روئي هوانگ، بو سو
ايپليڪيشن آر اينڊ ڊي سينٽر
تعارف
هڪ پيپٽائيڊ هڪ مرڪب آهي جيڪو امينو اسيد جو ٺهيل آهي، جنهن مان هر هڪ منفرد جسماني ۽ ڪيميائي ملڪيت آهي ڇاڪاڻ ته مختلف قسمن ۽ ترتيبن جي ترتيب سان امينو اسيد جي باقيات کي ترتيب ڏئي ٿو.مضبوط مرحلي جي ڪيميائي synthesis جي ترقي سان، مختلف سرگرم peptides جي ڪيميائي synthesis وڏي ترقي ڪئي آهي.تنهن هوندي به، پيپٽائڊ جي پيچيده ٺهڻ جي ڪري، جيڪو مضبوط مرحلن جي ٺهڪندڙ ذريعي حاصل ڪيو ويو آهي، حتمي پيداوار کي قابل اعتماد علحدگي جي طريقن سان صاف ڪيو وڃي.پيپٽائڊس لاءِ عام طور تي استعمال ٿيندڙ صفائي جي طريقن ۾ آئن ايڪسچينج ڪروميٽوگرافي (IEC) ۽ ريورسڊ فيز هاءِ پرفارمنس مائع ڪروميٽوگرافي (RP-HPLC) شامل آهن، جن ۾ گھٽ نموني لوڊ ڪرڻ جي گنجائش، علحدگيءَ واري ميڊيا جي اعليٰ قيمت، پيچيده ۽ قيمتي علحدگيءَ جو سامان، وغيره. ننڍي ماليڪيول پيپٽائيڊس جي تيزيءَ سان صفائي لاءِ (MW <1 kDa)، هڪ ڪامياب ايپليڪيشن ڪيس اڳ ۾ سانتائي ٽيڪنالاجيز پاران شايع ڪيو ويو هو، جنهن ۾ هڪ SepaFlash RP C18 ڪارٽريج استعمال ڪيو ويو هو thymopentin (TP-5) جي تيزيءَ سان صاف ڪرڻ لاءِ. ھدف جي پيداوار جي ضرورتن کي پورو ڪرڻ لاء حاصل ڪيو ويو.
شڪل 1. 20 عام امينو اسيد (ٻيهر تيار ڪيل www.bachem.com تان).
اتي 20 قسم جا امينو اسيد آھن جيڪي عام آھن پيپٽائڊس جي ٺاھڻ ۾.انهن امينو اسيدن کي انهن جي قطبيت ۽ تيزابي-بنيادي ملڪيت جي مطابق هيٺين گروپن ۾ ورهائي سگهجي ٿو: غير پولر (هائيڊروفوبڪ)، پولر (اڻ چارج ٿيل)، تيزابي يا بنيادي (جيئن تصوير 1 ۾ ڏيکاريل آهي).هڪ پيپٽائڊ جي تسلسل ۾، جيڪڏهن امينو اسيد جيڪي تسلسل ٺاهي رهيا آهن اهي گهڻو ڪري پولر آهن (جيئن تصوير 1 ۾ گلابي رنگ ۾ نشان لڳل آهن)، جهڙوڪ سيسٽين، گلوٽامين، اسپارگين، سيرين، ٿرونائن، ٽائروسين وغيره، ته پوءِ هي پيپٽائيڊ شايد مضبوط هجي. polarity ۽ پاڻيء ۾ تمام گھلڻ.ريورسڊ فيز ڪروميٽوگرافي ذريعي انهن مضبوط پولر پيپٽائيڊ نمونن جي صفائي جي عمل دوران، هائيڊروفوبڪ فيز ڪليپس نالي هڪ رجحان واقع ٿيندو (سانٽي ٽيڪنالاجيز پاران اڳ ۾ شايع ٿيل ايپليڪيشن نوٽ جو حوالو ڏيو: هائيڊروفوبڪ فيز ڪليپس، AQ ريورسڊ فيز ڪروميٽوگرافي ڪالمنز ۽ دي).باقاعده C18 ڪالمن جي مقابلي ۾، بهتر C18AQ ڪالمن مضبوط پولر يا هائيڊروفيلڪ نموني جي صفائي لاء تمام مناسب آهن.هن پوسٽ ۾، هڪ مضبوط پولر پيپٽائڊ نموني طور استعمال ڪيو ويو ۽ C18AQ ڪالمن ذريعي صاف ڪيو ويو.نتيجي طور، ھدف جي پيداوار جي ضرورتن کي پورو ڪرڻ لاء حاصل ڪيو ويو ۽ ھيٺ ڏنل تحقيق ۽ ترقي ۾ استعمال ٿي سگھي ٿو.
| اوزار | سيپا بين™مشين 2 | |||
| ڪارٽون | 12 g SepaFlash C18 RP فليش ڪارٽريج (گولي واري سليڪا، 20 - 45 μm، 100 Å، آرڊر نمبر: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP فليش ڪارٽريج (گولي واري سليڪا، 20 - 45 μm، 100 Å، آرڊر نمبر: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| موج | 254 اين ايم، 220 اين ايم | 214 اين ايم | ||
| موبائل مرحلو | محلول A: پاڻي سولوينٽ ب: ايسٽونائيٽريل | |||
| وهندڙ اگھ | 15 ايم ايل / منٽ | 20 ايم ايل / منٽ | ||
| نموني لوڊ ڪرڻ | 30 ملي گرام | |||
| گريجوئيٽ | وقت (CV) | محلول ب (٪) | وقت (منٽ) | محلول ب (٪) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
نتيجا ۽ بحث
باقاعده C18 ڪالمن ۽ C18AQ ڪالمن جي وچ ۾ پولر پيپٽائيڊ نموني جي صفائي جي ڪارڪردگي جو مقابلو ڪرڻ لاءِ، اسان نموني جي فليش صاف ڪرڻ لاءِ باقاعده C18 ڪالمن کي شروعات طور استعمال ڪيو.جيئن ته شڪل 2 ۾ ڏيکاريل آهي، C18 زنجيرن جي هائيڊروفوبڪ مرحلي جي خاتمي جي ڪري، اعلي آبي تناسب جي ڪري، نموني کي باقاعده C18 ڪارٽريج تي برقرار رکيو ويو ۽ سڌو سنئون موبائيل مرحلو طرفان خارج ڪيو ويو.نتيجي طور، نموني کي مؤثر طور تي الڳ ۽ صاف نه ڪيو ويو.
شڪل 2. نموني جو فليش ڪروميٽگرام باقاعده C18 ڪارٽريج تي.
اڳيون، اسان نموني جي فليش صاف ڪرڻ لاء C18AQ ڪالم استعمال ڪيو.جيئن ته شڪل 3 ۾ ڏيکاريل آهي، پيپٽائڊ کي مؤثر طور تي ڪالمن تي برقرار رکيو ويو ۽ پوء ٻاهر ڪڍيو ويو.ھدف جي پيداوار کي خام نموني ۾ نقصن کان الڳ ڪيو ويو ۽ گڏ ڪيو ويو.lyophilization ۽ پوء HPLC پاران تجزيو ڪرڻ کان پوء، صاف ڪيل مصنوعات جي خالصيت 98.2٪ آهي ۽ ايندڙ قدم جي تحقيق ۽ ترقي لاء وڌيڪ استعمال ڪري سگهجي ٿي.
شڪل 3. C18AQ ڪارٽريج تي نموني جو فليش ڪروميٽگرام.
نتيجي ۾، SepaFlash C18AQ RP فليش ڪارٽريج فليش ڪروميٽوگرافي سسٽم سان گڏ SepaBean™مشين مضبوط پولر يا hydrophilic نموني جي پاڪائي لاء هڪ تيز ۽ موثر حل پيش ڪري سگهي ٿو.
هتي آهن SepaFlash C18AQ RP فليش ڪارٽريز جو هڪ سلسلو سانتائي ٽيڪنالاجي جي مختلف وضاحتن سان (جيئن ڏيکاريل آهي ٽيبل 2 ۾).
| شيون نمبر | ڪالمن جي ماپ | وهندڙ اگھ (ايم ايل/منٽ) | وڌ ۾ وڌ دٻاءُ (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 جي | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 گ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 جي | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 جي | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 جي | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 جي | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 جي | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 جي | 40-80 | 250/17.2 |
ٽيبل 2. SepaFlash C18AQ RP فليش ڪارٽريز.پيڪنگ مواد: اعلي ڪارڪردگي گول C18 (AQ) - بانڊ ٿيل سليڪا، 20 - 45 μm، 100 Å.
SepaBean™ مشين جي تفصيلي وضاحتن تي وڌيڪ معلومات لاء، يا SepaFlash سيريز فليش ڪارٽريز تي ترتيب ڏيڻ جي معلومات لاء، مهرباني ڪري دورو ڪريو اسان جي ويب سائيٽ.
پوسٽ جو وقت: آڪٽوبر-12-2018