Mingzu Yang, bo xu
Centrul de cercetare și dezvoltare a aplicației
Introducere
Antibioticele sunt o clasă de metaboliți secundari produse de microorganisme (inclusiv bacterii, ciuperci, actinomicete) sau compuși similari care sunt sintetizați chimic sau semi-sintetizați. Antibioticele ar putea inhiba creșterea și supraviețuirea altor microorganisme. Primul antibiotic descoperit de om, penicilină, a fost descoperit de microbiologul britanic Alexander Fleming în 1928. El a observat că bacteriile din vecinătatea matriței nu pot crește în vasul de cultură Staphylococcus care a fost contaminat cu mucegai. El a postulat că matrița trebuie să secrete o substanță antibacteriană, pe care a numit -o penicilină în 1928. Cu toate acestea, ingredientele active nu au fost purificate la acel moment. În 1939, Ernst Chain și Howard Florey de la Universitatea Oxford au decis să dezvolte un medicament care să poată trata infecțiile bacteriene. După ce au contactat Fleming pentru a obține tulpini, au extras și purificat penicilina cu succes din tulpini. Pentru dezvoltarea cu succes a penicilinei ca droguri terapeutice, Fleming, Chain și Florey au împărtășit Premiul Nobel pentru Medicină din 1945.
Antibioticele sunt utilizate ca agenți antibacterieni pentru a trata sau preveni infecțiile bacteriene. Există mai multe categorii principale de antibiotice utilizate ca agenți antibacterieni: antibiotice β-lactam (inclusiv penicilină, cefalosporină, etc.), antibiotice aminoglicozide, antibiotice de macrolidă, antibiotice tetracicline, antibioticele totale, incluzând consilierea biologică, semi-synhesis, etc. și sinteză totală. Antibioticele produse prin fermentația biologică trebuie modificate structural prin metode chimice datorită stabilității chimice, efectelor secundare toxice, spectrului antibacterian și altor probleme. După modificarea chimică, antibioticele ar putea obține o stabilitate crescută, efecte secundare toxice reduse, spectru antibacterian extins, rezistență redusă la medicamente, biodisponibilitate îmbunătățită și, prin urmare, îmbunătățirea efectului tratamentului medicamentos. Prin urmare, antibioticele semi-sintetice sunt în prezent cea mai populară direcție în dezvoltarea medicamentelor antibiotice.
În dezvoltarea antibioticelor semi-sintetice, antibioticele au proprietățile de puritate scăzută, o mulțime de produse secundare și componente complexe, deoarece sunt derivate din produsele de fermentare microbiană. În acest caz, analiza și controlul impurităților în antibiotice semi-sintetice este deosebit de importantă. Pentru a identifica și caracteriza eficient impuritățile, este necesar să se obțină o cantitate suficientă de impurități din produsul sintetic al antibioticelor semi-sintetice. Printre tehnicile de pregătire a impurității utilizate frecvent, cromatografia flash este o metodă rentabilă, cu avantaje, cum ar fi cantitatea mare de încărcare a eșantionului, costuri reduse, economisire de timp, etc. Cromatografia flash a fost din ce în ce mai mult de către cercetătorii sintetici.
În acest post, principala impuritate a unui antibiotic aminoglicozid semi-sintetic a fost utilizată ca eșantion și purificată de un cartuș Sepaflash C18AQ combinat cu sistemul de cromatografie flash Sepabean ™ Machine. Produsul țintă care îndeplinește cerințele a fost obținut cu succes, ceea ce sugerează o soluție extrem de eficientă pentru purificarea acestor compuși.
Secțiune experimentală
Eșantionul a fost furnizat cu drag de o companie farmaceutică locală. Eșantionul a fost un fel de carbohidrați amino policicli, iar structura sa moleculară a fost similară cu antibiotice aminoglicozidice. Polaritatea eșantionului a fost destul de mare, ceea ce o face foarte solubilă în apă. Schema schematică a structurii moleculare a eșantionului a fost prezentată în figura 1. puritatea eșantionului brut a fost de aproximativ 88% analizată de HPLC. Pentru purificarea acestor compuși de polaritate ridicată, eșantionul ar fi abia păstrat pe coloanele C18 obișnuite în funcție de experiențele noastre anterioare. Prin urmare, a fost utilizată o coloană C18AQ pentru purificarea eșantionului.
Figura 1. Diagrama schematică a structurii moleculare a eșantionului.
Pentru a pregăti soluția de probă, eșantionul brut de 50 mg a fost dizolvat în 5 ml apă pură și apoi ultrasonicat pentru a face o soluție complet clară. Soluția de probă a fost apoi injectată în coloana flash de către un injector. Configurarea experimentală a purificării flash a fost listată în tabelul 1.
| Instrument | Sepabean ™ Machine 2 | |
| Cartușe | 12 g Sepaflash C18AQ RP Cartuș flash (silice sferică, 20-45μm, 100 Å, număr de comandă ： SW-5222-012-SP (aq)) | |
| Lungime de undă | 204 nm, 220 nm | |
| Faza mobilă | Solvent A: Apă Solvent B: acetonitril | |
| Debit | 15 ml/min | |
| Încărcare a eșantionului | 50 mg | |
| Gradient | Timp (min) | Solvent B (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47.0 | 80 | |
| 52.0 | 80 | |
Rezultate și discuții
Cromatograma flash a eșantionului de pe cartușul C18AQ a fost prezentată în figura 2. Așa cum se arată în figura 2, eșantionul extrem de polar a fost reținut efectiv pe cartușul C18AQ. După liofolizare pentru fracțiile colectate, produsul țintă a avut o puritate de 96,2% (așa cum se arată în figura 3) prin analiza HPLC. Rezultatele au indicat că produsul purificat ar putea fi utilizat în continuare în următoarea etapă de cercetare și dezvoltare.
Figura 2. Cromatograma flash a eșantionului pe un cartuș C18AQ.
Figura 3. Cromatograma HPLC a produsului țintă.
În concluzie, cartușul flash Sepaflash C18AQ RP combinat cu sistemul de cromatografie flash Sepabean ™ Machine ar putea oferi o soluție rapidă și eficientă pentru purificarea probelor extrem de polare.
Despre Sepaflash C18AQ RP Carthood Flash
Există o serie de cartușe Flash Sepaflash C18AQ RP cu specificații diferite de tehnologia Santai (așa cum se arată în tabelul 2).
| Numărul articolului | Dimensiunea coloanei | Debit (ml/min) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabelul 2. Sepaflash C18AQ RP Cartușe Flash. Materiale de ambalare: silice obținută sferică de înaltă eficiență C18 (aq), 20-45 μm, 100 Å.
Pentru informații suplimentare despre specificațiile detaliate ale mașinii Sepabean ™ sau informațiile de comandă despre cartușele flash din seria Sepaflash, vă rugăm să vizitați site -ul nostru web.
Ora post: 26-26 oct. 2018