Применение колонок для сильной анионообменной хроматографии SepaFlash для очистки кислотных соединений

Результаты и обсуждение

Во-первых, смесь образцов разделялась с помощью флэш-картриджа с нормальной фазой, предварительно заполненного обычным диоксидом кремния.Как показано на рисунке 3, два компонента образца элюировались из картриджа один за другим.Затем для очистки образца использовался флэш-картридж SAX.Как показано на рисунке 4, кислотный компонент B полностью остался в картридже SAX.Нейтральный Компонент А постепенно элюировался из картриджа с элюированием подвижной фазы.

Рисунок 3. Флеш-хроматограмма образца на обычном нормально-фазовом картридже.

Рисунок 4. Флеш-хроматограмма образца на картридже SAX.
При сравнении рисунков 3 и 4 видно, что компонент А имеет неодинаковую форму пика на двух разных флэш-картриджах.Чтобы подтвердить, соответствует ли пик элюирования компоненту, мы можем использовать функцию сканирования по всей длине волны, встроенную в управляющее программное обеспечение машины SepaBean™.Откройте экспериментальные данные двух разделений, перетащите индикаторную линию на оси времени (CV) хроматограммы к самой высокой точке и второй по высоте точке пика элюирования, соответствующего Компоненту А, и полного спектра длин волн этих двух точки будут автоматически отображаться под хроматограммой (как показано на рисунках 5 и 6).Сравнивая данные полноволнового спектра этих двух разделений, Компонент А имеет последовательный спектр поглощения в двух экспериментах.Поскольку компонент А имеет неодинаковую форму пика на двух разных картриджах для флэш-памяти, предполагается, что в компоненте А содержатся определенные примеси, которые имеют различное удерживание на картридже с нормальной фазой и картридже SAX.Таким образом, последовательность элюирования для компонента А и примеси на этих двух флэш-картриджах различна, что приводит к непостоянной форме пиков на хроматограммах.

Рисунок 5. Полноволновой спектр компонента А и примеси, разделенной картриджем с нормальной фазой.

Рисунок 6. Полноволновой спектр компонента А и примеси, отделенной картриджем SAX.

Если целевым продуктом, который необходимо собрать, является нейтральный Компонент А, задачу очистки можно легко выполнить, используя непосредственно картридж SAX для элюирования после загрузки образца.С другой стороны, если целевым продуктом, который необходимо собрать, является кислый Компонент B, метод захвата-высвобождения может быть принят лишь с небольшой корректировкой на экспериментальных этапах: когда образец загружается в картридж SAX, а нейтральный Компонент A полностью элюировали органическими растворителями нормальной фазы, заменяют подвижную фазу на раствор метанола, содержащий 5% уксусной кислоты.Ионы ацетата в подвижной фазе будут конкурировать с Компонентом B за связывание с ионными группами четвертичного амина на неподвижной фазе картриджа SAX, тем самым элюируя Компонент B из картриджа с получением целевого продукта.Хроматограмма образца, разделенного в режиме ионного обмена, представлена ​​на рисунке 7.

Рисунок 7. Флэш-хроматограмма Компонента B, элюированного в режиме ионного обмена на картридже SAX.

В заключение, кислый или нейтральный образец можно быстро очистить с помощью картриджа SAX в сочетании с картриджем с нормальной фазой, используя различные стратегии очистки.Кроме того, с помощью функции полноволнового сканирования, встроенной в управляющее программное обеспечение машины SepaBean™, характерный спектр поглощения элюированных фракций можно легко сравнивать и подтверждать, что помогает исследователям быстро определить состав и чистоту элюированных фракций и, таким образом, улучшить Эффективность работы.