Руи Хуан, Бо Сюй
Приложение Центр исследований и разработок
Введение
Пептид - это соединение, состоящее из аминокислот, каждый из которых обладает уникальными физическими и химическими свойствами из -за различных типов и порядка аминокислотных остатков, составляющих ее последовательность. С развитием синтеза твердой фазы химический синтез химический синтез различных активных пептидов добился большого прогресса. Однако из -за сложного состава пептида, полученного с помощью синтеза твердой фазы, конечный продукт должен быть очищен с помощью надежных методов разделения. Обычно используемые методы очистки для пептидов включают ионообменную хроматографию (МЭК) и высокоэффективную жидкую хроматографию (RP-HPLC), которые имеют недостатки низкой способности нагрузки на образцы, высокая стоимость разделения среды, сложные и дорогостоящие оборудование для разделения и т. Д. в котором был использован картридж Sepaflash RP C18 для быстрой очистки тимопентина (TP-5), и целевой продукт, отвечающий требованиям, был получен.
Рисунок 1. 20 Обычные аминокислоты (воспроизведены с www.bachem.com).
Есть 20 видов аминокислот, которые распространены в составе пептидов. Эти аминокислоты можно разделить на следующие группы в соответствии с их полярностью и кислотно-основным свойством: неполярное (гидрофобное), полярное (не заряженное), кислое или базовое (как показано на рисунке 1). В пептидной последовательности, если аминокислоты, составляющие последовательность, являются в основном полярными (как отмечено розовым цветом на рисунке 1), таких как цистеин, глутамин, аспарагин, серин, треонин, тирозин и т. Д. Во время процедуры очистки для этих сильных образцов полярного пептида с помощью перевернутой фазы хроматографии будет происходить феномен, называемый гидрофобным фазовым коллапсом (см. Ранее опубликованное примечание с помощью Santai Technologies: гидрофобное фазовое коллапс, колонны AQ Reversed Phase хроматографии и их приложения). По сравнению с обычными колонками C18, улучшенные колонны C18AQ наиболее подходят для очистки сильных полярных или гидрофильных образцов. В этом посте сильный полярный пептид использовался в качестве образца и очищен колонкой C18AQ. В результате, целевое собрание продукта, требования были получены и могли быть использованы в следующих исследованиях и разработках.
| Инструмент | Sepabean™машина 2 | |||
| Картриджи | 12 г Sepaflash C18 RP Flash Cartridge (сферический кремнезем, 20-45 мкм, 100 Å, заказ Nunber ： SW-5222-012-SP) | 12 G Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridge (сферический кремнезем, 20-45 мкм, 100 Å, номер заказа ： SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Длина волны | 254 нм, 220 нм | 214 нм | ||
| Мобильная фаза | Растворитель A: Вода Растворитель B: ацетонитрил | |||
| Скорость потока | 15 мл/мин | 20 мл/мин | ||
| Образец загрузка | 30 мг | |||
| Градиент | Время (CV) | Растворитель B (%) | Время (мин) | Растворитель B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7,5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29,0 | 87 | |||
Результаты и обсуждение
Чтобы сравнить производительность очистки для образца полярного пептида между обычным столбцом C18 и столбцом C18AQ, мы использовали обычную колонку C18 для очистки вспышки образца в качестве начала. Как показано на рисунке 2, из -за гидрофобной фазы коллапса цепей C18, вызванного высоким водным соотношением, образец едва сохранялся на обычном картридже C18 и был непосредственно элюирован подвижной фазой. В результате образец не был эффективно разделен и очищен.
Рисунок 2. Флэш -хроматограмма образца на обычном картридже C18.
Затем мы использовали столбец C18AQ для очистки вспышки образца. Как показано на рисунке 3, пептид эффективно сохранялся на колонне, а затем элюировал. Целевой продукт был отделен от примесей в необработанном образце и собирал. После лиофилизации, а затем проанализирована с помощью ВЭЖХ, очищенный продукт имеет чистоту 98,2% и может быть дополнительно использовать для следующих шагов исследований и разработок.
Рисунок 3. Флэш -хроматограмма образца на картридже C18AQ.
В заключение, флэш -картридж Sepaflash C18AQ RP в сочетании с системой флэш -хроматографии Sepabean™Машина может предложить быстрое и эффективное решение для очистки сильных полярных или гидрофильных образцов.
Существует ряд картриджей Sepaflash C18AQ RP с различными спецификациями технологии Santai (как показано в таблице 2).
| Номер предмета | Размер столбца | Скорость потока (мл/мин) | Макс (PSI/BAR) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 г | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 г. | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 г | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 г. | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 г. | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 г. | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 г. | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 г. | 40-80 | 250/17.2 |
Таблица 2. Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridges. Упаковочные материалы: высокоэффективная сферическая C18 (AQ)-связанный кремнезем, 20-45 мкм, 100 Å.
Для получения дополнительной информации о подробных спецификациях машины Sepabean ™ или информации о заказе на флэш -картриджах серии Sepaflash, пожалуйста, посетите наш веб -сайт.
Пост времени: 12-2018 октября