Aplicarea coloanelor de cromatografie cu schimb anionic puternic SepaFlash în purificarea compușilor acizi

Rezultate și discuții

În primul rând, amestecul de probă a fost separat printr-un cartuş flash în fază normală preambalat cu silice obişnuită.După cum se arată în Figura 3, cele două componente din probă au fost eluate din cartuş una după alta.Apoi, a fost utilizat un cartuş flash SAX pentru purificarea probei.După cum se arată în Figura 4, Componenta B acidă a fost reținută complet pe cartuşul SAX.Componenta neutră A a fost eluată treptat din cartuş cu eluarea fazei mobile.

Figura 3. Cromatograma flash a probei pe un cartuş obişnuit cu fază normală.

Figura 4. Cromatograma flash a probei pe un cartuş SAX.
Comparând Figura 3 și Figura 4, Componenta A are o formă inconsecventă a vârfului pe cele două cartușe flash diferite.Pentru a confirma dacă vârful de eluție corespunde componentului, putem utiliza caracteristica de scanare a lungimii de undă completă care este încorporată în software-ul de control al mașinii SepaBean™.Deschideți datele experimentale ale celor două separări, trageți la linia indicatoare de pe axa timpului (CV) din cromatogramă până la punctul cel mai înalt și al doilea cel mai înalt punct al vârfului de eluție corespunzător Componentei A și spectrul complet al lungimii de undă a acestor două punctele vor fi afișate automat sub cromatogramă (așa cum se arată în Figura 5 și Figura 6).Comparând datele spectrului complet de lungime de undă ale acestor două separări, Componenta A are un spectru de absorbție consistent în două experimente.Din cauza faptului că Componenta A are o formă inconsecventă a vârfului pe două cartușe flash diferite, se speculează că există impurități specifice în Componenta A care are o retenție diferită pe cartușul cu fază normală și pe cartușul SAX.Prin urmare, secvența de eluare este diferită pentru Componenta A și impuritatea de pe aceste două cartușe flash, rezultând o formă inconsistentă a vârfului pe cromatograme.

Figura 5. Spectrul complet al lungimii de undă al Componentei A și impuritățile separate prin cartuş de fază normală.

Figura 6. Spectrul complet al lungimii de undă a componentei A și impuritățile separate prin cartuşul SAX.

Dacă produsul țintă care trebuie colectat este Componenta A neutră, sarcina de purificare poate fi finalizată cu ușurință folosind direct cartuşul SAX pentru eluare după încărcarea probei.Pe de altă parte, dacă produsul țintă de colectat este Componenta B acidă, modalitatea de captare-eliberare ar putea fi adoptată doar cu o ușoară ajustare în etapele experimentale: când proba a fost încărcată pe cartuşul SAX și Componenta A neutră. a fost complet eluat cu solvenți organici în fază normală, comutați faza mobilă la soluție de metanol care conține 5% acid acetic.Ionii de acetat din faza mobilă vor concura cu Componenta B pentru legarea la grupările ionice de amină cuaternară din faza staționară a cartuşului SAX, eluând astfel Componenta B din cartuş pentru a obține produsul țintă.Cromatograma probei separate în modul de schimb ionic a fost prezentată în Figura 7.

Figura 7. Cromatograma flash a componentei B eluată în modul de schimb ionic pe un cartuş SAX.

În concluzie, proba acidă sau neutră ar putea fi purificată rapid cu cartuşul SAX combinat cu cartuşul în fază normală utilizând diferite strategii de purificare.În plus, cu ajutorul funcției de scanare a lungimii de undă completă încorporată în software-ul de control al mașinii SepaBean™, spectrul de absorbție caracteristic al fracțiilor eluate ar putea fi comparat și confirmat cu ușurință, ajutând cercetătorii să determine rapid compoziția și puritatea fracțiilor eluate și îmbunătățind astfel eficienta muncii.