Hongcheng Wang, Bo Xu
යෙදුම් R&D මධ්‍යස්ථානය
හැදින්වීම
නිශ්චල අවධියේ සහ ජංගම අවධියේ සාපේක්ෂ ධ්රැවීයතාව අනුව, ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාව සාමාන්‍ය අවධි වර්ණදේහ (NPC) සහ ප්‍රතිලෝම අදියර වර්ණදේහ (RPC) ලෙස බෙදිය හැකිය.RPC සඳහා, ජංගම අදියරෙහි ධ්රැවීයතාව ස්ථාවර අවධියට වඩා ශක්තිමත් වේ.RPC එහි ඉහළ කාර්යක්ෂමතාව, හොඳ විභේදනය සහ පැහැදිලි රඳවා ගැනීමේ යාන්ත්‍රණය හේතුවෙන් ද්‍රව වර්ණදේහ වෙන් කිරීමේ ක්‍රමවල බහුලව භාවිතා වන එකක් බවට පත්ව ඇත.එබැවින් ඇල්කලෝයිඩ්, කාබෝහයිඩ්‍රේට්, මේද අම්ල, ස්ටෙරොයිඩ්, න්‍යෂ්ටික අම්ල, ඇමයිනෝ අම්ල, පෙප්ටයිඩ, ප්‍රෝටීන යනාදිය ඇතුළු විවිධ ධ්‍රැවීය හෝ ධ්‍රැවීය නොවන සංයෝග වෙන් කිරීම සහ පිරිසිදු කිරීම සඳහා RPC සුදුසු වේ. RPC හි බහුලව භාවිතා වන ස්ථාවර අවධිය වන්නේ C18, C8, C4, phenyl, cyano, amino යනාදී විවිධ ක්‍රියාකාරී කණ්ඩායම් සමඟ බන්ධනය වී ඇති සිලිකා ජෙල් අනුකෘතිය. මෙම බන්ධිත ක්‍රියාකාරී කණ්ඩායම් අතර, බහුලවම භාවිතා වන්නේ C18 වේ.RPC හි 80% කට වඩා දැන් C18 බන්ධිත අදියර භාවිතා කරන බව ඇස්තමේන්තු කර ඇත.එබැවින් C18 වර්ණදේහ තීරුව සෑම රසායනාගාරයක් සඳහාම තිබිය යුතු විශ්වීය තීරුවක් බවට පත්ව ඇත.
C18 තීරුව ඉතා පුළුල් පරාසයක යෙදීම් සඳහා භාවිතා කළ හැකි වුවද, ඉතා ධ්‍රැවීය හෝ අධික ජලාකර්ෂණීය වන සමහර සාම්පල සඳහා, සාමාන්‍ය C18 තීරු එවැනි සාම්පල පිරිසිදු කිරීමට භාවිතා කිරීමේදී ගැටළු ඇති විය හැක.RPC හි, බහුලව භාවිතා වන elution ද්‍රාවක ඒවායේ ධ්රැවීයතාව අනුව ඇණවුම් කළ හැක: ජලය < මෙතනෝල් <ඇසිටොනිට්‍රයිල් < එතනෝල් < tetrahydrofuran < isopropanol.මෙම සාම්පල (ශක්තිමත් ධ්‍රැවීය හෝ අධික ජලාකර්ෂණීය) සඳහා තීරුවේ හොඳින් රඳවා තබා ගැනීම සහතික කිරීම සඳහා, ජංගම අදියර ලෙස ජලීය පද්ධතියේ ඉහළ අනුපාතයක් භාවිතා කිරීම අවශ්‍ය වේ.කෙසේ වෙතත්, ජංගම අදියර ලෙස පිරිසිදු ජල පද්ධතිය (පිරිසිදු ජලය හෝ පිරිසිදු ලුණු ද්‍රාවණය ඇතුළුව) භාවිතා කරන විට, C18 තීරුවේ නිශ්චල අවධියේ ඇති දිගු කාබන් දාමය ජලය වළක්වා එකිනෙක මිශ්‍ර වීමට නැඹුරු වන අතර එමඟින් ක්ෂණික අඩුවීමක් සිදුවේ. තීරුවේ රඳවා ගැනීමේ හැකියාව හෝ රඳවා තබා ගැනීම පවා නැත.මෙම සංසිද්ධිය "හයිඩ්රොෆොබික් අදියර කඩා වැටීම" ලෙස හැඳින්වේ (රූපය 1 හි වම් කොටසෙහි පෙන්වා ඇති පරිදි).මෙතිනෝල් හෝ ඇසිටොනයිට්‍රයිල් වැනි කාබනික ද්‍රාවකවලින් තීරුව සෝදාගත් විට මෙම තත්ත්වය ආපසු හැරවිය හැකි වුවද, එය තවමත් තීරුවට හානි සිදු කළ හැකිය.ඒ නිසා මේ තත්ත්වය ඇති නොවීමට කටයුතු කළ යුතුයි.
රූපය 1. සාමාන්‍ය C18 තීරුවේ (වමේ) සහ C18AQ තීරුවේ (දකුණේ) සිලිකා ජෙල් මතුපිට බන්ධිත අදියරවල ක්‍රමානුරූප රූප සටහන.
ඉහත සඳහන් ගැටළු විසඳීම සඳහා, වර්ණදේහ ඇසුරුම් ද්රව්ය නිෂ්පාදකයින් තාක්ෂණික වැඩිදියුණු කිරීම් සිදු කර ඇත.මෙම වැඩිදියුණු කිරීම්වලින් එකක් වන්නේ සිලිකා ජෙල් මතුපිට වඩාත් ජලාකර්ෂණීය බවට පත් කිරීම සඳහා හයිඩ්‍රොෆිලික් සයනෝ කාණ්ඩ (රූපය 1 හි දකුණු කොටසේ පෙන්වා ඇති පරිදි) හඳුන්වාදීම වැනි සිලිකා අනුකෘතියේ මතුපිට යම් යම් වෙනස් කිරීම් සිදු කිරීමයි.මේ අනුව සිලිකා මතුපිට ඇති C18 දාම ඉතා ජලීය තත්ත්වයන් යටතේ සම්පූර්ණයෙන් දිගු කළ හැකි අතර ජලභීතික අවධිය කඩා වැටීම වැළැක්විය හැකිය.මෙම වෙනස් කරන ලද C18 තීරු ජලීය C18 තීරු ලෙස හැඳින්වේ, එනම් C18AQ තීරු, අධික ජලීය ඉවත් කිරීමේ තත්ත්වයන් සඳහා නිර්මාණය කර ඇති අතර 100% ජලීය පද්ධතියට ඔරොත්තු දිය හැකිය.කාබනික අම්ල, පෙප්ටයිඩ, නියුක්ලියෝසයිඩ් සහ ජල-ද්‍රාව්‍ය විටමින් ඇතුළු ශක්තිමත් ධ්‍රැවීය සංයෝග වෙන් කිරීම සහ පිරිසිදු කිරීම සඳහා C18AQ තීරු බහුලව භාවිතා කර ඇත.
Desalting යනු සාම්පල සඳහා ෆ්ලෑෂ් පිරිසිදු කිරීමේදී C18AQ තීරු වල සාමාන්‍ය යෙදුම් වලින් එකකි, එය පසුකාලීන අධ්‍යයනයන්හි නියැදිය යෙදීම පහසු කිරීම සඳහා නියැදි ද්‍රාවකයේ ඇති ලුණු හෝ බෆර් සංරචක ඉවත් කරයි.මෙම පෝස්ටුවේදී, ශක්තිමත් ධ්‍රැවීයතාවක් සහිත Brilliant Blue FCF නියැදිය ලෙස භාවිතා කර C18AQ තීරුවේ පිරිසිදු කර ඇත.නියැදි ද්‍රාවකය ස්වාරක්ෂක ද්‍රාවණයෙන් කාබනික ද්‍රාවකයක් මඟින් ප්‍රතිස්ථාපනය කරන ලද අතර එමඟින් පහත භ්‍රමණ වාෂ්පීකරණයට පහසුකම් සැලසීම මෙන්ම ද්‍රාවක සහ ක්‍රියාකාරී කාලය ඉතිරි කරයි.තවද, නියැදියේ ඇති සමහර අපද්‍රව්‍ය ඉවත් කිරීමෙන් නියැදියේ සංශුද්ධතාවය වැඩි දියුණු කරන ලදී.
පර්යේෂණාත්මක අංශය
රූපය 2. සාම්පලයේ රසායනික ව්යුහය.
Brilliant Blue FCF මෙම පෝස්ටුවෙහි නියැදිය ලෙස භාවිතා කරන ලදී.අමු සාම්පලයේ සංශුද්ධතාවය 86% ක් වූ අතර නියැදියේ රසායනික ව්යුහය රූප සටහන 2 හි පෙන්වා ඇත. නියැදි ද්‍රාවණය සකස් කිරීම සඳහා Brilliant Blue FCF මිලිග්‍රෑම් 300 කුඩු බොරතෙල් 1 M NaH2PO4 බෆර ද්‍රාවණයක දියකර හොඳින් සොලවන ලදී. සම්පූර්ණයෙන්ම පැහැදිලි විසඳුමක්.නියැදි විසඳුම ඉන්ජෙක්ටරයක් මගින් ෆ්ලෑෂ් තීරුව තුලට එන්නත් කරන ලදී.ෆ්ලෑෂ් පිරිසිදු කිරීමේ පර්යේෂණාත්මක සැකසුම වගුව 1 හි ලැයිස්තුගත කර ඇත.
| උපකරණය | SepaBean™ යන්ත්‍රය2 | |||
| කාට්රිජ් | 12 ග්රෑම් SepaFlash C18 RP ෆ්ලෑෂ් කාට්රිජ් (ගෝලාකාර සිලිකා, 20 - 45 μm, 100 Å, ඇණවුම් අංකය: SW-5222-012-SP) | 12 ග්රෑම් SepaFlash C18AQ RP ෆ්ලෑෂ් කාට්රිජ් (ගෝලාකාර සිලිකා, 20 - 45 μm, 100 Å, ඇණවුම් අංකය:SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| තරංග ආයාමය | 254 nm | |||
| ජංගම අදියර | ද්‍රාවක A: ජලය ද්‍රාවකය B: මෙතනෝල් | |||
| ප්රවාහ අනුපාතය | 30 mL/min | |||
| නියැදි පැටවීම | 300 mg (86% සංශුද්ධතාවය සහිත දීප්තිමත් නිල් FCF) | |||
| Gradient | කාලය (CV) | ද්‍රාවක B (%) | කාලය (CV) | ද්‍රාවක B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
ප්රතිඵල සහ සාකච්ඡාව
නියැදි ලුණු දැමීම සහ පිරිසිදු කිරීම සඳහා SepaFlash C18AQ RP ෆ්ලෑෂ් කාට්රිජ් භාවිතා කරන ලදී.ඉවත් කිරීම ආරම්භයේදී ජංගම අදියර ලෙස පිරිසිදු ජලය භාවිතා කරන ලද පියවර අනුක්රමය භාවිතා කරන ලද අතර තීරු වෙළුම් 10 (CV) සඳහා ධාවනය කරන ලදී.රූප සටහන 3 හි පෙන්වා ඇති පරිදි, ජංගම අදියර ලෙස පිරිසිදු ජලය භාවිතා කරන විට, නියැදිය සම්පූර්ණයෙන්ම ෆ්ලෑෂ් කාට්රිජ් මත රඳවා තබා ඇත.මීලඟට, ජංගම අදියරෙහි මෙතනෝල් සෘජුවම 100% දක්වා වැඩි කරන ලද අතර 7.5 CV සඳහා අනුක්රමය පවත්වා ගෙන ගියේය.නියැදිය 11.5 සිට 13.5 CV දක්වා ඉවත් කර ඇත.එකතු කරන ලද භාගවල, නියැදි ද්‍රාවණය NaH2PO4 බෆර ද්‍රාවණයෙන් මෙතනෝල් වෙත ප්‍රතිස්ථාපනය කරන ලදී.ඉහළ ජලීය ද්‍රාවණයක් සමඟ සසඳන විට, පහත සඳහන් පර්යේෂණ සඳහා පහසුකම් සපයන ඊළඟ පියවරේදී භ්‍රමණ වාෂ්පීකරණය මගින් මෙතනෝල් ඉවත් කිරීම වඩාත් පහසු විය.
රූපය 3. C18AQ කාට්රිජ් මත නියැදියේ ෆ්ලෑෂ් වර්ණදේහය.
ශක්තිමත් ධ්‍රැවීයතාවයේ සාම්පල සඳහා C18AQ කාට්රිජ් සහ සාමාන්‍ය C18 කාට්රිජ් වල රඳවා ගැනීමේ හැසිරීම සංසන්දනය කිරීම සඳහා සමාන්තර සංසන්දනාත්මක පරීක්ෂණයක් සිදු කරන ලදී.SepaFlash C18 RP ෆ්ලෑෂ් කාට්රිජ් භාවිතා කරන ලද අතර නියැදිය සඳහා ෆ්ලෑෂ් වර්ණදේහ රූප සටහන 4 හි පෙන්වා ඇත. සාමාන්‍ය C18 කාට්රිජ් සඳහා, ඉහළම ඉවසාගත හැකි ජලීය අවධි අනුපාතය 90% පමණ වේ.එබැවින් ආරම්භක අනුක්රමය 90% ජලයෙහි 10% මෙතනෝල් ලෙස සකසා ඇත.රූප සටහන 4 හි පෙන්වා ඇති පරිදි, ඉහළ ජලීය අනුපාතය හේතුවෙන් C18 දාමවල ජලභීතික අවධි බිඳවැටීම හේතුවෙන්, නියැදිය සාමාන්‍ය C18 කාට්රිජ් මත යන්තම් රඳවා තබා ඇති අතර ජංගම අදියර මගින් සෘජුවම ඉවත් කරන ලදී.එහි ප්රතිඵලයක් වශයෙන්, නියැදි ඉවත් කිරීම හෝ පිරිසිදු කිරීමේ ක්රියාකාරිත්වය සම්පූර්ණ කළ නොහැක.
රූපය 4. සාමාන්‍ය C18 කාට්රිජ් මත ඇති නියැදියේ ෆ්ලෑෂ් ක්‍රොමැටෝග්‍රෑම්.
රේඛීය අනුක්‍රමණය සමඟ සසඳන විට, පියවර අනුක්රමය භාවිතය පහත වාසි ඇත:
1. නියැදි පිරිසිදු කිරීම සඳහා ද්‍රාවක භාවිතය සහ ධාවන කාලය අඩු වේ.
2. ඉලක්ක නිෂ්පාදිතය තියුණු උච්චයකින් එලියුට් වන අතර එමඟින් එකතු කරන ලද කොටස්වල පරිමාව අඩු වන අතර එමඟින් පහත භ්‍රමණ වාෂ්පීකරණයට මෙන්ම කාලය ඉතිරි කිරීමටද පහසුකම් සපයයි.
3. එකතු කරන ලද නිෂ්පාදිතය වාෂ්පීකරණය කිරීමට පහසු මෙතනෝල් වල ඇති බැවින් වියළීමේ කාලය අඩු වේ.
අවසාන වශයෙන්, දැඩි ලෙස ධ්‍රැවීය හෝ අධික ජලාකර්ෂණීය නියැදිය පිරිසිදු කිරීම සඳහා, SepaBean™ යන්ත්‍රය සමඟ සූදානම් වන ෆ්ලෑෂ් වර්ණදේහ පද්ධතිය සමඟ ඒකාබද්ධ වන SepaFlash C18AQ RP ෆ්ලෑෂ් කාට්රිජ් මඟින් වේගවත් හා කාර්යක්ෂම විසඳුමක් ලබා දිය හැකිය.
SepaFlash Bonded Series C18 RP ෆ්ලෑෂ් කාට්රිජ් ගැන
Santai Technology වෙතින් විවිධ පිරිවිතරයන් සහිත SepaFlash C18AQ RP ෆ්ලෑෂ් කාට්රිජ් මාලාවක් ඇත (වගුව 2 හි පෙන්වා ඇති පරිදි).
| භාණ්ඩ අංකය | තීරු ප්රමාණය | ප්රවාහ අනුපාතය (mL/min) | උපරිම පීඩනය (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ග්රෑම් | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | ග්රෑම් 20 ක් | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 ග්රෑම් | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 ග්රෑම් | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 ග්රෑම් | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 ග්රෑම් | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | ග්රෑම් 300 ක් | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 ග්රෑම් | 40-80 | 250/17.2 |
වගුව 2. SepaFlash C18AQ RP ෆ්ලෑෂ් කාට්රිජ්.
ඇසුරුම් ද්රව්ය: ඉහළ කාර්යක්ෂම ගෝලාකාර C18(AQ)-බන්ධිත සිලිකා, 20 - 45 μm, 100 Å.
logy (වගුව 2 හි පෙන්වා ඇති පරිදි).
පසු කාලය: අගෝස්තු-27-2018