Rui Huang, Bo Xu
Centrul de cercetare și dezvoltare a aplicației
Introducere
O peptidă este un compus compus din aminoacizi, fiecare având proprietăți fizice și chimice unice, datorită diferitelor tipuri și ordinii reziduurilor de aminoacizi care constituie secvența sa. Odată cu dezvoltarea sintezei chimice în fază solidă, sinteza chimică a diferitelor peptide active a făcut progrese mari. Cu toate acestea, datorită compoziției complicate a peptidei obținute prin sinteza în fază solidă, produsul final trebuie purificat prin metode de separare fiabile. The commonly used purification methods for peptides include ion exchange chromatography (IEC) and reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC), which have the disadvantages of low sample loading capacity, high cost of separation media, complicated and costly separation equipment, etc. For the rapid purification of small molecule peptides (MW < 1 kDa), a successful application case was previously published by Santai Technologies, in which Pentru purificarea timopentinei (TP-5), a fost utilizat un cartuș de sepaflash RP C18 și pentru purificarea rapidă a timopentinei (TP-5) și a fost obținută produsul țintă care îndeplinește cerințele.
Figura 1. 20 aminoacizi comuni (reprodusi de pe www.bachem.com).
Există 20 de tipuri de aminoacizi care sunt comuni în compoziția peptidelor. Acești aminoacizi pot fi împărțiți în următoarele grupuri în funcție de proprietatea lor de polaritate și acid-bază: non-polară (hidrofobă), polară (neîncărcată), acidă sau de bază (așa cum se arată în figura 1). Într -o secvență peptidă, dacă aminoacizii care constituie secvența sunt în mare parte polari (așa cum sunt marcați în culoarea roz în figura 1), cum ar fi cisteina, glutamina, asparagina, serina, treonina, tirozina, etc., atunci această peptidă ar putea avea o polaritate puternică și ar fi extrem de solubilă în apă. În timpul procedurii de purificare pentru aceste probe puternice de peptide polare prin cromatografie în fază inversă, va apărea un fenomen numit colaps în faza hidrofobă (consultați o notă de aplicație publicată anterior de Santai Technologies: colaps de fază hidrofobă, coloanele de cromatografie în fază inversă și aplicațiile lor). În comparație cu coloanele C18 obișnuite, coloanele îmbunătățite C18AQ sunt cele mai potrivite pentru purificarea probelor polare sau hidrofile puternice. În acest post, o peptidă polară puternică a fost utilizată ca eșantion și purificată de o coloană C18AQ. Drept urmare, produsul țintă care îndeplinește cerințele a fost obținut și ar putea fi utilizat în următoarele cercetări și dezvoltare.
| Instrument | Sepabean™Mașină 2 | |||
| Cartușe | 12 g Sepaflash C18 RP Flash Cartuș (silice sferică, 20-45 μm, 100 Å, Nunber de comandă ： SW-5222-012-SP) | 12 g Sepaflash C18AQ RP Cartuș flash (silice sferică, 20-45 μm, 100 Å, număr de comandă ： SW-5222-012-SP (aq)) | ||
| Lungime de undă | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Faza mobilă | Solvent A: Apă Solvent B: acetonitril | |||
| Debit | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Încărcare a eșantionului | 30 mg | |||
| Gradient | Timp (CV) | Solvent B (%) | Timp (min) | Solvent B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Rezultate și discuții
Pentru a compara performanța de purificare pentru eșantionul peptidelor polare între coloana C18 obișnuită și coloana C18AQ, am utilizat o coloană C18 obișnuită pentru purificarea flash a eșantionului ca început. Așa cum se arată în figura 2, datorită prăbușirii în faza hidrofobă a lanțurilor C18 cauzate de un raport apos ridicat, proba abia a fost păstrată pe cartușul C18 obișnuit și a fost eluat direct de faza mobilă. Drept urmare, eșantionul nu a fost separat și purificat eficient.
Figura 2. Cromatograma flash a eșantionului pe un cartuș C18 obișnuit.
În continuare, am folosit o coloană C18AQ pentru purificarea flash a eșantionului. Așa cum se arată în figura 3, peptida a fost reținută efectiv pe coloană și apoi eluată. Produsul țintă a fost separat de impuritățile din eșantionul brut și colectat. După liofilizare și apoi analizat de HPLC, produsul purificat are o puritate de 98,2% și ar putea fi utilizat în continuare pentru cercetarea și dezvoltarea în etapă următoare.
Figura 3. Cromatograma flash a eșantionului pe un cartuș C18AQ.
În concluzie, Sepaflash C18AQ RP Flash cartuș combinat cu sistemul de cromatografie flash Sepabean™Mașina ar putea oferi o soluție rapidă și eficientă pentru purificarea probelor polare sau hidrofile puternice.
Există o serie de cartușe Flash Sepaflash C18AQ RP cu specificații diferite de tehnologia Santai (așa cum se arată în tabelul 2).
| Numărul articolului | Dimensiunea coloanei | Debit (ml/min) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabelul 2. Sepaflash C18AQ RP Cartușe Flash. Materiale de ambalare: silice obținută sferică de înaltă eficiență C18 (aq), 20-45 μm, 100 Å.
Pentru informații suplimentare despre specificațiile detaliate ale mașinii Sepabean ™ sau informațiile de comandă despre cartușele flash din seria Sepaflash, vă rugăm să vizitați site -ul nostru web.
Timpul post: 12 octombrie 2018