථානය
හැදින්වීම
පෙප්ටයිඩ යනු ඇමයිනෝ අම්ල වලින් සමන්විත සංයෝගයක් වන අතර, ඒ සෑම එකක්ම එහි අනුපිළිවෙලින් සමන්විත ඇමයිනෝ අම්ල අපද්‍රව්‍යවල විවිධ වර්ග සහ අනුපිළිවෙල හේතුවෙන් අද්විතීය භෞතික හා රසායනික ගුණ ඇත.ඝන අදියර රසායනික සංස්ලේෂණය වර්ධනය වීමත් සමඟ විවිධ ක්රියාකාරී පෙප්ටයිඩවල රසායනික සංශ්ලේෂණය විශාල ප්රගතියක් ලබා ඇත.කෙසේ වෙතත්, ඝන අවධි සංස්ලේෂණය මගින් ලබා ගන්නා ලද පෙප්ටයිඩයේ සංකීර්ණ සංයුතිය නිසා, අවසන් නිශ්පාදනය විශ්වසනීය වෙන් කිරීමේ ක්රම මගින් පවිත්ර කළ යුතුය.පෙප්ටයිඩ සඳහා බහුලව භාවිතා වන පිරිසිදු කිරීමේ ක්රම අතර අයන හුවමාරු වර්ණදේහ (IEC) සහ ප්‍රතිලෝම-අදියර ඉහළ ක්රියාකාරී ද්‍රව වර්ණදේහ (RP-HPLC) ඇතුළත් වේ, ඒවාට අඩු නියැදි පැටවීමේ ධාරිතාව, වෙන් කිරීමේ මාධ්‍යයේ අධික පිරිවැය, සංකීර්ණ හා මිල අධික වෙන් කිරීමේ උපකරණවල අවාසි ඇත. ආදිය. කුඩා අණු පෙප්ටයිඩ (MW <1 kDa) සීඝ්‍රයෙන් පිරිසිදු කිරීම සඳහා, Santai Technologies විසින් සාර්ථක යෙදුම් නඩුවක් කලින් ප්‍රකාශයට පත් කරන ලද අතර, එහි SepaFlash RP C18 කාට්රිජයක් thymopentin (TP-5) වේගවත් පිරිසිදු කිරීම සඳහා භාවිතා කරන ලදී. අවශ්‍යතා සපුරාලන ඉලක්කගත නිෂ්පාදන ලබා ගන්නා ලදී.
රූපය 1. පොදු ඇමයිනෝ අම්ල 20 (www.bachem.com වෙතින් ප්‍රතිනිෂ්පාදනය කරන ලදී).
පෙප්ටයිඩ සංයුතියේ බහුලව දක්නට ලැබෙන ඇමයිනෝ අම්ල වර්ග 20 ක් ඇත.මෙම ඇමයිනෝ අම්ල ඒවායේ ධ්‍රැවීයතාව සහ අම්ල-පාදක ගුණය අනුව පහත කාණ්ඩවලට බෙදිය හැකිය: ධ්‍රැවීය නොවන (හයිඩ්‍රොෆෝබික්), ධ්‍රැවීය (ආරෝපණය නොකළ), ආම්ලික හෝ මූලික (රූපය 1 හි පෙන්වා ඇති පරිදි).පෙප්ටයිඩ අනුපිළිවෙලකදී, අනුක්‍රමය සෑදෙන ඇමයිනෝ අම්ල බොහෝ දුරට ධ්‍රැවීය ඒවා නම් (රූපය 1 හි රෝස පැහැයෙන් සලකුණු කර ඇති පරිදි), එනම් සිස්ටයින්, ග්ලූටමින්, ඇස්පරජින්, සෙරීන්, ත්‍රෙයොනීන්, ටයිරොසීන් යනාදී නම්, මෙම පෙප්ටයිඩයට ප්‍රබල විය හැකිය. ධ්‍රැවීයතාව සහ ජලයේ අධික ලෙස ද්‍රාව්‍ය වේ.මෙම ප්‍රබල ධ්‍රැවීය පෙප්ටයිඩ සාම්පල ප්‍රතිලෝම-අදියර වර්ණදේහ මගින් පිරිපහදු කිරීමේ ක්‍රියා පටිපාටිය අතරතුර, ජලභීතික අවධි බිඳවැටීම නම් සංසිද්ධියක් සිදුවනු ඇත (Santai Technologies විසින් කලින් ප්‍රකාශිත යෙදුම් සටහනක් බලන්න: Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography තීරු සහ ඒවායේ යෙදුම්).සාමාන්‍ය C18 තීරු හා සසඳන විට, ශක්තිමත් ධ්‍රැවීය හෝ හයිඩ්‍රොෆිලික් සාම්පල පිරිසිදු කිරීම සඳහා වැඩිදියුණු කරන ලද C18AQ තීරු වඩාත් සුදුසු වේ.මෙම පෝස්ටුවේදී, ශක්තිමත් ධ්‍රැවීය පෙප්ටයිඩයක් නියැදිය ලෙස භාවිතා කර C18AQ තීරුවකින් පිරිසිදු කරන ලදී.එහි ප්රතිඵලයක් වශයෙන්, අවශ්‍යතා සපුරාලන ඉලක්කගත නිෂ්පාදනය ලබා ගන්නා ලද අතර පහත පර්යේෂණ සහ සංවර්ධන කටයුතුවලදී එය භාවිතා කළ හැක.
| උපකරණය | SepaBean™යන්ත්‍රය 2 | |||
| කාට්රිජ් | ග්රෑම් 12 SepaFlash C18 RP ෆ්ලෑෂ් කාට්රිජ් (ගෝලාකාර සිලිකා, 20 - 45 μm, 100 Å, ඇණවුම් අංක:SW-5222-012-SP) | 12 ග්රෑම් SepaFlash C18AQ RP ෆ්ලෑෂ් කාට්රිජ් (ගෝලාකාර සිලිකා, 20 - 45 μm, 100 Å, ඇණවුම් අංකය:SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| තරංග ආයාමය | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| ජංගම අදියර | ද්‍රාවක A: ජලය ද්‍රාවකය B: ඇසිටොනයිට්‍රයිල් | |||
| ප්රවාහ අනුපාතය | 15 mL/min | 20 mL/min | ||
| නියැදි පැටවීම | 30 mg | |||
| Gradient | කාලය (CV) | ද්‍රාවක B (%) | කාලය (මිනි) | ද්‍රාවක B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
ප්රතිඵල සහ සාකච්ඡාව
සාමාන්‍ය C18 තීරුව සහ C18AQ තීරුව අතර ධ්‍රැවීය පෙප්ටයිඩ සාම්පලයේ පිරිසිදු කිරීමේ කාර්ය සාධනය සංසන්දනය කිරීම සඳහා, අපි ආරම්භයක් ලෙස නියැදියේ ෆ්ලෑෂ් පිරිසිදු කිරීම සඳහා සාමාන්‍ය C18 තීරුවක් භාවිතා කළෙමු.රූප සටහන 2 හි පෙන්වා ඇති පරිදි, ඉහළ ජලීය අනුපාතය හේතුවෙන් C18 දාමවල ජලභීතික අවධි බිඳවැටීම හේතුවෙන්, නියැදිය සාමාන්‍ය C18 කාට්රිජ් මත යන්තම් රඳවා තබා ඇති අතර ජංගම අදියර මගින් සෘජුවම ඉවත් කරන ලදී.ප්රතිඵලයක් වශයෙන්, නියැදිය ඵලදායී ලෙස වෙන් කර පිරිසිදු කර නැත.
රූපය 2. සාමාන්‍ය C18 කාට්රිජ් මත ඇති නියැදියේ ෆ්ලෑෂ් ක්‍රොමැටෝග්‍රෑම්.
ඊළඟට, අපි නියැදියේ ෆ්ලෑෂ් පිරිසිදු කිරීම සඳහා C18AQ තීරුවක් භාවිතා කළෙමු.රූප සටහන 3 හි පෙන්වා ඇති පරිදි, පෙප්ටයිඩය ඵලදායි ලෙස තීරුව මත රඳවා තබා ඇති අතර පසුව ඉවත් කරන ලදී.ඉලක්කගත නිෂ්පාදනය අමු සාම්පලයේ ඇති අපද්‍රව්‍ය වලින් වෙන් කර එකතු කරන ලදී.Lyophilization සහ පසුව HPLC විසින් විශ්ලේෂණය කිරීමෙන් පසුව, පිරිසිදු කරන ලද නිෂ්පාදනය 98.2% ක සංශුද්ධතාවයක් ඇති අතර ඊළඟ පියවර පර්යේෂණ සහ සංවර්ධනය සඳහා තවදුරටත් භාවිතා කළ හැකිය.
රූපය 3. C18AQ කාට්රිජ් මත නියැදියේ ෆ්ලෑෂ් වර්ණදේහය.
අවසාන වශයෙන්, SepaFlash C18AQ RP ෆ්ලෑෂ් කාට්රිජ් ෆ්ලෑෂ් වර්ණදේහ පද්ධතිය සමඟ ඒකාබද්ධ වේ SepaBean™ශක්තිමත් ධ්‍රැවීය හෝ හයිඩ්‍රොෆිලික් සාම්පල පිරිසිදු කිරීම සඳහා යන්ත්‍රයට වේගවත් හා ඵලදායී විසඳුමක් ලබා දිය හැකිය.
Santai Technology වෙතින් විවිධ පිරිවිතරයන් සහිත SepaFlash C18AQ RP ෆ්ලෑෂ් කාට්රිජ් මාලාවක් ඇත (වගුව 2 හි පෙන්වා ඇති පරිදි).
| භාණ්ඩ අංකය | තීරු ප්රමාණය | ප්රවාහ අනුපාතය (mL/min) | උපරිම පීඩනය (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ග්රෑම් | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | ග්රෑම් 20 ක් | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 ග්රෑම් | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 ග්රෑම් | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 ග්රෑම් | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 ග්රෑම් | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | ග්රෑම් 300 ක් | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 ග්රෑම් | 40-80 | 250/17.2 |
වගුව 2. SepaFlash C18AQ RP ෆ්ලෑෂ් කාට්රිජ්.ඇසුරුම් ද්රව්ය: ඉහළ කාර්යක්ෂම ගෝලාකාර C18(AQ)-බන්ධිත සිලිකා, 20 - 45 μm, 100 Å.
SepaBean™ යන්ත්‍රයේ සවිස්තරාත්මක පිරිවිතරයන් හෝ SepaFlash ශ්‍රේණියේ ෆ්ලෑෂ් කාට්රිජ් පිළිබඳ ඇණවුම් තොරතුරු සඳහා කරුණාකර අපගේ වෙබ් අඩවියට පිවිසෙන්න.
පසු කාලය: Oct-12-2018