هانگ چينگ وانگ، بو سو
ايپليڪيشن آر اينڊ ڊي سينٽر
تعارف
اسٽيشنري مرحلي ۽ موبائيل مرحلي جي لاڳاپن جي پولارٽيز جي مطابق، مائع ڪروميٽوگرافي کي عام مرحلو ڪروميٽوگرافي (NPC) ۽ ريورسڊ فيز ڪروميٽوگرافي (RPC) ۾ ورهائي سگھجي ٿو.RPC لاء، موبائل مرحلي جي polarity اسٽيشنري مرحلي جي ڀيٽ ۾ مضبوط آهي.RPC ان جي اعلي ڪارڪردگي، سٺي ريزوليوشن ۽ صاف برقرار رکڻ واري ميڪانيزم جي ڪري مائع ڪروميٽوگرافي جي علحدگيء واري طريقن ۾ سڀ کان وڏي پيماني تي استعمال ٿيل آهي.تنهن ڪري آر پي سي مختلف پولر يا غير پولر مرکبات جي الڳ ڪرڻ ۽ صاف ڪرڻ لاءِ موزون آهي، جن ۾ الڪالائيڊز، ڪاربوهائيڊريٽس، فيٽي ايسڊس، اسٽيرائڊس، نيوڪليڪ ايسڊز، امينو اسيد، پيپٽائيڊس، پروٽين وغيره شامل آهن. سليڪا جيل ميٽرڪس جيڪو مختلف فنڪشنل گروپن سان جڙيل آهي، جنهن ۾ C18، C8، C4، phenyl، cyano، amino وغيره شامل آهن. انهن بانڊ ٿيل فنڪشنل گروپن مان، سڀ کان وڌيڪ استعمال ٿيندڙ هڪ C18 آهي.اهو اندازو آهي ته RPC جي 80 سيڪڙو کان وڌيڪ هاڻي استعمال ڪري رهيا آهن C18 بند ٿيل مرحلو.تنهن ڪري C18 ڪروميٽوگرافي ڪالم بڻجي ويو آهي هڪ آفاقي ڪالم هر ليبارٽري لاءِ.
جيتوڻيڪ C18 ڪالمن ايپليڪيشنن جي تمام وسيع رينج ۾ استعمال ٿي سگهي ٿو، جڏهن ته، ڪجهه نمونن لاء جيڪي تمام پولر يا انتهائي هائيڊروفيلڪ آهن، باقاعده C18 ڪالمن کي مشڪلاتون ٿي سگهن ٿيون جڏهن اهڙي نموني کي صاف ڪرڻ لاء استعمال ڪيو وڃي.آر پي سي ۾، عام طور تي استعمال ٿيل ايليوشن سولوينٽس انهن جي قطبيت جي مطابق ترتيب ڏئي سگهجي ٿو: پاڻي < ميٿانول < acetonitrile < ethanol < tetrahydrofuran < isopropanol.انهن نمونن لاء ڪالمن تي سٺي برقرار رکڻ کي يقيني بڻائڻ لاء (مضبوط پولر يا انتهائي هائيڊروفيلڪ)، آبي سسٽم جو اعلي تناسب ضروري آهي ته موبائل مرحلي طور استعمال ڪيو وڃي.جڏهن ته، جڏهن خالص پاڻي واري نظام کي استعمال ڪيو وڃي (بشمول خالص پاڻي يا خالص لوڻ جو حل) موبائل مرحلي جي طور تي، C18 ڪالمن جي اسٽيشنري مرحلي تي ڊگهي ڪاربن زنجير پاڻي کان بچڻ ۽ هڪ ٻئي سان ملائڻ جي ڪوشش ڪندو آهي، جنهن جي نتيجي ۾ فوري طور تي گهٽجي ويندي آهي. ڪالمن جي برقرار رکڻ جي صلاحيت يا اڃا تائين ڪو برقرار رکڻ.هن رجحان کي سڏيو ويندو آهي "هائيڊروفوبڪ مرحلو ختم ٿيڻ" (جيئن تصوير 1 جي کاٻي حصي ۾ ڏيکاريل آهي).جيتوڻيڪ اها صورتحال واپس ٿي سگهي ٿي جڏهن ڪالمن کي نامياتي محلولن جهڙوڪ ميٿانول يا ايسٽونائيٽريل سان ڌوئي ويندو آهي، اهو اڃا تائين ڪالمن کي نقصان پهچائي سگهي ٿو.تنهن ڪري، اهو ضروري آهي ته اهڙي صورتحال کي روڪڻ لاء.
شڪل 1. سليڪا جيل جي مٿاڇري تي بانڊ ٿيل مرحلن جو اسڪيمي ڊراگرام باقاعده C18 ڪالمن (کاٻي) ۽ C18AQ ڪالمن (ساڄي) ۾.
مٿي ذڪر ڪيل مسئلن کي حل ڪرڻ لاء، ڪروميٽگرافڪ پيڪنگ مواد ٺاهيندڙن کي ٽيڪنيڪل سڌارا ڪيا آهن.انهن سڌارن مان هڪ آهي سليڪا ميٽرڪس جي مٿاڇري تي ڪجهه ترميمون، جيئن ته هائيڊروفيلڪ سائانو گروپن جو تعارف (جيئن تصوير 1 جي ساڄي حصي ۾ ڏيکاريل آهي)، سليڪا جيل جي مٿاڇري کي وڌيڪ هائيڊروفيلڪ بنائڻ لاءِ.اهڙيء طرح سليڪا جي مٿاڇري تي C18 زنجيرن کي مڪمل طور تي وڌايو وڃي ٿو انتهائي آبي حالتن ۾ ۽ هائيڊروفوبڪ مرحلن جي خاتمي کان بچي سگهجي ٿو.اهي تبديل ٿيل C18 ڪالمن کي آبي C18 ڪالمن سڏيو ويندو آهي، يعني C18AQ ڪالمن، جيڪي انتهائي آبي خارجي حالتن لاءِ ٺهيل آهن ۽ 100٪ آبي نظام کي برداشت ڪري سگهن ٿا.C18AQ ڪالمن کي وڏي پيماني تي لاڳو ڪيو ويو آهي علحدگي ۽ مضبوط پولر مرکبن جي صاف ڪرڻ ۾، بشمول نامياتي تيزاب، پيپٽائڊس، نيوڪليو سائڊس ۽ پاڻي ۾ حل ٿيندڙ وٽامن.
صاف ڪرڻ C18AQ ڪالمن جي عام ايپليڪيشنن مان هڪ آهي نمونن لاءِ فليش صاف ڪرڻ ۾، جيڪو نموني جي سالوينٽ ۾ لوڻ يا بفر اجزاء کي ختم ڪري ٿو ته جيئن ايندڙ مطالعي ۾ نموني جي درخواست کي آسان بڻائي سگهجي.هن پوسٽ ۾، شاندار بليو FCF مضبوط پولارٽي سان نموني طور استعمال ڪيو ويو ۽ C18AQ ڪالمن تي صاف ڪيو ويو.نموني محلول کي بفر جي حل مان نامياتي محلول سان تبديل ڪيو ويو، اهڙيء طرح هيٺين روٽري بخاري جي سهولت سان گڏوگڏ سالوينٽس ۽ آپريٽنگ وقت جي بچت.ان کان علاوه، نموني جي پاڪائي کي نموني ۾ ڪجهه نجاست کي ختم ڪندي بهتر ڪيو ويو.
تجرباتي سيڪشن
شڪل 2. نموني جي ڪيميائي جوڙجڪ.
شاندار بليو ايف سي ايف هن پوسٽ ۾ نموني طور استعمال ڪيو ويو.خام نموني جي خالصيت 86٪ هئي ۽ نموني جي ڪيميائي ساخت کي شڪل 2 ۾ ڏيکاريو ويو آهي. نموني جو حل تيار ڪرڻ لاء، 300 ملي گرام پائوڊر خام سالڊ برليئنٽ بليو FCF کي 1 M NaH2PO4 بفر حل ۾ حل ڪيو ويو ۽ چڱيءَ طرح ڇڪيو ويو. مڪمل طور تي واضح حل.نموني جو حل وري فليش ڪالمن ۾ انجيڪٽر ذريعي داخل ڪيو ويو.فليش صاف ڪرڻ جو تجرباتي سيٽ اپ ٽيبل 1 ۾ ڏنل آهي.
| اوزار | SepaBean™ مشين2 | |||
| ڪارٽون | 12 g SepaFlash C18 RP فليش ڪارٽريج (گولي واري سليڪا، 20 - 45 μm، 100 Å، آرڊر نمبر: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP فليش ڪارٽريج (گولي واري سليڪا، 20 - 45 μm، 100 Å، آرڊر نمبر: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| موج | 254 اين ايم | |||
| موبائل مرحلو | محلول A: پاڻي محلول ب: ميٿانول | |||
| وهندڙ اگھ | 30 ايم ايل / منٽ | |||
| نموني لوڊ ڪرڻ | 300 mg (شاندار بليو FCF 86٪ جي پاڪائي سان) | |||
| گريجوئيٽ | وقت (CV) | محلول ب (٪) | وقت (CV) | محلول ب (٪) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
نتيجا ۽ بحث
هڪ SepaFlash C18AQ RP فليش ڪارٽريج نموني صاف ڪرڻ ۽ صاف ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو.اسٽيپ گريڊينٽ استعمال ڪيو ويو جنهن ۾ خالص پاڻي استعمال ڪيو ويو موبائل مرحلي جي طور تي ايليوشن جي شروعات ۾ ۽ 10 ڪالمن جي مقدار (CV) لاءِ هلايو ويو.جيئن ته شڪل 3 ۾ ڏيکاريل آهي، جڏهن خالص پاڻي استعمال ڪندي موبائل مرحلي جي طور تي، نموني مڪمل طور تي فليش ڪارٽريج تي برقرار رکيو ويو.اڳيون، موبائيل مرحلي ۾ ميٿانول سڌو سنئون 100٪ تائين وڌايو ويو ۽ 7.5 CV لاء گريجوئيٽ برقرار رکيو ويو.نموني کي 11.5 کان 13.5 CV تائين ڪڍيو ويو.گڏ ڪيل حصن ۾، نموني حل کي NaH2PO4 بفر حل مان ميٿانول ۾ تبديل ڪيو ويو.انتهائي آبي حل سان مقابلو ڪندي، ميٿانول کي ايندڙ قدم ۾ روٽري بخاري ذريعي هٽائڻ تمام آسان هو، جيڪو هيٺين تحقيق کي آسان بڻائي ٿو.
شڪل 3. C18AQ ڪارٽريج تي نموني جو فليش ڪروميٽگرام.
C18AQ ڪارٽريج ۽ باقاعده C18 ڪارٽريز جي برقرار رکڻ واري رويي جي مقابلي ڪرڻ لاءِ مضبوط پولارٽي جي نموني لاءِ، متوازي مقابلو ٽيسٽ ڪيو ويو.هڪ SepaFlash C18 RP فليش ڪارٽريج استعمال ڪيو ويو ۽ نموني لاءِ فليش ڪروميٽوگرام شڪل 4 ۾ ڏيکاريو ويو. باقاعده C18 ڪارٽريز لاءِ، سڀ کان وڌيڪ برداشت ٿيل آبي مرحلو تناسب اٽڪل 90٪ آهي.تنهن ڪري شروعاتي گريڊ 10٪ ميٿانول تي 90٪ پاڻي ۾ مقرر ڪيو ويو.جيئن ته شڪل 4 ۾ ڏيکاريل آهي، C18 زنجيرن جي هائيڊروفوبڪ مرحلي جي خاتمي جي ڪري، اعلي آبي تناسب جي ڪري، نموني کي باقاعده C18 ڪارٽريج تي سختي سان برقرار رکيو ويو ۽ سڌو سنئون موبائيل مرحلو طرفان خارج ڪيو ويو.نتيجي طور، نموني صاف ڪرڻ يا صاف ڪرڻ جو آپريشن مڪمل نه ٿو ڪري سگھجي.
شڪل 4. نموني جو فليش ڪروميٽگرام باقاعده C18 ڪارٽريج تي.
لڪير جي ترتيب سان مقابلي ۾، قدم جي تدريس جي استعمال جا هيٺيان فائدا آهن:
1. سولوينٽ استعمال ۽ نموني صاف ڪرڻ جو وقت گھٽجي ويو آھي.
2. ھدف واري پراڊڪٽ تيز چوٽي تي نڪرندي آھي، جيڪا گڏ ڪيل حصن جي مقدار کي گھٽائي ٿي ۽ اھڙيءَ طرح ھيٺئين گھمڻ واري بخاري کي آسان بڻائي ٿي ۽ وقت جي بچت به ٿئي ٿي.
3. گڏ ڪيل پراڊڪٽ ميٿانول ۾ هوندو آهي جنهن کي آسانيءَ سان بخار ٿي ويندو آهي، ان ڪري سڪي وڃڻ جو وقت گهٽجي ويندو آهي.
نتيجي ۾، نموني کي صاف ڪرڻ لاءِ جيڪو مضبوط طور تي پولر يا انتهائي هائيڊروفيلڪ آهي، SepaFlash C18AQ RP فليش ڪارٽريز تياري واري فليش ڪروميٽوگرافي سسٽم سان گڏ ملندڙ SepaBean™ مشين هڪ تيز ۽ ڪارائتو حل پيش ڪري سگهي ٿي.
SepaFlash Bonded Series C18 RP فليش ڪارٽريز بابت
هتي آهن SepaFlash C18AQ RP فليش ڪارٽريز جو هڪ سلسلو سانتائي ٽيڪنالاجي جي مختلف وضاحتن سان (جيئن ڏيکاريل آهي ٽيبل 2 ۾).
| شيون نمبر | ڪالمن جي ماپ | وهندڙ اگھ (ايم ايل/منٽ) | وڌ ۾ وڌ دٻاءُ (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 جي | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 گ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 جي | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 جي | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 جي | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 جي | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 جي | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 جي | 40-80 | 250/17.2 |
ٽيبل 2. SepaFlash C18AQ RP فليش ڪارٽريز.
پيڪنگ مواد: اعلي ڪارڪردگي گول C18 (AQ) - بانڊ ٿيل سليڪا، 20 - 45 μm، 100 Å.
logy (جيئن ڏيکاريل جدول 2 ۾).
پوسٽ جو وقت: آگسٽ-27-2018